Močové proteíny ako ukazovatele diabetickej nefropatie - PDF na stiahnutie zadarmo
Klin Woschenschr (1988) 66: 892-898 Klinische Wochenschrift Springer-Verlag 1988 Močové proteíny ako indikátory diabetickej nefropatie M.H. Weberovo centrum pre vnútorné lekárstvo na univerzite v G6ttingene, nefrologická a reumatologická klinika (vedúci: prof. Dr. F. Scheler) Močové proteíny ako ukazovatele súhrnu diabetickej nefropatie. Počas posledných desiatich rokov niekoľko štúdií dokázalo použiteľnosť kvantifikácie albumínu v moči pri včasnej diagnostike diabetickej nefropatie. Vďaka vysokej presnosti a porovnateľne nízkemu metodickému úsiliu sa zdôraznilo iba stanovenie albumínu. Paralelné štúdie vzoriek bielkovín v moči však pomocou elektroforézy dodecylsulfátu sodného - polyakrylamidelu - preukázali zvýšené vylučovanie iných proteínov s vysokou a nízkou molekulovou hmotnosťou v rôznych štádiách diabetickej nefropatie. V dôsledku toho rozšírenie samotného testu na albumín zahŕňajúce makromolekulárne (napr. Transferín) a mikromolekulárne (napr.
-l-mikroglobulín) sa zdá byť zmysluplný. Podľa tejto štúdie sú obidve metodologické línie (kombinovaná kvantitatívna a kvalitatívna analýza) užitočnými nástrojmi na včasné zistenie a následné sledovanie diabetickej nefropatie. Kľúčové slová: Diabetická nefropatia - Analýza moču - Albumín - Jednotlivé proteíny -
-l-mikrogtobulín - súhrn SDS-PAGE. Početné štúdie za posledných 10 rokov preukázali, že kvantifikácia albumínu v moči je vhodná na včasnú diagnostiku diabetickej nefropatie. Vzhľadom na jeho vysokú presnosť a malú metodickú náročnosť sa pozornosť sústredila na stanovenie albumínu.
--M = a-1 mikroglobulín; DDM = inzulín-dependentný diabetes mellitus; GBM = Glomerulfire Basement Membrane; Mr = relatívna molekulová hmotnosť; NDDM = diabetes mellitus nezávislý od inzulínu; PAGE = elektroforéza na polyakrylamidovom géli; SDS = dodecylsulfát sodný (laurylsulfát sodný) ben. Paralelné skúmanie močového proteínového spektra pomocou SDS polyakrylamidovej gélovej elektroforézy však ukazuje, že v rôznych štádiách diabetickej nefropatie sa čoraz viac vylučujú aj ďalšie vysokomolekulárne a nízkomolekulárne proteíny, takže rozšírenie stanovenia čistého albumínu o jednu makromolekulárnu (napr. Transferín) a jednu mikromolekulárnu ( napr. c
-l-mikroglobulín) má zmysel. Podľa predloženej štúdie môžu byť obidve metódy (kombinovaná kvantitatívna a kvalitatívna analýza) použité pri včasnej diagnostike a monitorovaní priebehu diabetickej nefropatie. Kľúčové slová: diabetická nefropatia - analýza moču - albumín - jednotlivé proteíny - 0
-1-mikroglobulín SDS-PAGE Proteinúria detegovateľná jednoduchými laboratórnymi metódami (napr. Testovacie prúžky) u 1/celého existujúceho inzulín-dependentného (DDM) a non-insutín-dependentného (NDDM) diabetes mellitus sa považuje za „signum mali ominis“ (Scheler 1977) signalizuje štádium diabetickej nefropatie (4. stupeň), klinicky zjavnú komplikáciu so všeobecne nepriaznivým priebehom do 10 - 20 rokov po diagnostikovaní cukrovky. Tento vývoj ovplyvňuje asi 40% diabetikov závislých od inzulínu (Andersen 1983). Zdá sa, že rodinné vysokotlakové zaťaženie má osobitný význam (Krolewski 1988).)
