Protilátky proti deamidovaným peptidom gliadínu - PDF na stiahnutie zadarmo

Protilátky proti deamidovaným gliadínovým peptidom Porovnanie rôznych ELISA testov na diagnostiku celiakie u detí Dizertačná práca na získanie akademického titulu Dr. med. na Lekárskej fakulte Lipskej univerzity predložila: Maria Petzold (rodená Ritter) narodená 3. júna 1984 v Lipsku Vedúci: Prof. Dr. rer. nat. habil. Thomas Mothes na Univerzite v Lipsku, Lekárska fakulta, Ústav pre laboratórne lekárstvo, klinickú chémiu a molekulárnu diagnostiku Rozhodnutie o udelení doktorátu z 27. septembra 2011

deamidovaným

Obsah Bibliografický popis Zoznam skratiek 1 Úvod. 11 1.1 Definícia. 11 1.2 Formy celiakie a epidemiológia. 12 1.3 Diagnostika. 13 1.3.1 Klinické príznaky. 13 1.3.2 Sérologické vyšetrenie. 14 1.3.3 Histologické vyšetrenie. 15 1.4 Patogenéza. 18 1.5 Deamidované gliadínové peptidy. 21 2 Ciele. 23 3 Metódy. 25 3.1 Štruktúra kurzu. 25 3.2 Charakteristiky účastníkov. 29 3.3 Stanovenie protilátky. 31 3.4 Štatistické hodnotenie. 33 3.5 Metodická kritika. 35 4 výsledky. 37 4.1 Koncentrácie protilátok u pacientov a kontrol. 37 4.2 ROC analýza. 39 4.3 Limitné hodnoty. 41 4.3.1 Limitná hodnota spoločnosti. 41 4.3.2 Vlastná limitná hodnota. 42 4.3.3 Vlastná medzná hodnota pre vysokú citlivosť. 42 4.3.4 Vlastná limitná hodnota pre vysokú špecifickosť. 4.3.5 Výsledky kombinovaných skúšok. 44

Obsah 4.4 Pravdepodobnosť a pravdepodobnosť po teste. 46 4.5 Koncentrácia protilátok a fáza Marsh. 48 4.6 Veková závislosť koncentrácie protilátky. 50 4.7 Koncentrácia protilátok a pohlavie. 50 4.8 Opakovateľnosť. 53 4.9 Prípadové štúdie. 53 4.9.1 Koncentrácia protilátok u mladých pacientov s celiakiou. 53 4.9.2 Chronické zápalové ochorenie čriev. 54 4.9.3 Pozitívne výsledky biopsie v kontrolnej skupine. 4.9.4 Pacient s celiakiou s negatívnym výsledkom biopsie. 56 4.9.5 Pacient so selektívnym nedostatkom IgA. 57 5 Diskusia. 59 5.1 Porovnanie vzájomných testov DGP. 59 5.2 Porovnanie DGP testov s protilátkovými testami proti natívnemu gliadínu. 5.3 Porovnanie testu DGP s testmi autoprotilátok proti ttg. 61 5.4 Výhody kombinovaných testov na protilátky. 64 5.5 Interpretácia testu. 64 5.6 Kedy je možné upustiť od biopsie? 68 6 Zhrnutie. 71 Bibliografia. 75 Zoznam tabuliek. 87 Zoznam obrázkov. 88 Vyhlásenie nezávislosti. 89 životopisov. 91 publikácií. 93 ďakujem. 101

Diagnostika Zdravá sliznica Marsh Typ 1 Marsh Typ 2 Marsh Typ 3a Marsh Typ 3b Marsh Typ 3c Obrázok 4 Histologické znaky Marshových stupňov Zdravá sliznica: Sliznica má normálnu architektúru klkov a krypt. Marsh typ 1: normálna architektúra sliznice tenkého čreva, sú zvýšené iba hodnoty IEL. Marsh typ 2: Krypty sú v porovnaní s typom 1 predĺžené. Marsh typ 3a: Deštruktívny typ celiakie so stredne ťažkou atrofiou klkov a hyperpláziou krýpt. Marsh typ 3b: Deštruktívny typ celiakie s hlbokou atrofiou klkov. Marsh typ 3c: deštruktívna celiakia s totálnou atiláciou klkov. (Oberhuber 2001 (Marsh Type 1), all other images: A. Werner and V. Wiechman, Pathological Institute, St. Georg Clinic ggmbh 2009). 17

Úvod Obrázok 6 Deamidácia gliadínu tkanivovou transglutaminázou Vľavo: Tkanivová transglutamináza štiepi amoniak zo špecifických glutamínových zvyškov, čo vedie k glutamátovým zvyškom (aminokyseliny v jednopísmenovom kóde; glutamín = Q, kyselina glutámová = E, prolín = P, fenylalanín = F). Vpravo: Viazanie protilátok (merané v luminiscenčnom teste) zo séra pacienta s celiakiou na natívnu sekvenciu gliadínu QPQQPFP a na deamidovanú sekvenciu QPEQPF. Silnejšie zosvetlenie znamená silnejšie puto. (T. Mothes 2009) 22

Metódy Obrázok 7 Vývojový diagram pre výber séra Z 340 sér spĺňajúcich inklúzne kritériá bolo vylúčených celkovo 35 vzoriek séra. Zo zvyšných 305 sér bolo 142 podľa kritérií ESPGHAN zaradených do skupiny pacientov a 163 do kontrolnej skupiny. V skupine pacientov bol jeden účastník s negatívnym výsledkom biopsie, v kontrolnej skupine boli celkovo štyria účastníci, ktorých histologické hodnotenie zodpovedalo pozitívnemu Marshovmu štádiu. 28

Metódy U 79 pacientov histologické vyšetrenie odhalilo Marsh 3c, u 26 pacientov Marsh 3b a ďalších 27 bolo klasifikovaných ako Marsh 3a. Bolo v histologickom hodnotení indikovaných niekoľko etáp, napr. Marsh 3a 3c, pacienti boli zaradení do najvyššieho stupňa (v príklade Marsh 3c). U štyroch pacientov bolo iba hodnotenie Marsh 3, päť bolo klasifikovaných ako Marsh 2. U pacienta s latentnou celiakiou bolo histologické hodnotenie Marsh 1 (TABUĽKA 3). Obrázok 8 Počet účastníkov a interval medzi odberom krvi U viac ako 50% účastníkov štúdie bola krv odobratá tri až nula dní pred biopsiou. Ďalším 16% účastníkov sa odobrala krv 20 dní pred alebo po biopsii. TABUĽKA 3 Počet pacientov podľa Marshovej fázy Marshova fáza Marsh 1 Marsh 2 Marsh 3a Marsh 3b Marsh 3c Počet pacientov 1 5 27 26 79 U štyroch pacientov bola k dispozícii iba klasifikácia Marsh 3. 30