Elektroforéza sérových bielkovín - Synevo
Všeobecné informácie
Sérové proteíny vykonávajú v tele rôzne funkcie:
• komponenty nárazníkových systémov;
• imunologické látky (imunoglobulíny);
• nosná úloha, zabezpečujúca transport určitých iónov a molekúl (haptoglobín, prealbumín, transferín);
• úloha regulácie aktivity rôznych proteolytických enzýmov (antioprotézy: alfa1-antitrypsín, alfa2-makroglobulín);
• úloha pri regulácii onkotického tlaku 2 .
Súčasnou metódou separácie sérových proteínov používanou v laboratóriách lekárskej biochémie je elektroforéza. Používajú sa pevné podklady a alkalické pH, pri ktorom sú všetky bielkovinové zložky negatívne nabité a migrujú na kladný pól. Na elektroforete sa po zafarbení proteíny objavujú vo forme pásov, ktorých optická hustota sa meria, pričom každý pás má maximálnu absorpciu. Elektroforézou sa za vyššie uvedených podmienok získa päť frakcií: sérový albumín, a1, a2, b, g - globulíny 3. Niektoré systémy na elektroforézu môžu diferencovať zónu b na dva odlišné pásma b1 a b2, čo vedie k celkovo 6 proteínovým frakciám.
Albumín, a1 a b) sa objavujú vo forme homogénnych, dobre definovaných pruhov. a2 a g sa javia ako rozptýlené pásy a zlomok g predstavuje v strednej časti intenzívnejšie zafarbenú oblasť 2 .
Odporúčania pre elektroforézu sérových bielkovín - detekcia monoklonálnych gamapatií; hodnotenie sérových bielkovín a stavu výživy 3 .
Výcvik pacientov - nalačno (nalačno) alebo po jedle 1 .
Odobratý exemplár - krv 1 .
Zberová nádoba - vacutainer bez antikoagulancia s/bez separačného gélu 1 .
Po zbere potrebné spracovanie - oddeľte sérum odstredením 1 .
Skúšobný objem - minimálne 0,5 ml ser 1 .
Príčiny odmietnutia dôkazov - sérum hemolyzované alebo neuchovávané pri 2 - 8 ° C 1 .
Stabilita vzorky (súvisí s laboratóriami v krajine) - separované sérum je stabilné 4 dni pri izbovej teplote alebo jeden týždeň pri 2 - 8 ° C 1 .
Pracovná metóda (súvisí s laboratóriami v krajine)- elektroforeticky (v agarovom géli) nasledované denzitometrickým skenovaním získaných frakcií 1 .
Referenčné hodnoty (týkajúce sa laboratórií v krajine) - sú závislé od 2 rokov
V prípade systému, ktorý oddeľuje 6 frakcií, sa používajú tieto referenčné hodnoty:
Príčiny odmietnutia vzorky (týkajúce sa centrálneho laboratória): vzorka hemolyzovaná alebo skladovaná pri 2 - 8 ° C
Stabilita vzorky (súvisí s centrálnym laboratóriom): 10 dní pri 2 - 8 ° C, 2 mesiace pri -20 ° C
Pracovná metóda (súvisiace s centrálnym laboratóriom): Kapilárna elektroforéza vo voľnom roztoku
Referenčné hodnoty (týkajúce sa centrálneho laboratória):
| Albumín | 58,9 - 73,4 | 57,4 - 71,4 | 57,4-69 | 57,5-67,7 | 57,1 - 67,2 | 55,8 - 66,1 |
| Alfa-1 globulín | 3,2 - 11,7 | 3-5 | 3,2 - 5,4 | 3,3 - 5,4 | 3,2 - 4,9 | 2,9 - 4,9 |
| Alfa-2 globulín | 10.6-14 | 10.2- 16.1 | 10,7 - 15,5 | 10. - 14.8 | 8.9-13 | 7,1 - 11,8 |
| Beta-1 globulín | 4,8 - 7,9 | 5,3 - 6,9 | 5,6 - 7 | 5,2-7 | 5,1 - 6,9 | 4,7 - 7,2 |
| Beta-2 globulín | 2,1 - 3,3 | 2,1 - 3,6 | 2,3 - 3,5 | 2,6 - 4,2 | 2,9 - 5,2 | 3,2 - 6,5 |
| Gama globulín | 3,50 - 9,7 | 4,2-11 | 5,8 - 12,1 | 7,7 - 14,8 | 9.8- 16.9 | 11.1- 18.8 |
Interpretácia výsledkov 3
Na uľahčenie interpretácie výsledkov bude popísaná každá z 5 frakcií s komponentnými proteínmi: (pozri obrázok 8.1.2) 2
Zníženie sérového albumínu (hypoalbuminémia) sa vyskytuje pri rôznych patologických stavoch a má rôzne významy (podvýživa, malabsorpcia, nefrotický syndróm, neoplazmy). K zvýšeniu albumínu dochádza po dehydratácii. Vo zvláštnych prípadoch sa v oblasti migrácie albumínu nachádza ďalší prúžok kvôli niektorým genetickým variáciám bez klinického významu (aloalbuminémia a bisalbuminémia).
