Steroidná obrazovka

Zvládanie: Prof. Dr. Jerzy Adamski
Ústav: Inštitút experimentálnej genetiky, Helmholtzovo centrum v Mníchove
Domovská stránka: www.helmholtz-muenchen.de/en/ieg/group-molecular-endocrinology/index.html

Steroidy riadia procesy diferenciácie a proliferácie buniek a tkanív. Posledné výsledky tiež naznačujú úlohu metabolizmu steroidov pri apoptóze a neuroregenerácii. Poruchy metabolizmu steroidov prispievajú k patogenéze mnohých multifaktoriálnych ochorení, ako je rakovina, syndrómy polycystických vaječníkov, choroby kostí a chrupaviek alebo neurologické choroby. Niektoré dedičné choroby sú tiež spôsobené poruchami biosyntézy steroidného prekurzora cholesterolu, ako napr B. DETSKÝ syndróm, chondrodysplasia punctata a Smith-Lemli-Opitzov syndróm. Kortikosterón je ďalej dôležitým markerom stresu a metabolických porúch (cukrovka).
Hlavným cieľom skríningu steroidného metabolizmu je identifikovať nové zvieracie modely pre choroby závislé od ľudského steroidného metabolizmu. Na vývoj nových liečebných postupov sa hľadajú zvieracie modely cukrovky, obezity a depresie.

metabolizmu steroidov

Mutantné línie myší s odchylným metabolizmom steroidov sa nachádzajú na primárnej obrazovke. U dospelých myší sa skúmajú rozdiely v koncentráciách steroidov v plazme. Krv sa odoberá retro-bulbám z myší v anestézii a plazma sa produkuje odstredením. Kľúčové steroidy kortikosterón, testosterón a androstendión sú extrahované z plazmy a kvantifikované pomocou hmotnostnej spektrometrie. Myši s nízkym vzrastom, šedý zákal, kožné defekty, malformácie končatín a zhoršená reprodukčná biológia alebo správanie sú najzaujímavejšími kandidátmi na screening, pretože zodpovedajúce fenotypy sa pozorujú aj u ľudských chorôb metabolizmu steroidov.

V našom teste kvantifikujeme niekoľko steroidov (testosterón, kortikosterón, androstendión) myšej plazmy súčasne pomocou metódy HPLC-MS/MS, ktorú sme validovali (Haller et al, 2010).

Obrázok 3: Technológia HPLC-MS/MS v GAC

Ako sekundárny skríning ponúkame kvantifikáciu až 186 endogénnych metabolitov (aminokyseliny, hexózy, glycerofosfolipidy, sfingomyelíny, acylkarnitíny, biogénne amíny) z 10 mikrolitrov myšej plazmy v metabolomickej platforme GAC. Na požiadanie je k dispozícii test ELISA na kvantifikáciu DHEA v plazme.

Príklady publikovaných výsledkov:
Koncentrácia testosterónu v sére samcov myší Srgap3 -/- je znížená, ale nesúvisí s morfologickými zmenami mutanta (Waltereit et al, 2012).

V myšej mutantnej línii NGFN-Ali18, prvom neindukovanom myšom modeli psoriatickej artritídy, dermatitídy a osteoporózy, sme boli schopní detekovať zníženú koncentráciu testosterónu (Abe et al, 2011).

Výsledky primárneho skríningu línie Cox4 - žiadna zmena v DHEA a testosteróne - boli publikované vo FASEB (Huttemann et al, 2012).

Genotypovo špecifické zmenené koncentrácie kortikosterónu sa našli v líniách HMGN1, 3 a 5 na primárnom skríningu. Výsledky publikoval Nucleic Acids Research (Kugler et al, 2013).

Boli publikované výsledky primárneho skríningu línie ADAR2 - žiadna zmena v DHEA a testosteróne (Horsch et al, 2011).