Stanovenie krvných skupín v systéme ABO (testovacia súprava) - PDF na stiahnutie zadarmo

Stanovenie krvnej skupiny v systéme ABO (testovacia súprava 109.3140) Stupeň stupňa Hlavné témy Podtémy Úroveň požiadavky Úroveň implementácie Predbežná príprava Implementácia SII Imunológia Krvné skupiny Viac alel 30 min Autor: Dr. Evi Derouet-Hümbert Stanovenie krvnej skupiny Už v roku 1875 Landois zistil, že ak sa erytrocyty jahniat zmiešajú s krvou psov a inkubujú sa pri teplote 37 ° C, červené krvinky sa po 2 minútach lýzujú. V roku 1901 Karl Landsteiner (Nobelova cena za medicínu za rok 1930, pozri obr. 41) objavil prvý systém krvných skupín človeka a nazval ho systémom AB0. Toto zostalo dodnes najdôležitejším systémom krvných skupín pri výmene krvi. Po rozsiahlych testoch krvi od členov jeho laboratória definoval 4 krvné skupiny: A, B, AB a 0. Strana 1 z 21

súprava

V krvnej plazme sa vyskytujú aj protilátky (aglutiníny, väčšinou IgM alebo IgG), ktoré môžu mať štyri rôzne antigénne vlastnosti (majú za následok inú látku v krvnej skupine). Toto rozlišuje medzi 4 krvnými skupinami A, B, 0 a AB. Plazma od ľudí s krvnou skupinou A obsahuje aglutinín anti-B (protilátky proti látke z krvnej skupiny B). Plazma krvnej skupiny B obsahuje aglutinín anti-A. Plazma krvnej skupiny 0 obsahuje protilátky aglutinín anti-A a anti-B. Naopak, v plazme krvnej skupiny AB nie sú prítomné žiadne protilátky proti látke z krvnej skupiny A a B. Ak sa erytrocyty (červené krvinky) určitej krvnej skupiny spoja s krvnou plazmou, ktorá obsahuje protilátky proti krvnej skupine, krv sa zrazí. Na laboratórnom stole to vyzerá takto: Strana 3 z 21

0 rhesus pozitívny 35% B rhesus pozitívny 9% A rhesus negatívny 6% 0 rhesus negatívny 6% AB rhesus pozitívny 4% B rhesus negatívny 2% AB rhesus negatívny 1% distribúcia frekvencie v rôznych krajinách (výber) strana 6 z 21

Leukocyty alebo biele krvinky sa ďalej delia na eozinofily, bazofily a neutrofily, granulocyty, monocyty a lymfocyty. Granulocyty sú pomenované podľa sfarbenia svojej protoplazmy a rovnako ako monocyty slúžia nešpecifickej imunitnej obrane, zatiaľ čo lymfocyty sa podieľajú na špecifickej imunitnej obrane. Krvné doštičky sa používajú na zastavenie krvácania a tvoria tak základ prvej fázy hojenia rán. Číselné zloženie krvných buniek sa môže u jednotlivých druhov stavovcov líšiť. Kozy majú obzvlášť vysoký počet erytrocytov (až 14 miliónov/µl), zvlášť nízka hydina (3 4 milióny/µl). Počty leukocytov majú podobne veľké variácie: hovädzí dobytok, kone a ľudia majú okolo 8 000/ul, zatiaľ čo ovce (do 17 000/ul) a vtáky (do 25 000/ul) majú obzvlášť vysoký podiel bielych krviniek. Podiel jednotlivých subtypov leukocytov sa tiež značne líši. Zatiaľ čo u ľudí a koní dominujú granulocyty (granulocytárny krvný obraz), u hovädzieho dobytka sú to lymfocyty (lymfocytárny krvný obraz); u ošípaných je pomer granulocytov k lymfocytom vyrovnaný (krvný obraz granulolymfocytov). Strana 13 z 21

Ako vyzerajú zložky krvi pod mikroskopom? Krvné doštičky Neutrofily (spojené a segmentované) Eozinofily Vľavo: Laloky jadra pôsobia ako dve jednotlivé jadrá. Avšak v bunke obsahuje iba jedno jadro. Bazofily Strana 14 z 21

