Clostridium difficile-toxín AB - Synevo

Všeobecné informácie a odporúčania

Clostridium difficile - sporulovaný anaeróbny grampozitívny bacil - je zodpovedný za produkciu pseudomembranóznej kolitídy a hnačky vyvolanej antibiotikami.

Aj keď vedci už dlho poukazovali na toxíny C. difficile, až v roku 1970 sa potvrdila ich úloha pri vývoji pseudomembranóznej kolitídy. .

C. difficile produkuje najmenej 2 toxíny nazývané A a B. Toxín A, enterotoxín, spôsobuje zvýšenú sekréciu tekutín a zápal v črevnej sliznici. Toxín B, ktorý má in vitro cytotoxický účinok asi 1 000-krát silnejší ako toxín A, pôsobí s ním synergicky. Zatiaľ čo toxín A je produkovaný takmer všetkými kmeňmi C. difficile podieľajúcimi sa na nástupe choroby, nedávno sa ukázalo, že niektoré kmene vylučujú iba toxín B4. .

Kolitída vyvolaná C.difficile je výsledkom nerovnováhy bakteriálnej flóry hrubého čreva, kolonizácie C.difficile a produkcie toxínov. Antibiotická liečba je zodpovedná za zmenu flóry a hlavným cieľom infekcie sú hospitalizovaní ľudia. Ku kolonizácii dochádza fekálno-orálnou cestou. C. difficile tiež vytvára tepelne odolné spóry, ktoré môžu pretrvávať v prostredí niekoľko mesiacov až niekoľko rokov. Ak prevláda kontaminácia, môžu sa v nemocniciach a na iných jednotkách starostlivosti vyskytnúť epidémie hnačky. Normálna črevná flóra je proti kolonizácii, ale antibiotická liečba potlačením flóry uľahčuje množenie C.difficile 1. .

Toto ochorenie bolo pôvodne opísané u pacientov liečených klindamycínom, v súčasnosti sa však predpokladá, že akékoľvek antibiotikum môže spôsobiť pseudomembranóznu kolitídu. V štúdiách zahŕňajúcich veľký počet pacientov bolo viac ako 70% prípadov spojených s podávaním cefalosporínov (najmä druhej a tretej generácie) 3. Ampicilín a amoxicilín nasledujú podľa frekvencie. Menej sa podieľajú makrolidy a iné penicilíny. Ochorenie môžu príležitostne spôsobiť aminoglykozidy, florochinolóny, trimetoprim-kotrimoxazol, imipeném a meropeném. Aj krátke podávanie antibiotika môže spôsobiť kolitídu. Riziko je vyššie v prípade dlhodobej liečby a kombinácie antibiotík 1 .

U starších ľudí a pacientov so zníženou imunitou je najväčšia pravdepodobnosť vzniku kolitídy vyvolanej C. difficile. Aj keď malé deti sú často prenášačmi kmeňov Clostridium difficile, ktoré vylučujú toxíny, klinicky manifestná infekcia v tejto vekovej skupine je neobvyklá.

Kolonizácia vyvolaná C. difficile generuje širokú škálu klinických stavov, od stavu bezpríznakového nosiča, miernej samolimitujúcej hnačky po pseudomembranóznu kolitídu a fulminantnú kolitídu. Najzávažnejšími komplikáciami sú toxický megakolón, perforácia hrubého čreva a zápal pobrušnice. U väčšiny pacientov sa objaví hnačka počas alebo bezprostredne po začatí liečby antibiotikami. U 25-40% pacientov sa však príznaky nestanú skôr ako 10 týždňov po ukončení liečby antibiotikami. Boli opísané aj niektoré prípady spontánneho ochorenia u pacientov bez predchádzajúcej liečby antibiotikami; 1; 3; 4 .

Klinický obraz najčastejšie zahŕňa:

-mierna alebo stredne ťažká hnačka, zriedka krvavá;

-kolická bolesť brucha;

Diagnóza kolitídy vyvolanej C. difficile by mala byť podozrenie u každého pacienta s hnačkou, ktorý bol v posledných 2 mesiacoch liečený antibiotikami a/alebo hnačka začala 72 hodín (alebo viac) po hospitalizácii.

Pre stanovenie vhodnej terapie je dôležitá detekcia toxínov C. difficile. Ak klinické prejavy nevymiznú po ukončení inkriminovanej antibiotickej liečby, odporúča sa perorálne podanie vankomycínu, metronidazolu alebo bacitracínu.

Rutinná kultivácia baktérie sa neodporúča z dôvodu častej izolácie kmeňov vylučujúcich netoxíny 3 .

Test vykonaný v našom laboratóriu detekoval toxín A a/alebo B vo výkaloch imunochromatografickou technikou 2 .

Odobratý exemplár - čerstvo vylúčené výkaly; odporúčané množstvo je 1-2 g vytvorených výkalov alebo 1-2 ml tekutých výkalov; vzorky odobraté z rektálneho výteru 3 nie sú akceptované .

Zberová nádoba - jednorazová nádoba na výkaly; pridávanie konzervačných látok je zakázané 2 .

Po zbere potrebné spracovanie - analýza sa vykonáva na čerstvo emitovanom výkale maximálne do 3 hodín od zberu (najlepšie). Ak to nie je možné, vzorka sa bude skladovať pri teplote 2 - 8 ° C najviac 3 dni. Na spracovanie sa určité množstvo homogenizovanej vzorky spracuje špeciálnym riedidlom na solubilizáciu toxínov a odstredí sa na oddelenie supernatantu 2. .

Vyskúšajte stabilitu - po zbere musí byť vzorka čo najskôr prepravená do laboratória; vzorka je stabilná 3 dni pri 2-8 ° 2 .

Metóda - imunochromatografická. Množstvo zriedenej vzorky sa zmieša s roztokom konjugátu 1 (obsahuje špecifické monoklonálne protilátky proti toxínu A a toxínu B Clostridium difficile konjugovaným s farebnými mikročasticami) a s roztokom konjugátu 2 (obsahuje špecifické protilátky proti biotinylovanému A a toxínu B). ). Určitý objem tejto zmesi sa prevedie do vyhradeného okna testovacieho boxu; krabička obsahuje streptavidín imobilizovaný v testovacom páse a kozie anti-imunoglobulínové protilátky v kontrolnom páse. Špecifické protilátky sa naviažu na antigén vo vzorke a tvoria komplexné „antigén-sendvičové“ protilátky. Komplexy migrujú kapilárami, dostávajú sa do oblasti obsahujúcej testovací prúžok, viažu sa na streptavidín prítomný v tuhej fáze a v okne s výsledkami sa dajú považovať za čierno zafarbený pás akejkoľvek intenzity. Pri absencii toxínu A a/alebo B vo vzorke nebude viditeľná žiadna páska. Skúška sa validuje, iba ak sa v kontrolnom okienku 2 získa čierny pás akejkoľvek intenzity .

Referenčné hodnoty

Toxín Clostridium difficile A/B - negatívny.

Výsledky sú vyjadrené kvalitatívne: pozitívne/negatívne 2 .

Limity a interferencie

Negatívny výsledok nevylučuje prítomnosť stavu spojeného s C. difficile. Falošne negatívny výsledok môže mať nasledujúce príčiny:

-nesprávny odber, preprava alebo skladovanie vzorky;

-nízke hladiny toxínov A/B pod detekčným limitom metódy;

1. MUDr. Craig A Gronczewski, MUDr. Jonathan P Katz. Clostridium obtiažna kolitída. eMedicine Gastroenterology (aktualizácia v auguste 2006). Typ odkazu: Internetová komunikácia.

2. Laboratórium Synevo. Konkrétne odkazy na použitú technológiu spracovania 2010. Typ odkazu: Katalóg.