Účinky doplňovania selénu na stav selénu danielov (Dama dama) chovaných v ohrade -

Z Inštitútu pre výživu zvierat, výživové škody a dietetiku Veterinárnej lekárskej fakulty Univerzity v Lipsku Účinky doplňovania selénu na stav selénu danielov (Dama dama) chovaných v klietke Inauguračná dizertačná práca na získanie titulu Doctor medicinae veterinariae (Dr. med.vet.) Veterinárna fakulta Univerzity v Lipsku predložená Sophie Stoebe z Lipska Lipsko, 2011

doplňovania

So súhlasom Veterinárnej fakulty Univerzity v Lipsku dekan: Prof. Dr. Uwe Truyen Vedúci: PD Dr. Recenzentka Ingrid Vervuert: 1. PD Dr. Ingrid Vervuert, Inštitút výživy zvierat, poškodenia výživy a dietetiky na univerzite v Lipsku 2. júna Prof. Dr. Andreas S. Müller, Inštitút pre poľnohospodárske a výživové vedy na Univerzite Martina Luthera v Halle-Wittenberg, Deň obrany v Halle/Saale: 28. júna 2011.

Obsah I Obsah Obsah. I Zoznam obrázkov. V Zoznam tabuliek. VI Zoznam prílohových tabuliek. VIII Zoznam skratiek. IX 1. Úvod. 1 2. Prehľad literatúry. 2 2.1 Se ako chemický prvok. 2 2.2 História Se a jeho bielkovín. 3 2.3 Obsah Se v pôde, rastlinách, potravinách a krmivách. 4 2.3.1 Obsah Se v pôde. 4 2.3.2 Obsah Se v rastlinách. 5 2.3.3 Obsah Se v potravinách. 7 2.3.4 Obsah Se v krmive. 8 2,4 Se v metabolizme. 9 2.4.1 Resorpcia. 9 2.4.2 Preprava, metabolizmus a skladovanie. 10 2.4.2.1 Preprava. 10 2.4.2.3 Skladovanie. 11 2.4.3 Dodávka cez placentu a mlieko. 12 2.4.4 Vylučovanie. 14 2.5 Biologické funkcie Se. 16 2.5.1 SeP. 16 2.5.2 Funkcie. 18 2.5.2.1 Špeciálne funkcie GPx. 18 2.5.2.2 Ďalšie funkcie selenoenzýmov. 20 2.6 Daněk (Dama dama). 21 2.6.1 Systematická a historická klasifikácia danielov. 21 2.6.2 Fyziológia a výživa danielej zveri. 22

II Obsah 2.6.3 Stav SE na Cerviden. 23 2.7 Požiadavka na Se. 24 2.8 Hodnoty Se a enzýmy v organizme. 25 2.8.1 Obsah Se v krvi. 2.8.2 Obsah Se v rôznych orgánoch. 28 2.9 Se a choroby. 30 2.9.1 Choroby spojené s nedostatkom Se. 29 2.9.2 Se toxicita. 31 2.9.2.1 Akútna intoxikácia Se. 32 2.9.2.2 Subakútna intoxikácia se. 33 2.9.2.3 Chronická intoxikácia Se. 33 3 Zvieratá, materiál a metódy. 35 3.1 Cieľ experimentu. 35 3.2 Zvieratá. 35 3.3 Držanie tela. 35 3.4 Kŕmenie a dopĺňanie. 35 3.5 Skúšobný postup. 37 3.6 Odber vzoriek. 38 3.6.1 Vzorky krvi. 38 3.6.2 Vzorky orgánov a tkanív. 38 3.6.3 Váženie. 40 3.6.4 Vzorky krmiva. 41 3.7 Testovacie parametre. 43 3.8 Analytické metódy. 43 3.8.1 Analýza krmiva. 43 3.8.1.1 TS. 43 3.8.1.2 Surový popol (Ra). 44 3.8.1.3 Organické látky (os). 3.8.1.1 dusíkaté látky (Rp). 44 3.8.1.5 Surový tuk (Rfe). 44 3.8.1.6 Surová vláknina (Rfa). 44 3.8.1.7 Extraktné látky bez obsahu N (NfE). 3.8.1.1 Stopové prvky: Se, Cu, Zn. 45 3.8.2 Analýza celej krvi, plazmy, orgánov a tkanív. 45

