Porovnateľné potravinové doplnky 2012 - Wiley Analytical Science
Prehľad
Spotrebiteľsky priateľské zobrazovanie hladín izoflavónu
Analýzu a kvantifikáciu izoflavónov je možné vykonať rôznymi spôsobmi v závislosti na zvolenej metodike, ktorá z pohľadu spotrebiteľa môže viesť k netransparentným informáciám o hladinách izoflavónu a následne sťažiť objektívne porovnanie výrobkov. U doplnkov výživy so špeciálne napísaným obsahom izoflavónu preto nie je väčšinou jasné, či sa tieto obsahy vzťahujú na skutočne bioaktívne koncentrácie, alebo či sa počítajú iba zo súčtu izoflavónových konjugátov.
Izoflavóny v sóji
Izoflavóny, patriace k fytoestrogénom, označujú skupinu polyfenolických rastlinných zložiek, ktorým je pripisovaný slabo estrogénny účinok z dôvodu ich chemickej štruktúrnej podobnosti s 17-p-estradiolom. Vďaka týmto vlastnostiam ponúkajú potenciál na zníženie hormonálne závislých rakovinových chorôb, kardiovaskulárnych chorôb a osteoporózy a majú slúžiť ako prírodná alternatívna medicína, najmä na zmiernenie klimakterických ťažkostí [1-4].
V prípade sóje, ktorá je najdôležitejším zdrojom izoflavónov v našej strave, je možné rozlíšiť tri štrukturálne odlišné izoflavónové aglykóny (daidzeín, glyciteín a genisteín), ktoré môžu byť tiež vo forme β-glykozidov alebo ďalej esterifikované ako malonyl alebo acetylestery glykozidov. . Pre každý aglykón existujú tri ďalšie izoflavónové konjugáty, čo vedie k celkovo 12 možným formám izoflavónu pre sóju.
V nespracovaných sójových bôboch sa izoflavóny nachádzajú hlavne vo forme glykozidov a ako malonylestery, čím ďalšie spracovanie (napr. Vlhké/suché zahriatie) môže zásadne zmeniť túto typickú distribúciu, ktorá s príslušnou intenzitou (napr. Biochemické procesy, ako napríklad fermentácia) ) môže viesť k úplnej degradácii na voľné aglykóny [5-6].
Analýza celkových izoflavón aglykónov
Malo by sa tiež vziať do úvahy, že iba aglykónom sa pripisuje bioaktívny účinok [7], čo by malo byť rozhodujúcim aspektom pre hodnotenie, najmä pre výrobky so špeciálne inzerovaným obsahom izoflavónu (napr. Doplnky výživy). S cieľom umožniť objektívne (a spotrebiteľsky orientované) porovnanie produktov sa zdá byť zrejmé uvádzať obsah izoflavónu na základe (bioaktívnych) celkových aglykónov.
Pre analýzy, ktoré počítajú iba obsah izoflavónu ako súčet jednotlivých (ťažších) konjugátov (napr. Po extrakcii rozpúšťadlom), predstavuje následná konverzia na zodpovedajúce aglykonové ekvivalenty možnú alternatívu pre „nefalšované“ zastúpenie skutočných bioaktívnych koncentrácií. Tu je tiež potrebné poznamenať, že najmä malonyl a acetylestery majú nízku stabilitu a môžu sa počas spracovania vzorky prevádzať alebo odbúravať.
Robustnejším spôsobom kvantifikácie je na druhej strane použitie protokolov hydrolytickej analýzy, pri ktorých sa po kyslej, zásaditej alebo enzymatickej (β-glukuronidáza, celuláza, β-glukozidáza) hydrolýza konjugáty izoflavónu kvantitatívne prevedú na oveľa stabilnejšie glykozidy a/alebo aglykóny (v závislosti od použitá hydrolýza) a následne kvantifikovaná [8].
V závislosti od rôznych parametrov počas spracovania vzorky (výber rozpúšťadla, extrakčná technika, protokoly o hydrolýze atď.) Existujú rôzne „optimálne“ metódy, ktoré vedú k viac alebo menej porovnateľným výsledkom, pričom analyzovaný/vypočítaný celkový obsah aglykónu je referenčným základom pre objektívne porovnanie. by mal umožniť.
S prihliadnutím na tento problém sme vyvinuli protokol na analýzu celkových izoflavónaglykónov pre rôzne „sójové“ potraviny (sójové bôby, mlieko, jogurty, potravinové doplnky) [9–10]. Pri dvojstupňovej metóde sa najskôr extrahoval materiál vzorky, získali sa organicko-vodné extrakty obsahujúce izoflavón (obr. 1a), potom sa pufrovali a na enzymatickú hydrolýzu (nepriama hydrolýza bez matrice vzorky) sa použila β-glukuronidáza z Helix pomatia (EC 3.2.1.31, získaná z Rímsky slimák) inkubovaný.
Inkubácia cez noc viedla k úplnej degradácii všetkých konjugátov izoflavónu (glykozidy a estery) s hydrolyzátmi, v ktorých bolo možné detegovať iba voľné celkové aglykóny (obr. 1b). Tri aglykóny boli kvantifikované pomocou UPLC (Waters Acquity Ultra Performance LC) a UV detekcie pri 260 nm [9-10].
