Králiková mAb Phospho-Smad2 (Ser465467) Smad3 (Ser423425) (D27F4)

Western blot analýza extraktov z buniek HaCaT, neošetrené (-) alebo ošetrené hTGF-p3 # 8425 (+) v neprítomnosti alebo v prítomnosti inhibítora TGFR SB 431542, s použitím Phospho-Smad2 (Ser465/467)/Smad3 (Ser423/425) (D27F4) králičia mAb (horná) alebo Smad2/3 (D7G7) XP ® králičia mAb # 8685 (spodná).

Phospho-Smad2 (Ser465/467)/Smad3 (Ser423/425) (D27F4) králičia mAb 8828

ser465467

Western blot analýza extraktov z buniek HaCaT, neošetrené (-) alebo ošetrené hTGF-p3 # 8425 (+) v neprítomnosti alebo v prítomnosti inhibítora TGFR SB 431542, s použitím Phospho-Smad2 (Ser465/467)/Smad3 (Ser423/425) (D27F4) králičia mAb (horná) alebo Smad2/3 (D7G7) XP ® králičia mAb # 8685 (spodná).

  • Váš miestny zástupca
  • Vaše miestne informácie o nákupe
  • Záruka na protilátky
  • FAQ
  • Technická podpora
  • Osvedčenie o analýze
  • Podporné údaje
  • Súvisiace produkty
  • Využitie produktu
  • Protokoly
  • Pozadie
  • Cesty a bielkoviny
  • Citácie a recenzie

Podporné údaje

REAKTIVITA H M R Mk
CITLIVOSŤ Endogénne
MW (kDa) 52, 60
Zdroj/izotyp Králičie IgG

Kľúč aplikácie:

  • W.-film z divokého západu
  • IP-Imunoprecipitácia
  • IHC-Imunohistochémia
  • Čip-Chromatínová imunoprecipitácia
  • AK-Imunofluorescencia
  • F.-Prietoková cytometria
  • E-P-ELISA peptidy

Kľúč ku krížovej reaktivite druhov:

  • H-Človek
  • M.-Myš
  • R.-radu
  • Hm-škrečok
  • Mk-Opica
  • St-Norka
  • C.-Kura
  • Dm-D. melanogaster
  • X-Xenopus
  • Z-Zebrafish
  • B.-Hovädzieho dobytka
  • Dg-pes
  • Str-Prasa
  • Sc-S. cerevisiae
  • Ce-C. elegans
  • Pán-Kôň
  • Alles-Očakávajú sa všetky druhy
Králik mAb Smad2/3 (D7G7) XP® # 8685
Protilátka Smad2/3 # 3102
MAb Smad2 (D43B4) XP® Rabbit # 5339
Protilátka Smad2/3 # 5678
Phospho-Smad3 (Ser423/425) (C25A9) králičia mAb # 9520
Phospho-Smad1 (Ser463/465)/Smad5 (Ser463/465)/Smad9 (Ser465/467) (D5B10) králičia mAb # 13820
Phospho-Smad2 (Ser465/467) (138D4) králičia mAb # 3108
Králik mAb Smad3 (C67H9) # 9523
Phospho-Smad1/5 (Ser463/465) (41D10) králičia mAb # 9516
Fosfo-SMAD2 (Ser465/Ser467) (E8F3R) králičia mAb # 18338

Informácie o použití produktu

Skladovanie

Dodáva sa v 10 mM HEPES sodnom (pH 7,5), 150 mM NaCI, 100 ug/ml BSA, 50% glycerolu a menej ako 0,02% azidu sodného. Skladujte pri -20 ° C. Protilátku nevydávajte alikvotne.

Protokol

Protokol Western Blot

Pre western bloty inkubujte membránu so zriedenou primárnou protilátkou v 5% hm./obj. BSA, 1X TBS, 0,1% Tween® 20 pri 4 ° C za jemného pretrepávania cez noc.

Trieda: Odporúčané riedenie protilátok nájdete na webovej stránke produktu s primárnymi protilátkami.

A. Roztoky a reagencie

Od prípravy vzorky po detekciu, činidlá, ktoré potrebujete pre svoj Western Blot, sú teraz v jednej praktickej súprave: # 12957 Western Blotting Application Solutions Kit

Trieda: Pripravte roztoky s reverznou osmózou deionizovanou (RODI) alebo ekvivalentnou vodou.

B. Blotovanie proteínov

Všeobecný protokol na prípravu vzorky.

  1. Ošetrite bunky pridaním čerstvého média obsahujúceho regulátor na požadovaný čas.
  2. Nasajte médiá z kultúr; bunky sa premyjú 1X PBS; odsávať.
  3. Bunky sa lýzujú pridaním 1X tlmivého roztoku pre SDS (100 ul na jamku 6-jamkovej doštičky alebo 500 ul na doštičku s priemerom 10 cm). Bunky okamžite zoškrabte z platne a extrakt preneste do mikrocentrifugačnej skúmavky. Držte sa na ľade.
  4. Sonikujte 10-15 sekúnd na dokončenie lýzy buniek a strih DNA (na zníženie viskozity vzorky).
  5. Zahrejte 20 ul vzorky na 95 - 100 ° C po dobu 5 minút; ochladiť na ľade.
  6. Mikrocentrifúga počas 5 minút.

