Demonštračný archív online prostredia - smernica 67548EWG pre aproximáciu právnych a

B.32. 1. metóda

B.32. 1.1. úvod

Pozri všeobecný úvod časť B

B.32. 1.2. Definície

Pozri všeobecný úvod časť B

B.32. 1.3. Referenčné látky

B.32. 1.4. Princíp metódy

Testovaná látka sa obvykle podáva skupinám testovaných zvierat 7 dní v týždni po väčšiu časť životného cyklu, a to vhodným spôsobom podávania, jednou dávkou na skupinu. Počas a po expozícii sa u testovaných zvierat každý deň sledujú príznaky intoxikácie, najmä vývoj nádorov

B.32. 1.5. Kritériá kvality

B.32. 1.6. Opis metódy

Pred začiatkom experimentu sa zvieratá aklimatizujú najmenej na 5 dní v podmienkach experimentálneho ustajnenia a kŕmenia. Pred začatím experimentu sa zdravé mladé zvieratá náhodne rozdelia do požadovaného počtu liečených a kontrolných skupín.

Výhodným experimentálnym zvieraťom je potkan. Na základe výsledkov predchádzajúcich štúdií je možné použiť aj iné druhy zvierat (hlodavce alebo nehlodavce). Testy sa majú vykonať na mladých zdravých zvieratách z bežných kmeňov laboratórnych zvierat; podaním testovanej látky by sa malo začať primerané obdobie po odstavení od matky.

Na začiatku experimentu by variabilita telesnej hmotnosti zvierat nemala byť vyššia ako ± 20% priemernej hodnoty. Ak stanoveniu subchronickej orálnej toxicity predchádza dlhodobá štúdia, mali by sa v obidvoch prípadoch použiť rovnaké druhy zvierat alebo kmene testovaných zvierat.

Počet a pohlavie

U hlodavcov by sa malo na každú dávku a zodpovedajúcu kontrolnú skupinu použiť najmenej 100 zvierat (50 samíc a 50 samcov). Samice nesmú byť ani vrhované, ani nesmú byť tehotné. Ak sa majú zvieratá počas pokusu usmrtiť, musí sa celkový počet zvierat zvýšiť o počet zvierat, ktoré sa majú usmrtiť pred koncom experimentu.

Dávky a frekvencia expozície

Mali by sa použiť najmenej tri dávkové skupiny a ďalšia kontrolná skupina. Najvyššia dávka sa má zvoliť tak, aby sa vyskytli iba nepatrné príznaky intoxikácie, ako napríklad oneskorený prírastok telesnej hmotnosti (menej ako 10%). Normálny život zvierat by však nemal byť ovplyvnený žiadnymi následkami okrem následkov súvisiacich s nádorom.

Najnižšia dávka by nemala mať vplyv na normálny priebeh rastu a vývoja alebo na životnosť zvierat a nemala by spôsobovať príznaky toxických účinkov. Normálne by to nemalo byť menej ako 10 percent najvyššej dávky.

Priemerná dávka je medzi najvyššou a najnižšou dávkou.

Pri výbere dávok je potrebné brať do úvahy údaje z predchádzajúcich experimentov.

Expozícia je zvyčajne denná. Ak sa látka podáva v pitnej vode alebo sa zmieša s krmivom, musí byť voda alebo krmivo pre zvieratá vždy prístupné.

S výnimkou vystavenia testovanej látke musí kontrolná skupina vo všetkých ohľadoch zodpovedať skupinám experimentálnych zvierat.

Za zvláštnych podmienok, napr. Pri použití aerosólu v inhalačných štúdiách alebo emulgátora s neznámymi biologickými účinkami v štúdiách orálnej toxicity, odporúčame použitie ďalšej neošetrenej kontrolnej skupiny, ktorej sa vehikulum nesmie podať.

Používa sa hlavne orálne, dermálne a inhalačne. Voľba spôsobu podania závisí od fyzikálnych a chemických vlastností testovanej látky a od typu expozície človeka.

Ak sa testovaná látka absorbuje z gastrointestinálneho traktu a je možná expozícia u ľudí orálnou cestou, mala by sa zvoliť orálna cesta podania, pokiaľ neexistujú žiadne kontraindikácie. Testovaná látka sa má zvieratám podať v krmive, rozpustená v pitnej vode alebo v tobolkách.

Je žiaduce denné podávanie počas 7 dní v týždni, pretože pri päťdňovom rytme počas obdobia bez podávania je možné zotavenie alebo zníženie príznakov intoxikácie, a môže tak ovplyvniť výsledok a hodnotenie. Z praktických dôvodov sa však päťdňový cyklus podávania považuje za prijateľný.

Kožnú expozíciu aplikáciou na pokožku je možné zvoliť tak, aby simulovala jeden z hlavných spôsobov expozície u ľudí; slúži tiež ako model na vyvolanie kožných zmien.

