Proteínová značka - biológia

Kedy Proteínový deň, Afinitná značka alebo značka epitopu. Deň pre „značenie“, „značka“ alebo „značka“) sa v biochémii používajú na opis rôznych, väčšinou krátkych, aminokyselinových sekvencií, ktoré sa dajú použiť na označenie proteínov. Značené proteíny patria k fúznym proteínom.

značka

Aplikácie

Rôzne označenia sú rôzne vhodné pre rôzne účely. Používajú sa pri tvorbe proteínov pri výrobe rekombinantných proteínov alebo pri ich purifikácii a detekcii pomocou afinitnej chromatografie, rozbaľovacích testov, Western blotu, imunohistochémie, fluorescenčnej mikroskopie alebo živého zobrazovania.

Na generovanie proteínovej značky sa kódujúca sekvencia DNA proteínovej značky vloží do kódujúcej sekvencie DNA fúzneho proteínu za štartovacím kodónom alebo pred stop kodónom, pričom sa zachová čítací rámec. To vytvára N-koncovú alebo C-koncovú proteínovú značku na proteíne počas translácie.

Občas je potrebné po vyčistení proteínový štítok z proteínu odstrániť, napr. B. sa dá dosiahnuť proteázovým štiepiacim miestom alebo indukovateľným inteínom. Prístup založený na proteolýze využíva proteázy s dlhšou rozpoznávacou sekvenciou, ktoré sa štiepia iba na rozhraní proteínovej značky, napr. B. the TEV-Proteáza. [1] Inteíny môžu byť vyvolané tiolami alebo znížením hodnoty pH. [2] [3] [4]

Niektoré značky majú okrem väzby protilátky alebo imunokonjugátu aj ďalšie funkcie, napríklad:

  • Imunoafinitná chromatografická purifikácia (všetko so zodpovedajúcimi protilátkami)
  • Detekcia na základe protilátok (pre všetkých, napr. Metódou Western blot, imunohistochémiou alebo imunofluorescenciou)
  • Afinitná chromatografia na základe afinity k ďalšiemu väzobnému partnerovi (napr. Značka CaM, značka CBP, značka GST, značka MBP)
  • Biotinylačné miesta na čistenie streptavidínom (napr. Avi-Tag, BCCP-Tag, Strep-Tag)
  • Komplexná tvorba s dvojmocnými iónmi niklu a zosieťovanou agarózou alebo dextránom modifikovanou kyselinou nitrilotrioctovou (napr. His-Tag)
  • Fluorescencia (napr. GFP alebo flash značka)
  • Ľahšia separácia v HPLC vďaka zvýšenej polarite (napr. His-Tag, FLAG-Tag, Xpress-Tag)
  • Cysteíny ako reaktívne skupiny (napr. Značka GST, značka snap, značka tioredoxínu)
  • Zvýšenie rozpustnosti Inklúzne orgány, s väčšími značkami (napr. značka GST, značka MBP)
  • Zlepšenie skladania bielkovín Inklúzne orgány alebo kvôli nesprávne prepojeným disulfidovým mostíkom (napr. tioredoxínový štítok, poly (NANP) štítok)
  • indukovateľné zrážacie reakcie [5] [6]