Panserín C6000, médium bez proteínov pre CHO bunky v suspenzii, s L-glutamínom

  1. Domov/->
  2. Panserín C6000, médium bez proteínov pre CHO bunky v suspenzii, s L-glutamínom
  • Použite bunky z adherentnej kultúry obsahujúcej sérum (napr. DMEM s vysokou glukózou s 10% FCS) z log fázy.
  • Médium obsahujúce sérum odstráňte pipetou.
  • Bunkový trávnik umyte PBS bez Ca, Mg.
  • Bunkový trávnik pokryte trypsínom/EDTA (0,25%, 0,02%) (približne 2 ml na fľaši T25).
  • Trypsín odstráňte asi po 1 min.
  • Inkubujte, kým sa bunky nezaokrúhlia a neoddelia od substrátu. (asi po 5 minútach).
  • Absorbujte bunky v DMEM, zastavte zvyšnú aktivitu trypsínu s 10% FCS.
  • Bunky centrifugujte, preneste do PBS a znova centrifugujte.
  • Vezmite bunky do PBS a určte počet buniek. Naočkujte 5 x 104 - 1 x 105 buniek/ml do predhriateho Panserinu C6000.
  • Na suspenznú kultiváciu používajte kultivačné fľaše (napr. Greiner bio-one, kód 690 190).
  • Inkubácia pri 37 ° C a plynovaní 5% CO2 v inkubátore.

Fáza oneskorenia nastáva v prvých niekoľkých dňoch, takmer bez bunkovej proliferácie. Po asi 7 dňoch si však bunky zvykli na bezbielkovinové médium a zvýšili sa na 1 x 106 buniek/ml.

proteínov

Bunky preneste do čerstvého média každé 3 až 4 dni.

Naočkujte 3 - 5 x 104 buniek/ml.

Generačný čas CHO v Panserine C6000: 16,5 h.