Philipp Pierre Markwerth - PDF na stiahnutie zadarmo
Z Virologického ústavu Univerzity Heinricha Heina v Düsseldorfe Riaditeľ: Univ.-Prof. DR. med. Jörg Timm Sérologická a molekulárna detekcia infekcií ľudskými polyomavírusmi JC a BK u pacientov s dizertačnou prácou s progresívnou multifokálnou leukoencefalopatiou (PML) na získanie titulu doktor medicíny na Lekárskej fakulte Univerzity Heinricha Heina v Düsseldorfe, ktorú predniesol Philipp Pierre Markwerth 2018
Vytlačené ako úvodná dizertačná práca so súhlasom Lekárskej fakulty Univerzity Heinricha Heina v Düsseldorfe. podpísaný: Dekan: Univ.-Prof. DR. med. Nikolaj Klöcker Prvý recenzent: Prof. Dr. med. Ortwin Adams Druhý recenzent: PD Dr. med. Philipp Albrecht
Boli publikované časti tejto práce: Index protilátok CSC JCV na diagnostiku PML spojenej s natalizumabom. Warnke C, von Geldern G, Markwerth P, Dehmel T, Hoepner R, Gold R, Pawlita M, Kümpfel T, Mäurer M, Stangel M, Wegner F, Hohlfeld R, Straeten V, Limmroth V, Weber T, Hermsen D, Kleinschnitz C, Hartung HP, Wattjes MP, Svenningson A, Major E, Olsson T, Kieseier BC, Adams O. Annals of neurology 2014, dec. 76 (6): 792-801.
Zoznam skratiek 5HT2A 5-hydroxytryptamínový receptor 2A AI JCV AKT ANOVA ATP AU BKV BSA CCD kvocient alkoholových/sérových protilátok - proteínová kináza JCV B Analýza variácie Adenozín 5 trifosfát ľubovoľná jednotka BK vírus Hovädzí sérový albumín spojený s nábojom devicena D Čas merania 1 DMSO Desoxyr Doba merania deoxyribonukleovej kyseliny DX1 2 doba merania DX2 3 E. coli Escherichia coli EDTA kyselina etyléndiamíntetraoctová EIA enzymatická imunosorbentná analýza ELISA enzýmovo viazaná imunosorbentná analýza FAM 6-karboxy-fluoresceín HAART vysoko aktívna antiretrovírusová G Ig-IgM-imunopropulózna kontrola anti-Mp D-tiogalaktopyranozid JCV vírus JC kbp kilobázové páry KI interval spoľahlivosti LB lyzogénny bujón LPOS nízka pozitívna kontrola MAPK mitogénom aktivovaná proteínkináza mirna mikro RNA ml mililitre MPOS stredná kontrola mrna messenger RNA MRI magnetická rezonancia MRZ reakcia na osýpky-rubeola-zoster MS roztrúsená skleróza stredné priemerné hodnoty NAT natalizumab II
NCCR nekódujúca kontrolná oblasť NEM N-etylmaleimid NF-1/X nukleárny faktor-1 trieda X NLS nukleárny lokalizačný signál nm nanometer OD X optická hustota pri x nm PBS fosfátom pufrovaný soľný roztok pmal rozpustený antigén PML progresívna multifokálna leukoencefalopatia PP2A proteínová fosfatáza 2A prb retinoblastómový gén citlivosti qpcr kvantitatívna polymerázová reťazová reakcia RNA ribonukleová kyselina SAPK stresovo aktivovaná proteínkináza SEM štandardná chyba S-fázová syntézna fáza SMPB sukcínimidyl 4- [p-aleimidofenyl] butyrát SV-40 opičí vírus 40 TAMRA tetrametyl-rodamín T-antigén nádorový antigén U jednotky VP-1 vírusový proteín 1 2 VP-1 vírusový proteín VP-3 vírusový proteín 3 CNS centrálny nervový systém III
Obsah 1 Úvod 1 1.1 Polyomavírusy. 1 1.1.1 Klasifikácia. 1 1.1.2 Morfológia. 2 1,2 vírusu JC. 4 1.2.1 História. 4 1.2.2 Morfológia a vírusové proteíny. 4 1.2.3 Genóm. 6 1.2.4 Replikačný cyklus. 6 1.2.5 Typy a podtypy. 8 1.2.6 Patogenéza. 8 1.2.7 Epidemiológia. 10 1.2.8 Terapia. 10 1.3 Roztrúsená skleróza. 11 1.4 Natalizumab. 12 1.5 Vydanie. 13 2 Materiál a metódy 14 2.1 Materiál pacienta. 14 2.2 Rekombinantný JCV-BKV-IgG ELISA. 15 2.2.1 Princíp. 15 2.2.2 Získanie rekombinantného proteínu VP-1. 16 2.2.3 Anti-JCV/Anti-BKV IgG ELISA. 18 2.2.4 Rekombinantná JCV IgG podtrieda ELISA. 21 2.2.5 Meranie afinity pomocou rekombinantného JCV-IgG ELISA. 22 2.3 Reakcia MRZ/index Reiber. 24 2.4 Stanovenie Bradfordovho proteínu. 25 2.5 Kvantitatívna PCR v reálnom čase. 26 3 Hodnotenie 28 3.1 ELISA. 3.1.1 Anti-JCV IgG. 28 3.1.2 Anti-BKV IgG. 31 3.1.3 Kvocient CSF/sérum. 33 3.1.4 Podtriedy anti-JCV IgG. 3.1.5 Anti-JCV a anti-BKV IgM. 36 3.1.6 Afinita k anti-JCV IgG. 40 3.2 Výsledky PCR. 41 3.2.1 Výsledky porovnávacích skupín. 41 3.2.2 JCV DNA. 43 3.2.3 BKV-DNA. 44 IV
Obsah 4 Diskusia 45 4.1 JCV IgG. 45 4,2 BKV IgG. 47 4.3 Kvocient CSF/sérum. 48 4,4 podtriedy JCV IgG. 49 4,5 JCV IgM. 50 4,6 BKV IgM. 51 4.7 Afinita anti-JCV IgG. 52 4,8 PCR-JCV. 53 4,9 PCR-BKV. 54 5 Záver 55 6 Bibliografia 56 V
1 Úvod Obr. 1.1: Klasifikácia čeľade Polyomaviridae; Obr. Upravené podľa študijnej skupiny Polyomaviridae Medzinárodného výboru pre taxonómiu vírusov. 3
1 Úvod Roztrúsená skleróza (MS) s humanizovanou anti-alfa-4-integrínovou protilátkou natalizumab (Tysabri) sa môže vyskytnúť aj ako závažný vedľajší účinok PML. 12,22,50 Obr. 1.4: MRI snímky pacienta s PML. Hyperintenzívne dreňové ohniská sú zobrazené v temporo-okcipitálnej oblasti pravej hemisféry (červené šípky). Ilustráciu láskavo poskytol Priv.-Doz. DR. med. Michael Mull, Klinika diagnostickej a intervenčnej neuroradiológie, Univerzitná klinika Aachen. 9