DNA Chlamydia pneumoniae; Ústredná vojenská pohotovostná fakultná nemocnica Dr.
DNA Chlamydia pneumoniae
Všeobecné informácie
Chlamydia je malý intracelulárny väzobný prokaryotický parazit (0,2 - 1 µm), ktorý má obidve bakteriálne vlastnosti (syntetizuje RNA a DNA, má stenu a bunkovú membránu podobnú gramnegatívnym baktériám, je citlivý na antibiotiká cyklínového typu) a vírus (množí sa iba v živých eukaryotických bunkách, nemôže syntetizovať ATP, ktorý poskytujú hostiteľské bunky).
Od všetkých mikroorganizmov sa však líši konkrétnym rastovým cyklom, ktorý sa vyznačuje 2 odlišnými formami:
• elementárny teliesko (EC) prispôsobené mimobunkovej existencii;
• sieťovaný teliesko (CR), prispôsobené intracelulárnemu prostrediu (intracytoplazmatické).
Elementárne telieska sú veľmi infekčné a po vstupe do tela sa pripevňujú k bunkovej membráne a sú endocytované. Intracelulárne endozóm nefúzuje s lyzozómami, ako to býva v prípade iného internalizovaného materiálu, keď chlamýdie zostávajú vo fagocytovanom vezikule počas celého životného cyklu. Krátko po vstupe do bunky sa EC transformuje na CR, ktorá je väčšia, nemôže infikovať ďalšie bunky a delí sa binárne vo vnútri vakuol („intracytoplazmatické chlamydiové inklúzie“). Po asi 36 hodinách sa CR reorganizuje na EC, takže po 48-72 hodinách môže byť celá cytoplazma bunky nahradená inklúziami obsahujúcimi stovky/tisíce EC. Aj keď je cytoplazma bunky takmer úplne obsadená EC, bunková funkcia je ovplyvnená minimálne. K uvoľneniu elementárnych teliesok môže dôjsť exocytózou inklúzií alebo lýzou hostiteľských buniek. EC sú schopné infikovať nové bunky, buď v rovnakom organizme, alebo v novom hostiteľovi. Životný cyklus C. pneumoniae je teda rozdelený medzi elementárne telieska, ktoré sú schopné infikovať nových hostiteľov, ale nemôžu sa množiť, a sieťované telieska, ktoré sa množia, ale nie sú schopné spôsobiť novú infekciu.
Nedávne klasifikácie rozdeľujú chlamýdie na 4 rodiny, z ktorých najdôležitejšia v ľudskej patológii je fam. Chlamydiaceae, ktoré obsahuje dva rody:
• rod Chlamydia - najdôležitejším predstaviteľom je C. trachomatis;
• rod Chlamydophila - C. pneumoniae, C. psittaci, C. pecorum, C. abortus atď.
Pneumónia a bronchitída sú najbežnejšie choroby spojené s C. pneumoniae. V sérii klinických štúdií bolo 10% prípadov zápalu pľúc a približne 5% prípadov zápalu priedušiek a prínosových dutín u dospelých pripísaných mikroorganizmom.
Príznaky infekcie C. pneumoniae sú nerozoznateľné od iných príčin zápalu pľúc. Medzi ne patrí upchatie nosa, kašeľ, horúčka a dýchavičnosť. Väčšina prípadov zápalu pľúc je relatívne mierna a nevyžaduje hospitalizáciu. Avšak aj v miernych prípadoch je úplné zotavenie pomalé aj napriek adekvátnej antibiotickej liečbe a kašeľ a malátnosť môžu pretrvávať niekoľko týždňov po nástupe choroby.
S infekciou C. pneumoniae je tiež spojených niekoľko chronických chorôb. U pacientov s respiračnými infekciami vyvolanými C. pneumoniae v anamnéze je vyššia pravdepodobnosť vzniku astmatickej bronchitídy, čo naznačuje, že tieto mikroorganizmy môžu byť dôležitým faktorom pri rozvoji astmy alebo exacerbácií astmy.
Kultivačné techniky na izoláciu mikroorganizmov sú namáhavé a časovo náročné; Molekulárne testovanie je rýchly spôsob detekcie DNA pre C. pneumoniae v rôznych respiračných sekrétoch, čo uľahčuje skoré zavedenie vhodnej antibiotickej liečby. V nedávnej štúdii u detí s respiračnými infekciami bola senzitivita a špecificita testu PCR na diagnostiku akútnej infekcie 63,6%, respektíve 100%.
Odporúčania pre stanovenie chlamýdií - DNA - detekcia pľúcnych infekcií.
Výcvik pacientov - nie je to potrebné.
Odobratý exemplár - a) hltanový alebo nazofaryngeálny exsudát; b) tekutina získaná výplachom priedušiek alebo bronchoalveolárnym výplachom, tracheálnou alebo bronchiálnou aspiráciou, spútom.
Zberová nádoba - a) suchý nárazník (bez transportného média); b) sterilná nádoba.
Zozbierané množstvo - b) minimálne 2 ml.
Po zbere potrebné spracovanie - nie je to potrebné.
Príčiny odmietnutia dôkazov - nedostatočné množstvo na analýzu; kontaminácia vzorky; príliš staré vzorky.
Vyskúšajte stabilitu - vzorky sú pred extrakciou nukleových kyselín stabilné 48 hodín pri 2–4 ° C.
Metóda a interpretácia výsledkov
Metóda - PCR v reálnom čase Light-Cycler: reťazová polymerizačná reakcia s detekciou nahromadeného produktu PCR v reálnom čase, meraním emitovanej fluorescencie (kvalitatívny test).
Referenčné hodnoty - Chlamydia - nezistiteľná DNA.
Detekčný limit - 200 detí/ml.
Interpretácia výsledkov
Detekcia chlamýdií - DNA v respiračných sekrétoch naznačuje klinickú diagnózu infekcie vyvolanej Chlamydia pneumoniae.
Limity a interferencie
Aj keď PCR je metóda, ktorá poskytuje rýchlu a spoľahlivú diagnostiku, môžu sa vyskytnúť falošne negatívne výsledky vo vzorkách, ktoré obsahujú veľmi málo mikroorganizmov.