DNA ľudského vírusu herpes (HHV) typu 6 (krv, CSF) - Synevo
Všeobecné informácie
Ľudský herpesvírus typu 6 - ľudský herpesvírus 6 (HHV-6) - bol izolovaný v roku 1986 Salahuddinom a kol., Po virologickom sledovaní pacientov s lymfoproliferatívnymi chorobami a HIV, ktorý bol rozpoznaný ako vírus s vysokou afinitou k CD4-pozitívnym T lymfocytom. . Patrí do podrodiny β-herpesvírusov, rodu Roseolovírus a je opísaný v dvoch variantoch: A a B. HHV-6B je hlavným činiteľom podieľajúcim sa na etiológii stavu kože - exanthema subitum (roseola infantum alebo 6. detská choroba) - v zatiaľ čo HHV-6A sa detegoval hlavne u imunokompromitovaných hostiteľov 2 .
HHV-6 je DNA vírus, ktorého genóm je obklopený lipidovou škrupinou. Rovnako ako u iných herpes vírusov, HHV-6 spôsobuje primárne infekcie aj reaktiváciu latentných infekcií. .
HHV-6 je všadeprítomne rozšírený, pričom 95% populácie má protilátky proti HHV-6; Vírus sa obvykle prenáša slinami infikovaných ľudí.
In vivo HHV-6 infikuje a replikuje sa v CD4-pozitívnych lymfocytoch cez bunkový receptor CD46, čo je 52-57kDa transmembránový glykoproteín, ktorý interaguje s vírusovými glykoproteínmi: gH, gL, gQ1 alebo gQ2.
Počas akútnej infekcie dochádza k replikácii v lymfocytoch (B, T, NK), makrofágoch, histiocytoch, endotelových bunkách, hepatocytoch, slinných žľazách a centrálnom nervovom systéme. HHV-6A infikuje predovšetkým nervové bunky, zatiaľ čo HHV-6B sa častejšie vyskytuje v mononukleárnych bunkách periférnej krvi. Vírus produkuje priamu cytolýzu, ktorá je zodpovedná za kožné prejavy a príznaky podobné infekčnej mononukleóze. HHV-6 zvyšuje expresiu CD4 na povrchu T lymfocytov, čo vedie k zvýšenej náchylnosti na infekciu HIV.
K primárnej infekcii dochádza po inkubačnej dobe 1 - 2 týždňov, zvyčajne u dojčiat (40 - 50% detí ochorí na prvý rok života, percento infikovaných dosahuje 77 - 82% vo veku do 2 rokov)., s vrcholom medzi 9 a 21 mesiacmi) a je zodpovedný za tretinu prípadov febrilných záchvatov u detí vo veku 6-24 mesiacov. Približne 25% infekcií HHV-6 sa vyskytuje ako exanthema subitum (roseola infantum), ktoré sa vyznačuje vysokou horúčkou trvajúcou 3 až 4 dni, po ktorej nasledujú makulárne alebo makulopapulárne vyrážky, ktoré sa objavia, keď sa teplota vráti do normálu. Vyrážky začínajú od drieku alebo krku, šíria sa po tvári a končatinách a trvajú niekoľko hodín až 2 dni. Ochorenie môže byť tiež sprevádzané: kašeľ, cervikálna alebo okcipitálna lymfadenopatia, podráždenosť, konjunktivitída, edém očných viečok, výčnelok fontány, rinorea alebo hnačka. Klinické prejavy trvajú v priemere 9 dní a sú zriedka komplikované meningitídou alebo encefalitídou.
HHV-6 je zriedkavá príčina meningitídy; vírus môže tiež spôsobiť encefalitídu u zdanlivo zdravých detí s poruchou vedomia, záchvatmi, psychózami alebo obrnami hlavových nervov. Vo väčšine prípadov je to panencefália, ktorá môže byť spojená s pretrvávajúcimi neurologickými následkami 2. DNA HHV-6 bola detekovaná v CSF až u 57% detí 1 .
Akútna infekcia HHV-6 je u imunokompetentných dospelých zriedkavá a môže sa prejaviť ako syndróm podobný infekčnej mononukleóze s horúčkou, lymfadenopatiou, generalizovanou vyrážkou, fulminantnou hepatitídou, trombocytopenickou purpurou, myokarditídou alebo encefalitídou.
Po primárnej infekcii zostáva vírus latentný v lymfocytoch a monocytoch, na nízkej úrovni pretrváva v rôznych bunkách alebo tkanivách a môže sa znovu aktivovať pri narušení imunitného systému. U imunokompetentných osôb nemá táto pretrvávajúca infekcia žiadne následky.
Reaktivácia HHV-6 je bežným prejavom u imunosuprimovaných jedincov (50% pacientov s transplantáciami krvotvorných kmeňových buniek a 33% s transplantáciami pevných orgánov) a vírusovú DNA je možné zistiť v periférnej krvi. K reaktivácii dochádza v prvom mesiaci po transplantácii a sú častejšie u pacientov liečených anti-CD3 protilátkami alebo kortikosteroidmi alebo u tých, ktorí podstúpili alogénnu transplantáciu alebo kmeňové bunky z pupočníka. Pacienti majú často horúčku a vyrážku v ranom posttransplantačnom období. HHV-6 infikuje krvotvorné progenitorové bunky inhibíciou tvorby kolónií in vitro a bol spájaný v niektorých štúdiách s potlačením kostnej drene a neskorým štepením. 95% vírusových reaktivácií u pacientov s transplantáciou krvotvorných kmeňových buniek je spôsobených HHV-6B.