Staršie štúdie o prirodzenom priebehu juvenilného diabetu ukázali, že viac ako 2/3 inzulín-dependentných diabetikov 10 rokov po klinickej diagnóze proteinúrie (definovanej ako vylučovanie proteínov)
Nadbytočné množstvo albumínu je možné určiť semikvantitatívne pomocou testovacích prúžkov v moči a kvantitatívne pomocou metód s rôznymi vetvami (zjavná proteinúria). Na jednej strane skoré štrukturálne zmeny v bazálnej membráne prispievajú k mikroalbuminúrii (ktorá sa podľa Feldta-Rasmussena (1986) neobmedzuje na GBM) a na druhej strane k posunom v izoelektrickom bode (p) plazmatického albumínu v dôsledku zvýšenej neenzymatickej glykozylácie. Názory na optimálnu detekciu mikrobuminúrie sa líšia. Na klinické účely je krátkodobý odber moču na stanovenie klírensu albumínu (denná vláknina nad 2 hodiny v pokoji alebo 8 hodín v noci) ľahko reprodukovateľný. Stanovenie albumínu v 24-hodinovom moči má naopak za následok nepresnú zmiešanú hodnotu denného moču (kolísanie v dôsledku rôznych úrovní fyzickej aktivity) a nočného pokojového moču. Spontánne vzorky moču odobraté v Pra-
894 M.H. Weber: Močové proteíny pri diabetickej nefropatii i 1. Ranný moč ALBUMN testovacie prúžky (poz.> 300 mg/l) POSTV = klinická anamnestická proteinúria. Rady. (Diabetes) ALBUMN-LATEX-TEST rozhodovací limit 30 mg/l Podozrenie na začiatok DABETSCHE NEPHROPATHE H
anamnest. Poznámky (premietanie)
klin. Dôsledky 7 POSTV F NEGATV] Opakovanie testu Najlepšie
SKÚŠKA T TAT VERZA MKROALBUMN,
ige kontroly NEGATV - diagnostika rozšírenej proteinúrie - Abkl
-Koncentrácie im v spontánnom moči na zníženie falošne pozitívnych hodnôt pri 30 mg/1 (Mogensen 1986; Howey 1987) a 12 rag/1, je uvedené v tabuľke 1. Tabuľkové znázornenie rôznych parametrov moču a séra pre 162 DDM a Pacienti s NDDM s ochorením menej ako 12 rokov. 1. odsek: Koncentrácia bielkovín v 1. rannom moči, S-kreatinín a CK
ea (MW ± SD); 2. odsek: Percento patologických vzoriek bielkovín v moči, ako aj koncentrácie albumínu a g-l-m v 1. rannom moči DDM NDDM 12Y. 12R. (n = 65) (n = 46) (n = 34) (n = 17) Proteinúria (g/l) 0,19_ + 0,06 0,38_ + 0,54 0,26_ + 0,05 0,77_ + 1,04 S-kreatinín (mg/dl) 0,9 ± 0,16 1,06 + _0,36 1,03 + 0,26 1,12_ + 0,28 CKro, (ml/min) 102 ± 19,6 98 4-32,6 86 4-30,1 70 - + 16,8 SDS-PAGE% norma, 66,2 37 44,1 29,4% cesta, 33,8 63 55,9 70,6 albumín (% _ 12 handra/l) 10,7 41,3 23,5 52,9 rng /] [] TF e43,4 600 500 400 300 200 100 - 0 - 200,6 7o.6
9.R 27,8 6,2 13,9 6,7 35,9 8,7 16,6 12 rokov 12 rokov Obr. 2. Distribúcia priemerných spontánnych koncentrácií spontánneho moču (1. ranný moč) transferínu (TF), albumínu (ALB) a c
-l- mikrogl6bulín (A1M) u 162 diabetikov závislých od inzulínu (DDM) a nezávislých od inzulínu (NDDM) s menej (12 r.) 12 r/dobou ich trvania (údaje v handre/l)
M.H. Weber: močové proteíny pri diabetickej nefropatii 897% PAGE vzor 70 norma 70 6o 50 40 30 20-loo Ab. LMW HMW E T [1] T [11
i HMW/LMW DDM 12 J doba trvania% PAGE vzorka 70-60-50-40-30-20-10. b o forma Ab.LMW HMW/LMW Nm
HMW t J "'"' " t J NDDM 12 J Trvanie Obr. 3a a b. Percento fyziologických (norm.) A patologických vzoriek bielkovín v moči u 162 diabetikov. a Inzulín-dependentní (DDM) diabetici s menej (12 rokmi) 12 rokmi/ich trvaním choroby. b Diabetici nezávislí od inzulínu (NDDM) s menej (12 rokmi) 12 rokmi/dĺžkou ich trvania ochorenia (Alb. = mikroalbuminúria; LMW = tubul/ir; HMW = glomerul/ir; HMW/LMW = glomerulo-tubul/ir zmiešané) v porovnaní so zodpovedajúcimi V skupine s DDM bolo väčšie percento pacientov s NDDM už v období 12 rokov (obr. 2) priemernými koncentráciami transferínu, albumínu a e-1-M - v porovnaní so skupinou 12 rokov v nefrotickom rozmedzí. Vysoký podiel makroproteínov v obidvoch skupinách sa potvrdil na SDS-PAGE (obrázky 3a a b), ktoré v každom prípade vykazovali zodpovedajúce profily glomerulárnych proteínov. V skupine NDDM> 12 rokov sa vzory tubulov a glomerulo-tubulírov nachádzali častejšie ako v porovnateľnej skupine DDM, ktorá tiež významne vzrástla v jednej skupine
-vyjadruje vylučovanie l-mikroglobulínu. Rozdelené na 10 rokov v skupine NDDM. V našich skupinách s DDM a NDDM s ochorením trvajúcim viac ako 12 rokov bol na SDS-PAGE badateľný stále relatívne vysoký podiel vzorov fyziologického vylučovania 30 - 40%. Aj keď podľa štúdií Feldta-Rasmussena (1986) nie je veľmi pravdepodobné, že sa v tejto skupine vyvinú spitproteinúrie bez jediného prodromálneho štádia, zdá sa, že pre túto skupinu pacientov je užitočné aj dôsledné sledovanie vylučovania bielkovín močom. Podľa nášho posúdenia možno na stanovenie použiť kombinované stanovenie individuálneho proteínu, ako aj mikro-SDS elektroforézu-
898 M.H. Weber: Močové proteíny v diabetickej nefropatii sú dobre zaznamenané v štádiách diabetickej nefropatie a ich priebehu.
-l-mikroglobulín dopĺňa predchádzajúci nedostatok informácií o vývoji tubulov