Pretože štúdie o inhalácii spôsobujú väčšie technické problémy v porovnaní s inými spôsobmi podávania, mali by ste tu uviesť podrobnejšie pokyny. Je potrebné poznamenať, že intratracheálna instilácia je platnou alternatívou v osobitných prípadoch.

V prípade dlhodobej expozície sa ako základ obvykle berie predpokladaná expozícia človeka, po ktorej sú zvieratá vystavené 6 hodín denne počas 5 dní pri rovnomernej koncentrácii v testovacej komore (prerušovaná expozícia). Alebo sa predpokladá možné vystavenie životného prostredia, pri ktorom sú zvieratá vystavené testovanej látke po dobu 22 až 24 hodín počas 7 dní (nepretržitá expozícia) a je zabezpečená jedna hodina denne na kŕmenie a údržbu komory súčasne. V obidvoch prípadoch sú zvieratá obvykle vystavené stálej koncentrácii testovanej látky. Hlavný rozdiel, ktorý je potrebné zvážiť medzi prerušovanou a nepretržitou expozíciou, je ten, že v prvom prípade sa zvieratá môžu zotaviť z účinkov dennej expozície počas 17 - 18 hodinového obdobia bez vystavenia a dlhšieho víkendového obdobia.

Ktorá z dvoch foriem expozície sa vyberie, závisí od cieľov príslušnej štúdie a od ľudských podmienok, ktoré sa majú simulovať s testom. Je však potrebné zohľadniť niektoré technické ťažkosti. Napríklad prínos nepretržitej expozície pri simulovaní podmienok prostredia bude pravdepodobne vyvážený potrebou poskytnúť zvieratám vodu a krmivo, ako aj potrebou sofistikovanejšej (a spoľahlivejšej) techniky na výrobu aerosólu a pary a monitorovacie techniky.

Pri pokusoch na zvieratách by sa mal použiť inhalačný systém, ktorý umožňuje dynamickú rýchlosť vzduchu s rýchlosťou výmeny vzduchu najmenej dvanásťkrát za hodinu, aby sa zabezpečil primeraný obsah kyslíka a rovnomerné rozdelenie testovanej látky v atmosfére. Testovacie komory pre kontrolu aj pre testované zvieratá by mali mať rovnaký dizajn a konštrukciu, aby sa vytvorili v každom ohľade porovnateľné podmienky - s výnimkou vystavenia testovanej látke.

V testovacej komore sa obvykle vytvára mierny podtlak, aby sa zabránilo úniku testovanej látky z komory. Testovacie komory by mali zabezpečiť, aby sa testované zvieratá stlačili čo najmenej k sebe. Aby sa zabezpečila stabilita atmosféry v inhalačnej komore, celkový objem testovaných zvierat by nemal presiahnuť 5% objemu komory.

Musia sa vykonať tieto merania alebo kontroly:

Pri dennom pozorovaní zvierat by sa mala osobitná pozornosť venovať zmenám na koži, srsti, očiach, slizniciach, dýchacom a obehovom systéme, autonómnom a centrálnom nervovom systéme, ako aj somatomotorickým a behaviorálnym vzorcom.

Pravidelné pozorovanie zvierat je potrebné, aby sa čo najviac zabezpečilo, že sa počet zvierat počas štúdie nezníži v dôsledku kanibalizmu, autolýzy tkanív alebo chýb pri premiestňovaní zvierat. Umierajúce zvieratá by mali byť vybrané, usmrtené a rozrezané.

Klinické príznaky a úmrtnosť by sa mali zaznamenávať pre každé zviera. Vývoj nádorov musí byť sledovaný s osobitnou pozornosťou, musí byť zaznamenaný čas ich vzniku, lokalizácia, rozsah, vzhľad a progresia každého jasne viditeľného alebo hmatateľného nádoru.

Príjem potravy (a spotreba vody, ak sa testovaná látka podáva s pitnou vodou) by sa mal stanovovať týždenne počas prvých 13 týždňov štúdie a potom v trojmesačných intervaloch, pokiaľ si zdravie zvierat alebo ich telesná hmotnosť nevyžadujú iné opatrenia.

Telesná hmotnosť každého zvieraťa by sa mala zaznamenávať raz týždenne počas prvých trinástich týždňov testu a potom najmenej raz za štyri týždne.

Ak pozorovanie zvierat naznačuje zhoršenie zdravotného stavu v priebehu štúdie, musí sa u chorých zvierat vykonať rozdielny krvný obraz.

Po 12 mesiacoch, 18 mesiacoch a pred usmrtením sa zo všetkých zvierat pripraví krvný náter. Diferenciálny krvný obraz sa odoberá zvieratám zo skupiny s najvyššou dávkou a z kontrolnej skupiny. Ak to naznačujú výsledky tohto vyšetrenia, najmä však posledná analýza vykonaná pred usmrtením, alebo údaje z patologických vyšetrení, mal by sa urobiť rozdielny krvný obraz aj pre nasledujúcu nižšiu skupinu (skupiny).

Úplná pitva sa vykoná u všetkých zvierat, vrátane tých, ktoré uhynuli počas experimentu alebo boli usmrtené z dôvodu choroby. Musia sa zachovať všetky rozpoznateľné nádory alebo tkanivá s podozrivými zmenami.

Nasledujúce orgány a tkanivá sa majú uchovať vo vhodnom médiu pre akékoľvek neskoršie histopatologické vyšetrenie: všetky viditeľné zmeny, mozog - vrátane tkanivových častí drene/mozgu, cerebelárna a mozgová kôra, hypofýza, štítna žľaza/prištítna žľaza, tkanivo týmusu, priedušnica a pľúca, srdce, Aorta, slinné žľazy, pečeň, slezina, obličky, nadobličky, pankreas, pohlavné žľazy, maternica, ďalšie pohlavné orgány, koža, pažerák, žalúdok, dvanástnik, jejunum, ileum, slepé črevo, hrubé črevo, konečník, močový mechúr, reprezentatívne lymfatické uzliny, prsná žľaza, svaly stehna, Nervy periférneho systému, hrudná kosť s kostnou dreňou, stehenná kosť - vrátane povrchu kĺbu, chrbtica, krk, hrudník a krížová oblasť, oči.

Instilácia pľúc a močového mechúra fixačným roztokom predstavuje optimálnu ochranu týchto tkanív; V inhalačných štúdiách je takáto fixačná metóda pľúc predpokladom optimálneho histopachologického vyšetrenia. Pri inhalačných štúdiách musí byť chránený celý dýchací trakt vrátane nosa, hltana a hrtana.

Orgány všetkých zvierat, ktoré uhynuli alebo boli usmrtené počas testu, ako aj všetkých zvierat z kontrolných skupín a skupín s vysokou dávkou sa podrobia úplnému histopatologickému vyšetreniu;
všetky nádory alebo podozrivé zmeny vo všetkých skupinách;
Ak existuje signifikantný rozdiel vo frekvencii neoplastických zmien medzi skupinou s najvyššou dávkou a kontrolnou skupinou, mal by sa príslušný orgán alebo tkanivo podrobiť histopatologickému vyšetreniu aj v ostatných skupinách s dávkou;
ak je miera prežitia v skupine s najvyššou dávkou významne nižšia ako v kontrolnej skupine, musí sa úplne preskúmať nasledujúca skupina s nižšou dávkou;
Ak je možné preukázať toxické účinky v skupine s najvyššou dávkou, ktorá môže mať vplyv na vývoj nádoru, musí sa úplne preskúmať nasledujúca skupina s nižšou dávkou.

B.32. 2. Údaje

Údaje majú byť zhrnuté v tabuľkovej forme. To musí preukazovať tieto informácie pre každú testovanú skupinu: počet zvierat na začiatku testu, počet zvierat s nádormi zistenými počas testu, čas detekcie a počet zvierat, u ktorých bol nádor zistený po pitve. Výsledky sa vyhodnotia vhodnou štatistickou metódou. Môže sa na to použiť uznávaná štatistická metóda.

B.32. 3. Záverečná správa

B.32. 3.1. správa

Pokiaľ je to možné, v protokole o skúške sa musí uviesť:

Živočíšne druhy, zvieracie kmene, pôvod. Podmienky ustajnenia, kŕmenie.
Testovacie podmienky:

Opis expozičného prístroja

vrátane konštrukcie, typu, rozmerov, zdroja vzduchu, systému na generovanie častíc a aerosólov, klimatizačného systému, úpravy odpadového vzduchu a typu umiestnenia zvierat v testovacej komore počas vykonávania testov. Musia byť opísané zariadenia na meranie teploty, vlhkosti a, ak je to potrebné, stability koncentrácie aerosólu alebo veľkosti častíc.

Tieto údaje je potrebné zhrnúť do tabuľky, uviesť priemerné hodnoty a zohľadniť výkyvy (napr. Štandardná odchýlka). Musia obsahovať tieto informácie:

B.32. 3.2. tlmočenie

Pozri všeobecný úvod časť B; G

B.32. 4. Literatúra

Pozri všeobecný úvod časť B; H

environment-online - ukážková verzia

Všetky kompletný Texty v aktuálnej verzii v ročnom predplatnom
Poplatok za použitie: 90, - € v čistom (základná licencia)

(v súčasnosti cca 7200 titulov viď prehľad - bez rozdelenia do tematických oblastí)

Ceny a objednávka

Prístupový kód vám bude zaslaný v krátkej dobe