P r o j e k t K e r a t i n a s e, A b s h l u s s b e r i h t, strana 1 - PDF zadarmo
K eratináza P roject, záverečná správa, 3 0. 0 4. 2 0 1 4 P et 1 Záverečná správa Projekt: Vývoj enzymatického čističa odtoku na báze keratináz AZ 28332 Trvanie: 01.01.2012 31.12.2013 Partner projektu: ASA Spezialenzyme GmbH (ASA, Koordinátor) University of Mannheim, Institute for Biological Process Engineering (HSM) Bio-Logic Control, Prof. Dr. Peter M. Kunz (BLC) Autor: Dr. Arno Cordes, ASA Spezialenzyme GmbH Ines Lobes, Mannheim University Prof. Dr. Peter M. Kunz, kontrola biologickej logiky Financoval: Deutsche Bundesstiftung Umwelt
P r o j e k t K e r a t i n a s e, A b s c h l u s s b e r i h t, 3 0. 0 4. 2 0 1 4 P age 5 Vývoj enzymatického čističa odtokov na báze keratinázy. 2. Prezentácia pracovných krokov a použitých metód 2.1 Pracovné kroky Projekt je možné rozdeliť na nasledujúce pracovné kroky a pracovné balíčky: WP 1 Vývoj prípravku na štiepenie keratínu 1.1 Test technických proteáz na trhu s ohľadom na ich aktivitu keratinázy 1.2 Zvýšenie aktivity keratinázy pridaním biologických redukčných činidiel 1.3 Zlepšenie dostupnosť substrátu fyzikálno-chemickými metódami 1.4 Skríning na mikroorganizmy degradujúce keratín 1.5 Stanovenie optimálnych kultivačných podmienok 1.6 Výroba vzoriek keratinázy fermentáciou vybraných mikroorganizmov WP 2 Vývoj biologického čističa odtoku 2.1 Vývoj laboratórneho testovacieho systému na odstránenie upchatia potrubí na základe sklenených potrubných systémov a štandardizovaných zátok 2.2 Skúmanie účinku najlepšej keratinázy v laboratórnom meradle 2.3 Skúmanie účinku enzýmových zmesí v poloindustriálnom meradle v L abortestsystem 2.4 Náčrt marketingového konceptu
P r o j e k t K e r a t i n a s, A b s c h l u s s b e r i h t, 3 0. 0 4. 2 0 1 4 strana 10 inkubujte pri 45 ° C. Po pridaní 2 ml enzýmu odoberte vzorky po hodinách podľa tabuľky 1 (dvojnásobné hodnoty pre dávky enzýmu, jediné pre kontrolné dávky). Zmiešajte 2 ml prebytku s 2 ml 10% roztoku TCA. Šarže sa centrifugujú 15 minút pri 5 000 ot./min., Odstráni sa supernatant a zmeria sa absorbancia pri 440 nm. Pre absorbancie> 1 musí byť vzorka zriedená dest. Voda na riedenie. Po inkubácii sa nechá usadiť, zvyšok sa opatrne odstráni, zvyšok sa resuspenduje v 4 ml deionizovanej vody, centrifuguje sa z neho supernatant, zvyšok sa vymrazuje, stanoví sa TS Výsledky. Tabuľka 3 ukazuje zvýšenie extinkcie pri 440 nm ako funkciu inkubačného času. Iba s redukčným činidlom ditioničitanom sodným je možné merať zvýšenie pre proteázu K a N-01 v porovnaní so šaržami bez redukčného činidla. Ak sa však zohľadnia všetky slepé hodnoty, je zrejmé (Tab. 4), že takmer všetky prístupy vedú k záporným hodnotám. Je možné, že azofarbivo je konvertované redukčnými činidlami. Podporuje to pozorovanie, že supernatanty v týchto dávkach boli viac modré ako žltozelené.
P r o j e k t K e r a t i n a s e, A b s c h l u s b e r i c h t, 3 0. 0 4. 2 0 1 4 S e i te 24 Lo_Bak_Kompost Summer Lo_Bak_Friseur Lo_Bak_Reiterhof Wenz Lo_Bak_Kompostfirma
P r o j e k t K e r a t i n a s e, A b s c h l u s s b e r i h t, 3 0. 0 4. 2 0 1 4 S e i te 25 Vidno, že niečo narástlo na všetkých tanieroch, zatiaľ čo tanier kaderníka narástol najmenej. Najmä na hubových tanieroch vidno, že rastú rôzne kmene. Nasledujúci obrázok 5a-h zobrazuje doštičky s agarom pre banky Lo_Bak a Lo_Pil s ľudskými vlasmi po inkubačnej dobe 7 dní. 5a: Lo_Bak_Kompost leto 5b: Lo_Bak_Friseur 5c: Lo_Bak_Reiterhof Wenz 5d: Lo_Bak_Kompostfirma 5e: Lo_Pil_Kompost leto 5f: Lo_Pil_Friseur
P r o j e k t K e r a t i n a s e, A b s c h l u s s r i c h t, 3 0. 0 4. 2 0 1 4 p a ge 26 5g: Lo_Pil_Reiterhof Kunz 5h: Lo_Pil_Kompostfirma Obr. 5a-h: Namiesto vlasovej múčky zarastené dosky pravými vlasmi. Je vidno, že huby rastú na vlasoch oveľa lepšie a rýchlejšie ako baktérie, čo je pravdepodobne spôsobené tým, že sa k vlasom môžu lepšie dostať tvorbou hýf (obzvlášť viditeľné na letnej vzorke Lo_Pil_Kompost). Nasledujúci obrázok 6a-i zobrazuje fotografie kultivácie mikroorganizmov z kvapalných kultúr vlasovej múčky v médiu bez vlasovej múčky, ale s vlasmi. 6: Lo_Bak_Kompost leto 6b: Lo_Bak_Friseur 6c: Lo_Bak_Reiterhof Wenz 6d: Lo_Bak_Kompostfirma