Ľudia patria a je potrebné ich považovať za zahraničných. Lymfocyty teda patria do adaptívneho imunitného systému - špecifickej obrany - na rozdiel od vrodeného (vrodeného) imunitného systému (napríklad makrofágov). Životnosť lymfocytov sa môže pohybovať od niekoľkých hodín do niekoľkých rokov. Plazmatické bunky tvorené bunkovým delením B lymfocytov majú životnosť niekoľko týždňov, pamäťové bunky, ktoré sú tvorené aj bunkovým delením B lymfocytov, zostávajú v tele niekoľko rokov až doživotne. Lymfocyty plnia svoju úlohu rôznymi spôsobmi. Napríklad uvoľňujú poslové látky (cytokíny), ktoré indukujú ďalšie imunitné bunky a normálne bunky v boji proti potenciálnym nebezpečenstvám, ako sú baktérie a vírusy. Okrem toho produkujú protilátky, ktoré označujú týchto útočníkov ako cudzích, a ničia infikované bunky. Strana 16 z 21

Pokusy uvedené nižšie je možné uskutočňovať s našimi súpravami na stanovenie krvných skupín: 109.3140 Príprava experimentu V nasledujúcich pokusoch si prehĺbite svoje doterajšie vedomosti z oblasti krvných skupín a experimentálne ich podporíte. Pre všetky experimenty noste vhodný ochranný odev (laboratórny plášť, ochranné okuliare a rukavice sú pri práci v laboratóriu povinné). Pokus: hemaglutinačný test Každá skupina dostane mikrotitračný prúžok. Označte tento prúžok takto: Váš učiteľ teraz zmieša 700 µl krvnej skupiny A a 700 µl krvnej skupiny B v samostatnej reakčnej nádobe (kontrola pre krvnú skupinu AB). Teraz pridajte 3 kvapky krvi z každej vzorky pacienta a kontroly do príslušnej jamky. Vždy používajte nový koniec pipety, aby ste zabránili kontaminácii. Teraz pridajte (s novou špičkou pipety) 20 µl anti-A séra do každej jamky v prvom rade. Strana 18 z 21

Potom pridajte (s novou špičkou pipety) 20 ul anti-B séra do každej jamky v 2. rade. Dosky musia teraz nerušene odpočívať 5-10 minút, potom môžete začať s hodnotením. Prezrite si jednotlivé jamky a všimnite si reakciu, pri ktorej došlo k aglutinácii. Výsledky: 1. Zadajte hodnoty (+/-) do nasledujúceho diagramu: 2. Akú krvnú skupinu majú štyria pacienti? 3. Ktorú transfúziu by mohol pacient č. 1 bez problémov dostať? 4. Aký je rozdiel medzi aglutináciou a hemaglutináciou? 5. Z čoho sa vyrába krv? 6. Aký je rozdiel medzi krvnou plazmou a krvným sérom? 7. Aké sú rôzne krvné skupiny? Očakávané výsledky: Nasledujúce výsledky by sa mali získať experimentálne: Strana 19 z 21

Riešenie otázok: Typickým príkladom klinického aglutinačného testu je typizácia krvi. Pretože špecifické antigény v krvi sú na červených krvinkách (erytrocyty), takáto reakcia sa nazýva hemaglutinácia. Krv sa skladá z kvapalnej fázy a tuhých zložiek. Plazma tvorí asi 55% celkového objemu krvi. Ďalšími biologickými zložkami v plazme (asi 10%) sú bielkoviny a rozpustené látky, ako sú elektrolyty a živiny. Plazma je tekutá časť krvi. Niektoré z proteínov v plazme sa významne podieľajú na zrážaní krvi. Ak sa tieto proteíny z plazmy odstránia, zvyšná tekutina sa nazýva sérum. Na základe antigénov na povrchu červených krviniek existujú v systéme krvných skupín ABO štyri možné krvné skupiny: (1) antigén A (2) antigén B (3) antigény AB (A a B) (4) O (ani A.) alebo B antigény). Strana 20 z 21