In vitro testy na účinok furazolidónu, hostacyklínu, chloramfenikol a

Dokumenty

Z Federálneho výskumného ústavu pre chov malých zvierat, Celle

furazolidónu

In vitro experimenty o účinkoch furazolidonu, klinika hostiteľstva, chloramfenikol

a dihydrostreptomycín na Salmonella pullorum

V roku 1954 COSGKOVE; GUMY a personál; Spoločnosti HARWOOD a STUNZ a SMITH poukázali na vhodnosť furazolidonu na liečbu infekcie spôsobenej salmonelou pullorurn u hydiny. SMITH (1954b), WILSON (1956), TITKEMEYER a SCHMITTLE (1957), BELDINC a MAYER (1958) v komparatívnych štúdiách zistili, že furazolidon je lepší ako predtým používané sulfonamidy a antibiotiká z hľadiska liečebného účinku. Ale ani pri tomto prípravku nie je možné úplne vylúčiť latentné nosiče zárodkov medzi klinicky zdravými zvieratami, ako ukazujú početné štúdie: [SMITH (1954b a 1955); GORDON a TUCKER (1955); HARBOR and SELLER (1955); LUCAS (1955); WILSON (1955 a 1956); GYLSTORPF a DORN (1956); HARBOR (1956); SMYSER a VAN ROCKEL (1957); AYACARDI (1958); BELDING and MAYER (1958); HENDERSON a kol., (1958) l.

Tieto tvrdenia sú založené predovšetkým na pokusoch na zvieratách. In vitro experimenty s účinkom furazolidónu na soľný roztok. zárodky pulloru boli použité iba v obmedzenej miere. Dotknutí autori sa primárne zaoberali určením dávok potrebných pre sľubnú terapiu [YUKCHENCO a YURCHENCO (1953); SMITH (1954 a a b); ROGERS a spolupracovníci (1956) l. Ďalej sú zaujímavé nasledujúce otázky, ktorých objasnenie môže pomôcť posúdiť vhodnosť prípravku na terapiu:

I. Dajú sa v praxi očakávať rezistentné kmene baktérií? 2. Pri terapeutickom dávkovaní je potrebné brať do úvahy

Zistite rozdiely v citlivosti medzi rôznymi kmeňmi?

3. Má prípravok bakteriostatický alebo baktericídny účinok?

Účinok furazolidónu, hostacyklínu atď. Na Salmonella pullorum 95

4. Do akej miery je možné v choroboplodných zárodkoch vyvolať rezistenciu na liečivá a je to potom reverzibilné alebo trvalé?

5. Pri dlhodobých nízkych dávkach prípravku dochádza k stimulácii rastu klíčkov?

6. Stratia choroboplodné zárodky, ktoré sa stali rezistentnými, tiež svoju citlivosť na iné prípravky (krížová rezistencia)? Odpoveď na to by mali poskytnúť rozsiahlejšie experimenty in vitro

Otázky sa nájdu. Okrem furazolidónu sme do našich vyšetrení zahrnuli zástupcu tetracyklínovej skupiny (hostacyklín), ako aj chloramfenikol a streptomycín.

Na testy bolo použitých celkovo 24 odberových kmeňov, ktoré boli izolované od podnetov rôzneho pôvodu v rokoch 1955 až 1957 a identifikované ako Salmonella pullorurn. Kmeňom sa rozumejú geneticky jednotné zárodky pochádzajúce z jednotlivo skladovanej kolónie (pre jeden kmeň sme predpokladali dve samostatné kolónie, ktoré sa potom označujú ako a a b).

Všetky experimenty, pri ktorých sa mali určovať účinné koncentrácie prípravku, sa uskutočňovali pomocou riedenia skúmavky, ktoré sme aplikovali po dvoch. Uvedené hodnoty sa vzťahujú na 1 ml a vychádzali z nasledujúcich dávok, ktoré sa nikdy nepoužívali staršie ako 24 hodín: 1. Furazolidon 0,01 g so 4 ml dimetylformamidu) ako solubilizátor

(Furoxon Boehringer, Mannheim) v 96 ml výživného roztoku = 100 ylml 2. Tetracyklín 0, olej g

(Hostacyclin Hoechst) v 100 ml výživného roztoku = 100 ylml 3. Chloramfenikol O, O g

(Boehringer, Mannheim) v 100 ml výživného roztoku = 100 μg/ml 4. Dihydrostreptomycínsulfát 0,1 g

(Bayer, Leverkusen) v 100 ml výživného roztoku = 1000 y/ml. Použitý výživný roztok pozostával z:

1,8 g Vitam Bakt. 1,0 g dextrózy 0,5 g peptónu 0,3 g NaCl O, 2 g sek. Fosforečnan sodný 0,1 ml brómtymolovej modrej (1,6% alkoholu)

ako farebný indikátor v 100 ml destilovanej vody. Upravené na pH 7,2 pomocou NaOH.

Naočkovanie zárodkov do každej skúmavky sa uskutočňovalo rovnomerne kvapkou z 1 ml pipety zo 6-hodinových kultúr bujónu, ktoré boli naočkované látkou. Rast zárodkov alebo inhibícia zárodkov sa odčítal od zmeny farby po 24 hodinách odlupovania. Za hodnotu inhibície sa považovalo riedenie, pri ktorom nedošlo k žiadnej zmene farby v troch radoch paralelného riedenia.