Obsah III 3.8.2.1 Histológia kostrových svalov. 45 3.8.2.2 Obsah obsahu. 46 3.8.2.3 Obsah DM. 47 3.8.2.4 Aktivita GPx. 47 3.8.2.5 Obsah bielkovín. 48 3.8.2.6 Obsah hemoglobínu. 49 3.8.2.7 Expresia GPx mRNA. 3.8.2.8 Aktivita α-glutatión-S-transferázy (GST). 53 3.9 Štatistické hodnotenie. 54 4. Výsledky. 55 4,1 km zvierat a hmotnosti polovičiek tiel. 4.1.1 KM zvierat na začiatku experimentu. 55 4.1.2 Hmotnosti polovičiek, ktoré sa majú testovať. 55 4.2 Histológia kostrových svalov. 56 4.3 Obsah Se v plazme, celej krvi a orgánoch. 58 4.3.1 Obsah Se v plazme a celej krvi. 58 4.3.2 Obsah Se v rôznych orgánoch. 59 4.4 En-závislé a Se-nezávislé enzýmy. 4.4.1 Aktivity GPx v plazme a celej krvi. 4.4.2 Aktivita GPx v rôznych orgánoch. 62 4.4.3 Expresia mRNA GPx. 63 4.4.4 aktivita α-gst. 64 5. Diskusia. 67 5.1 Kritika metód. 67 5.1.1 Suplementácia zvierat. 67 5.1.1.1 Príjem krmiva. 67 5.1.1.2 Výška doplnku Se. 67 5.1.1.3 Trvanie suplementácie Se. 68 5.1.1.4 Typ doplnku Se. 68 5.1.2 Odber vzoriek. 69 5.1.3 Parametre vyšetrenia. 5.1 5.1 Vitamín E. 69 5.2 Diskusia o výsledkoch testu. 70

IV Obsah 5.2.1 Posúdenie dodávky Se pred doplnením Se. 70 5.2.2 Posúdenie ponuky Se po rôznych doplnkoch Se. 72 6. Zhrnutie. 81 7. Zhrnutie. 83 8. Bibliografia. 85 9. Príloha ... 110 Poďakovanie. 117

VIII Zoznam dodatkových tabuliek Zoznam dodatkových tabuliek Dodatková tabuľka 1: Dodatková tabuľka 2: Dodatková tabuľka 3: Dodatková tabuľka 4: Dodatková tabuľka 5: Dodatková tabuľka 6: Dodatková tabuľka 7: Obsah Se v krvi a plazme testovanej a kontrolnej skupiny v μg/l na začiatku a na konci testu . 110 Se obsahy v rôznych orgánoch testovanej a kontrolnej skupiny v μg/kg DM na konci testu. Aktivita 111 GPx v krvnej plazme testovanej a kontrolnej skupiny v mu/mg proteínu na začiatku a na konci testu. Aktivita 112 GPx v celej krvi testovanej a kontrolnej skupiny v U/g Hb na začiatku a na konci testu. 113 aktivít GPx v rôznych orgánoch testovanej a kontrolnej skupiny v μ/mg proteínu. 114 Expresia GPx-1 a GPx-4 RNA v pečeni a kostrovom svale testovanej a kontrolnej skupiny v ng/ul. 115 Aktivita α-gst v pečeni testovanej a kontrolnej skupiny v μ/mg proteínu. 116

Zoznam skratiek IX Zoznam skratiek AS cdna cgpx crna d DEPC DI dntp ds DNA ε FMVO gesgpx GfE GPx GSH GSSG GSSP GST H.-E. n/a KM LFGB M./Mm. ME Met mrna MW n NADP + NADPH Aminokyselina (y) komplementárna deoxyribonukleová kyselina bunková glutatiónperoxidáza hrúbka vrstvy doplnkovej ribonukleovej kyseliny kyvety zmes dietylpyrokarbonátdiodinázy a nukleotidovej zmesi dvojvláknová závislá od deoxyribonukleovej kyseliny závislá od celkovej deoxyribonukleovej kyseliny závislá od výživy závislá od spoločnosti závislá od glutatión-peroxidázy Domáce zvieratá Glutatiónperoxidáza Glutatión Glutatión disulfid Bielkoviny Glutatión Glutatión transferáza Hemalum eozín žiadne údaje Telesná hmotnosť, spotrebný tovar a krmivo Kód Musculus/Musculi konvertibilná energia Metionín posol ribonukleová kyselina Priemerná hodnota amid-adenidín-fosfát amid-kyselina nikotínová

X Zoznam skratiek NBD-Cl NfE NMD os PCR PHGPx pn pp PUFA r Ra Rfa Rfe Rp rpm RTD-PCR S Sd Se SeCys SeGPx SeMet SeP SKH TrinkwVO TrxR TS TVT us VF E 7-Chlór-4-nitobenzo-2-oxa-1, 3-diazol extrakty bez obsahu N výživná svalová dystrofia organická látka polymerázová reťazová reakcia fosfolipid-hydroperoxid-glutatión-peroxidáza postnatum po pôrode polynenasýtené mastné kyseliny reverzný popol surová vláknina surový tuk surové bielkoviny otáčky za minútu polymerázová reťazová reakcia v reálnom čase síra štítna žľaza selén selénperoxidáza Selenometionín Selenoproteín polovica jatočného tela Regulácia pitnej vody Tioredoxín reduktáza Suchá látka Veterinárna asociácia pre dobré životné podmienky zvierat Pôvodná látka Riediaci faktor Extinčný rozdiel za minútu