Porovnateľné doplnky stravy?
Po diskusiách/publikáciách o zdraviu prospešných účinkoch izoflavónov čoskoro nasledovala široká škála komerčných potravinových doplnkov (na báze sóje alebo červenej ďateliny) so špecificky inzerovaným obsahom izoflavónu, ktoré sú určené najmä na zmiernenie symptómov menopauzy. Okrem rôznych foriem podávania (tablety, kapsuly, instantný prášok, tekuté prípravky), skutočné zamýšľané použitie (iba suplementácia izoflavónu alebo viacnásobné prípravy s prídavkom vitamínov), odporúčané dávky (mg izoflavónov na kapsulu za deň) a zložky (extrakty, koncentráty obsahujúce izoflavón), “ čisté enkapsulácie “), nejednoznačná špecifikácia obsahu izoflavónu sťažuje objektívne porovnanie výrobkov pre tieto prípravky.
Spravidla sa podáva iba celkový obsah izoflavónu (napr. Mg sójových izoflavónov na kapsulu); Väčšinou však nie je jasné, či ide skutočne o bioaktívne koncentrácie. Z hľadiska tohto problému sa celkové aglykony analyzovali na rôzne doplnky výživy (z drogérie, lekárne atď.) A porovnali sa so stanovenými hladinami izoflavónu (pri označovaní výrobkov priateľským k spotrebiteľovi by sa hladiny mali zhodovať!).
Avšak celkové aglykóny po enzymatickej hydrolýze vykazovali obsah, ktorý bol príliš nízky pre všetky skúmané doplnky výživy, s niektorými významnými negatívnymi odchýlkami; tj. bioaktívne účinné množstvo (aglykóny) bolo vždy nižšie, ako sľubovala značka (iba 40 až 95% špecifikovaných koncentrácií, obr. 2). Vysvetlenie týchto odchýlok sa nakoniec našlo pri pohľade na distribúciu všetkých foriem izoflavónu, ktoré boli pôvodné pre vzorky. Extrakty (odtlačok prsta izoflavónu pred hydrolýzou) obsahovali predovšetkým „ťažšie“ glykozidy a estery ako prevládajúce formy izoflavónu (napr. Polievka č. 7, obr. 3a), hoci iba dva prípravky (polievka č. 6,9, obr. 3b) bolo možné detegovať značné množstvo voľných aglykónov [9].
Výsledkom je, že (väčšina) výrobcov počíta špecifikované hladiny izoflavónu ako súčet jednotlivých konjugátov izoflavónu (faktor 1,6 - 2,0 ťažší ako aglykóny), čo má za následok tiež nezrovnalosti s celkovým analyzovaným aglykónom. Neaktívny podiel „cukru“ je preto zahrnutý v uvedenom obsahu, čo následne (pre spotrebiteľa) „simuluje“ zjavne vyššiu bioaktívnu koncentráciu.
Aj keď balenie sľubuje vyšší obsah, nemusí to nevyhnutne znamenať, že musí byť vyššia aj bioaktívna koncentrácia. Ďalej tu samozrejme musí byť uvedené, že výpočet pomocou konjugátov sa nesmie považovať za „nesprávny“ alebo „klamný“, pretože sa týka foriem izoflavónu pôvodných v produkte a je iba nejednoznačným typom množstva.
záver
Pretože pri nákupe takýchto potravinových doplnkov je možné okrem ceny použiť iba deklarovaný obsah izoflavónu (a skutočne by sa malo predpokladať bioaktívne množstvo), je tu v popredí objektívna špecifikácia zameraná na spotrebiteľa a výpočet obsahu na základe celkového obsahu Aglycone sa javí ako najjednoduchšia a najpraktickejšia metóda/riešenie.
[1] Adlercreutz H.: The Lancet Oncology 3, 364-373 (2002).
[2] Wroblewski Lissin L. a Cooke J.P .: Journal of the American College of Cardiology 35, 1403-1410 (2000).
[3] Wuttke W. a kol.: The Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology 83, 133–147 (2002)
[4] S etchell K.D.R. a Lydeking-Olsen E.: The American Journal of Clinical Nutrition 78, 593S-609S (2003)
[5] Wang H.-J. a Murphy P.A .: Journal of Agricultural and Food Chemistry 42, 1666-1673 (1994).
[6] Coward L. a kol.: The American Journal of Clinical Nutrition 68, 1486S-1491S (1998).
[7] Setchell K.D.R. a kol .: The Journal of Nutrition 131, 1362S-1375S (2001)
[8] Schwartz H. a Sontag G.: Analytica Chimica Acta 633, 204–215 (2009).
[9] Fiechter G. a kol.: Analytica Chimica Acta 672, 72–78 (2010).
[10] Fiechter G. a kol.: Food Research International (v tlači) doi: 10.1016/j.foodres.2011.03.038 (2011)
Ao. Univ. Prof. DI Dr. Helmut K. Mayer; DI Gregor Fiechter