Zo všetkých zriedení sa na endo a agarovej pôde vytvorili škvrny, aby sa raz a pre kontrolu čistoty kultúr skontrolovali čistoty kultúr.

I) Dimetylformamid má inhibičný účinok na rast baktérií až do zriedenia 1: 100. V predloženom testovacom usporiadaní táto koncentrácia klesá pod 2-3 (0,5 O/o dimetylformamid).

iní, aby boli schopní rozhodnúť, či a do akej koncentrácie prípravku bol prítomný baktericídny alebo iba bakteriostatický účinok.

Na vyvolanie rezistencie sa použili tri kmene (č. 11, 12 a novo izolovaný kmeň 99). Baktérie sa kultivovali v koncentrácii prípravku, ktorý práve umožňoval množenie zárodkov, a vo vyšších koncentráciách. Pokiaľ mikróby dobre rástli počas 24-hodinových pasáží, na ďalšie množenie sa použili zodpovedajúco nižšie riedenia. Pre tieto experimenty sa furazolidon nechal rozpustiť iba v 0,4 ml dimetylformamidu. Musí sa akceptovať neúplné riešenie prípravku (pozri F u h o t e 1).

Kontroly rastu provokačných pasáží, ktoré boli pripravené s baktériami, ktoré sa stali rezistentnými, ukázali, či nastáva návyk v zmysle stimulácie rastu.

Po 30 provokačných pasážach (dihydrostreptomycín 8 pasáží) sa mikróby každých 24 hodín kŕmili ďalšími 30 pasážami v jednoduchom výživnom roztoku a ich citlivosť na prípravok sa z času na čas testovala testom riedenia tuby.

Zárodky, ktoré sa stali necitlivými na jeden prípravok, sa testovali na krížovú rezistenciu s ostatnými prípravkami.

Tabuľka 1 ukazuje inhibičné koncentrácie furazolidónu, hostacyklínu, chloramfenikol a dihydrostreptomycínu stanovené in vitro pre 24 testovaných lososov. uvedené kmene pullorurn. Tabuľka tiež ukazuje koncentrácie, pri ktorých mali prípravky baktericídny účinok.

Primárne rezistentné kmene Salm. pullorum sa v žiadnom prípade nepodarilo nájsť. Na druhej strane s hostacyklínom, chloramfenikolom a streptomycínom sa zistili rozdiely v citlivosti medzi jednotlivými kmeňmi, tri stupne zriedenia a pri furazolidone štyri stupne zriedenia ako nedostatočné. Vyjadrené v hmotnostných jednotkách na ml živného média sa citlivosť na furazolidon pohybovala medzi 6,25 r a 0,39 r; s hostacyklínom a chloramfenikolom medzi 0,78 roka a 0,095 roka a s dihydrostreptomycínom medzi 250 rokmi a 3 1,25 roka.

Najlepšie inhibičné hodnoty mal hostacyklín - tesne za ním bol chloramfenikol. Furazolidon sa musel dávkovať priemerne takmer desaťkrát a dihydrostreptomycín 300krát vyššie, aby sa dosiahol rovnaký inhibičný účinok in vitro. Ale aj dávka 100 ylml hostacyklínu (24 = najvyššia testovaná koncentrácia) viedla iba k bakteriostáze; pre baktérie schopné reprodukcie sa dali ľahko zistiť z riedenia, pri ktorom zmena farby nebola indikovaná na žiadny rast zárodkov. V prípade chloramfenikolu bolo 5 0 rokov a 25;

/ d na stanovenie baktericídneho účinku. Furazolidón a streptomycín mali baktericídny účinok (furazolidón 12,5 7; dihydrostreptomycín 250 7), aj keď sa koncentrácia zvýšila dvakrát alebo štyrikrát, merané oproti dávkam potrebným na inhibíciu zárodkov. Široký rozsah medzi inhibičnými koncentráciami a koncentráciami s baktericídnymi vlastnosťami v prípade chloramfenikol a najmä hostacyklínu už bol zrejmý pri hodnotení série riedení viac-menej plynulými prechodmi v zmene farby, zatiaľ čo farebná indikácia pre dihydrostreptomycín a Furazolidon ostro nakreslený.

Vystavenie pôsobeniu furazolidónu, hostacyklínu atď. 3uf Salmonella pullorum 97

T a b e l l I I H e m m w e r t e u n d K o n z e n t r a t i o n m i t b a k t e r i z i d e r W i r k u n g v o n F u r a z o l i d o n, H o s t a c y c l i n, C h l o r a m p h e n i -

s t r e p t o m y c i n g e g e n i i b e r 2 4 S a l m. p u l l o r u m - S t a r n m e n

Furazolidon Hostacyclin Chlor- Dihydro-amfenikol streptomycín l) kmeň Wacfis- vosk- výstražný vosk-

brzdiť. brzdiť. brzdiť. hemrng. turn- baktericíd turn- baktericíd tum - baktericíd tum - bakterizi,