Naplňte 20 ul na SDS-PAGE gél (10 cm x 10 cm).

Trieda: Načítanie vopred nafarbených markerov molekulovej hmotnosti (# 13953, 5 ul/dráha) na overenie elektrotransferu a odporúča sa biotinylovaný proteínový rebrík (# 7727, 10 ul/dráha) na určenie molekulových hmotností.

  • Elektrotechnický prenos na nitrocelulózovú membránu (# 12369).

    • C. Blokovanie membrán a inkubácie protilátok

    Trieda: Objemy sú pre membránu 10 cm x 10 cm (100 cm 2); pre membrány rôznych veľkostí zodpovedajúcim spôsobom upravte objemy.

    I. Blokovanie membrány

    1. (Voliteľné) Po prenose premývajte nitrocelulózovú membránu 25 ml TBS po dobu 5 minút pri teplote miestnosti.
    2. Inkubujte membránu v 25 ml blokujúceho tlmivého roztoku po dobu 1 hodiny pri teplote miestnosti.
    3. Trikrát sa premyjú vždy po dobu 5 minút 15 ml TBST.

    II. Primárna inkubácia protilátok

    1. Inkubujte membránu a primárnu protilátku (pri vhodnom riedení a riedidle odporúčanom na webovej stránke produktu) v 10 ml riediaceho pufru na primárnu protilátku za jemného miešania cez noc pri 4 ° C.
    2. Trikrát sa premyjú vždy po dobu 5 minút 15 ml TBST.
    3. Inkubujte membránu s anti-králičím IgG, HRP-spojenou protilátkou (# 7074 v 1: 2000) a anti-biotínovým, HRP-spojenou protilátkou (# 7075 v 1: 1000-1: 3000), aby ste detegovali biotinylované proteínové markery v 10 ml blokujúci tlmivý roztok za mierneho miešania po dobu 1 hodiny pri teplote miestnosti.
    4. Trikrát sa premyjú vždy po dobu 5 minút 15 ml TBST.
    5. Pokračujte s detekciou (časť D).

    D. Detekcia proteínov

    Návod na použitie:

    1. HRP (konjugát protilátky) premytý na membránu trikrát po dobu 5 minút v TBST.
    2. Pripravte si 1X činidlo SignalFire ™ ECL (# 6883) zriedením jedného dielu 2X činidla A a jedného dielu 2X činidla B (napr. Pre 10 ml, pridajte 5 ml činidla A a 5 ml činidla B). Dobre premiešajte.
    3. Inkubujte substrát s membránou po dobu 1 minúty, odstráňte prebytočný roztok (membrána zostáva vlhká), zabaľte do plastu a vystavte röntgenovému filmu.

    * Zabráňte opakovanému vystaveniu pokožke.

    uverejnené v júni 2005

    revidované v júni 2020

    Špecifickosť/citlivosť

    Fosfo-Smad2 (Ser465/467)/Smad3 (Ser423/425) (D27F4) Králičia mAb rozpoznáva endogénne hladiny proteínu Smad2, keď je fosforylovaná na Ser465 a Ser467. Táto protilátka tiež rozpoznáva endogénne hladiny proteínu Smad3, keď fosforyluje iba Ser422 alebo Ser423 aj Ser425.

    Reaktivita druhov:

    Človek, myš, potkan, opica

    Zdroj/čistenie

    Monoklonálna protilátka sa produkuje imunizáciou zvierat syntetickým peptidom zodpovedajúcim zvyškom obklopujúcim Ser465/467 ľudského proteínu Smad2.

    Pozadie

    Členovia rodiny Smad signálnych transdukčných molekúl sú zložkami kritickej intracelulárnej dráhy, ktoré prenášajú signály TGF-β z bunkového povrchu do jadra. Boli definované tri odlišné triedy Smads: Smads regulované receptormi (R-Smads), ktoré zahŕňajú Smad1, 2, 3, 5 a 8; spoločný mediátor Smad (co-Smad), Smad4; a antagonistické alebo inhibičné Smads (I-Smads), Smad6 a 7 (1-5). Aktivované receptory typu I sa spájajú so špecifickými R-Smads a fosforylujú ich na konzervovanom karboxyterminálnom SSXS motíve. Fosforylovaný R-Smad sa disociuje z receptora a vytvára heteromérny komplex s co-Smad (Smad4), čo umožňuje translokáciu komplexu do jadra. Akonáhle sú Smads v jadre, môžu sa zameriavať na rôzne proteíny viažuce DNA na reguláciu transkripčných reakcií (6 - 8).

    Cesty a bielkoviny

    Preskúmajte cesty + proteíny súvisiace s týmto produktom.