Najlepšie zdokumentovaným prejavom u pacientov s potlačenou imunitou je encefalitída. Vyskytujú sa v intervale 2 - 6 týždňov po transplantácii s bolesťami hlavy, zmätenosťou, kŕčmi, psychózami alebo nedostatkom hlavových nervov. Zatiaľ čo CT vyšetrenie je v počiatočnej fáze zvyčajne normálne, MRI indikuje u 75% pacientov abnormality v šedej hmote v spánkových lalokoch. Pozitívna diagnóza je stanovená na základe prítomnosti vírusu v mozgovomiechovom moku.
U pacientov po transplantácii boli tiež hlásené prípady obrovských buniek hepatitídy, kolitídy a gastroduodenitídy súvisiacej s HHV-6.
HHV-6 sa menej často podieľa na encefalitíde a pneumónii u pacientov s AIDS a nepredpokladá sa, že by ovplyvňoval rýchlosť progresie infekcie HIV do štádia AIDS.
HHV-6 sa spája s roztrúsenou sklerózou na základe detekcie DNA a vírusových antigénov v mozgovomiechovom moku a mozgu. Preto sa HHV-6 nachádzal v jadrách oligodendrocytov v léziách pacientov so sklerózou multiplex, vedci zistili silnú súvislosť medzi prítomnosťou anti-HHV-6 IgM protilátok v mozgovomiechovom moku a skorými štádiami sklerózy multiplex. Niektorí tvrdia, že vírusová infekcia hrá dôležitú úlohu v patogenéze ochorenia, a to prostredníctvom molekulárnej mimiky, kedy vírusové proteíny reagujú krížovo so základným proteínom myelínu. Na úplné definovanie úlohy HHV-6 pri roztrúsenej skleróze 2 sú však potrebné ďalšie výskumy. .
Pozitívna diagnóza primárnej infekcie môže byť demonštrovaná sérokonverziou IgG protilátok z negatívnych na pozitívne alebo prítomnosťou IgM protilátok. 4-násobné zvýšenie titra IgG protilátok naznačuje aktívne ochorenie. Sérologická diagnóza však nemôže odlíšiť primárnu infekciu od reaktivácie. Alternatívnou metódou diagnostiky je detekcia vírusovej DNA v sére alebo plazme skôr, ako sa objavia protilátky, ale táto metóda je menej špecifická ako sérokonverzia.
U jedincov so zníženou imunitou je dôležité rozlišovať medzi latentnou infekciou (bez klinických prejavov) a reaktiváciou, ktorú je možné dosiahnuť stanovením vírusovej DNA v plazme 2. .
Odporúčania pre stanovenie HHV-6 - DNA - užitočné pri rýchlej diagnostike infekcií HHV-6 4 .
Výcvik pacientov - nevyžaduje sa 3 .
Odobratý exemplár - a) príde krv; b) mozgovomiechový mok zhromaždený lumbálnou punkciou 3 .
Zberová nádoba - a) vacutainer obsahujúci EDTA ako antikoagulant; b) sterilná nádoba na CSF 3 .
Zozbierané množstvo - a) toľko, koľko umožňuje vákuum; b) minimálne 2 ml 3 .
Po zbere potrebné spracovanie - a), b) dôkazy nie bude odstredený 3 .
Príčiny odmietnutia dôkazov - a) staré, zrážané, hemolyzované vzorky; 2. použitie heparínu ako antikoagulancia .
Vyskúšajte stabilitu - vzorky krvi alebo mozgovomiechového moku sú stabilné 1 týždeň pri 2-4 ° C 3 .
Metóda - PCR v reálnom čase Light-Cycler: reťazová polymerizačná reakcia s detekciou nahromadeného produktu PCR v reálnom čase meraním emitovanej fluorescencie (test sa uskutoční z plazmy alebo CSF) 3 .
Referenčné hodnoty - HHV-6 nedetegovateľná DNA 3 .
Detekčný limit - 10 detí/vzorka 3 .
Interpretácia výsledkov
Získanie pozitívneho výsledku pre plazmatickú DNA HHV-6 za prítomnosti klinického obrazu je indikátorom aktívnej infekcie.
Detekcia HHV-6 DNA v mozgovomiechovom moku naznačuje infekciu v centrálnom nervovom systéme, ale nemá absolútnu diagnostickú hodnotu (môže existovať HHV-6 DNA v CSF a iných stavoch CNS, ktoré nie sú spojené s týmto vírusom; tiež možno zistiť aj u pacientov bez neurologických syndrómov) 1; 2; 4 .
Limity a interferencie
Negatívny výsledok nevylučuje infekciu HHV-6 4 .
Užitočnosť testu PCR na diagnostiku infekcií HHV-6 komplikuje skutočnosť, že HHV-6 je integrovaný do chromozomálnej DNA u 0,7 - 1,5% ľudí. Kmeňové bunky obsahujúce vložené kópie HHV-6 prenášajú vírusovú DNA na príjemcov transplantátu. Z tohto dôvodu, ak analyzovaná vzorka obsahuje leukocyty, je možné získať pozitívny výsledok pri absencii aktívnej infekcie 2 .
1. Guy Boivin. Diagnóza herpetických vírusových infekcií centrálneho nervového systému. V HERPES 11, Supplement, 2004.
2. Jeffrey I. Cohen Human Herpes Types 6 and 7. In Mandell, Douglas, and Bennett’s Principles and Practice of Infectious Diseases, 7. vydanie, Churchill Livingstone, Elsevier, 2010, 2011-2014.
3. Laboratórium Synevo. Konkrétne odkazy na použitú technológiu spracovania 2015. Typ odkazu: katalóg.