Zóna 1 odráža hlavne koncentráciu alfa1-antitrypsínu v sére, takže zníženie tejto frakcie sa zistí pri deficite alfa1-antitrypsínu spojenom s určitými pľúcnymi chorobami (emfyzém so skorým nástupom) a pečeňou (neonatálna hepatitída). Nárasty sa zaznamenávajú pri všetkých zápalových reakciách („reaktant v akútnej fáze“). V ojedinelých prípadoch môže získanie ďalšieho širokého pásma v tejto oblasti naznačovať prítomnosť alfa-fetoproteínu.
Zóna 2 sa skladá z 2 bielkovinových zložiek: alfa2 makroglobulínu a haptoglobínu.
Zvýšená hladina a2 sa vyskytuje pri akútnych infekciách, akútnej reumatoidnej artritíde, arteritíde, nefrotickom syndróme, cukrovke, novotvaroch; pokles tejto frakcie možno zistiť pri ťažkej akútnej pankreatitíde, hepatocelulárnych léziách, diseminovaných syndrómoch intravaskulárnej koagulácie, hemolytických anémiách, megaloblastických anémiách.
Zóna b sa skladá z 2 odlišných pásov: bl zodpovedajúci transferínu a b2, ktoré zahŕňajú frakcie komplementu C3 a C4. Treťou zložkou tejto zóny je beta-lipoproteín, ktorého pás sa môže prekrývať s pásom transferínu alebo C3, alebo sa môže nachádzať v zóne beta-gama.
Hladiny globulínu v sére b zvyšujú anémiu z nedostatku železa a biliárnu cirhózu a znižujú autoimunitné ochorenia (SLE), nefrózu, ochorenie pečene, neoplazmy, akútne a chronické infekcie. V niektorých prípadoch mnohopočetného myelómu typu IgA možno v tejto oblasti zistiť prítomnosť monoklonálnej zložky.
Zóna g gama-globulíny sú najdôležitejšie globulíny. Do tejto kategórie patria imunoglobulíny (IgG, IgA, IgM, IgD a IgE). Anomálie, ktoré nimi utrpeli, sa prekladajú buď rôznymi deficitmi, alebo polyklonálnou alebo monoklonálnou hypergamaglobulinémiou.
Percento g globulínov klesá pri agamaglobulinémii, hypogamaglobulinémii a nefrotických syndrómoch. Hypogamaglobulinémia môže byť vrodená alebo získaná a dá sa ľahko zistiť elektroforézou sérových bielkovín, keď sú koncentrácie hlavných 3 tried imunoglobulínov nízke (IgG, IgA a IgM). Prítomnosť hypogamaglobulinémie u dospelých si vyžaduje ďalšie vyšetrenia s cieľom zistiť možné lymfoproliferatívne ochorenie (myelóm s ľahkými reťazcami, chronická lymfocytová leukémia, lymfómy).
Polyklonálne zvýšenia gamaglobulínov naznačujú chronický imunitný proces spojený s ochorením pečene (chronická aktívna hepatitída, cirhóza), kolagénovým ochorením (SLE, reumatoidná artritída), novotvarmi (napr. Hodgkinova choroba), chronickou myelo-monocytovou leukémiou. V týchto prípadoch je hypergamaglobulinémia spôsobená aktiváciou veľkého počtu klonov plazmatických buniek, ktoré uvoľňujú imunoglobulíny. Je potrebné spomenúť charakteristický vzhľad „mostnej“ alkoholovej cirhózy beta-gama, ktorý je na géle zobrazený ako intenzívne sfarbená oblasť medzi zónami beta a gama.
Niekedy v oblasti gama môžete vidieť malé, úzke pásy nazývané oligoklonálne, ktoré sa vyskytujú u pacientov s hepatitídou, chorobami imunitného komplexu, syndrómom získanej imunodeficiencie, angioimunoblastickým lymfómom.
Medzi monoklonálne gamapatie patrí veľké množstvo klinických a biologických stavov obvykle spojených s malignitami (mnohopočetný myelóm, Waldenströmova choroba, amyloidóza, lymfómy), ale tiež s niektorými benígnymi stavmi alebo dokonca s absenciou patologickej zmeny (monoklonálne gamapatie neurčitého významu). V týchto prípadoch je monoklonálna zložka (pás M) detegovaná na proteínovej elektroforéze, ktorá je výsledkom proliferácie jediného klonu plazmatických buniek. Na géli sa monoklonálne zložky objavujú vo forme úzkych, jasne definovaných pruhov a po denzitometrickom skenovaní sa získajú charakteristické „vrcholy“, ktoré sa dajú nájsť kdekoľvek medzi alfa a gama zónou, vďaka variabilnej elektroforetickej mobilite, ale často v gama zóne.
Monoklonálne imunoglobulíny sú štrukturálne a biochemicky homogénne a sú tvorené jedným typom ľahkého reťazca (kappa alebo lambda). Do obehu sa môžu uvoľňovať kompletné imunoglobulíny alebo iba ich podjednotky (napr. Ľahké monoklonálne reťazce nazývané Bence-Jonesove proteíny). Prítomnosť monoklonálnej zložky bude uvedená v bulletine o konečnej analýze pacienta s odporúčaním vykonať elektroforézu sérových proteínov s imunofixáciou 1-3 .
V nasledujúcej tabuľke sú zhrnuté predložené informácie: