Autoradiografia - biológia

Aké horúce je príliš horúce na život hlboko pod dnom oceánu?

Antibiotiká z baktérií

Migrácia buniek: novoobjavená funkcia známeho proteínu

Molekulárny kompas na zarovnanie buniek

Čo robí listy na jeseň starnúcimi

Demokracia perličiek

Prostredie spoločnosti Ekembo: Ľudia tiež žili v otvorenej krajine

| Genetika | Poľnohospodárstvo, lesníctvo a chov zvierat

Pšeničná odroda vznikla krížením divých tráv

Aké horúce je príliš horúce na život hlboko pod dnom oceánu?

Autorádiografia

Tento článok alebo nasledujúca časť nie je dostatočne vybavená podpornými dokumentmi (napr. Individuálnymi dôkazmi). Predmetné údaje sú preto pravdepodobne čoskoro odstránené. Pomôžte Wikipedii preskúmaním informácií a pridaním dobrých dôkazov. Viac podrobností možno nájsť na diskusnej stránke alebo v histórii verzií. Nakoniec odstráňte túto výstražnú značku.

biológia

Autorádiografia alebo Rádiografia (častá skratka AURA) označuje vizualizáciu chemickej zložky pomocou rádioaktívnych izotopov, pôvodne pomocou čiernenia fotografického filmu, v čoraz väčšej miere pomocou detektora žiarenia. Získaný záznam je Autorádiogram zavolal.

Aplikácie

Po tri desaťročia bola autorádiografia neoddeliteľnou súčasťou Sangerovej sekvenčnej analýzy DNA. Od posledných rokov 20. storočia sa však na sekvenčnú analýzu čoraz viac používajú fluorescenčné nukleotidy namiesto rádioaktívne označených DNA.

Autorádiografia sa tiež používa na výrobu rekombinantných proteínov, analýzu enzymatických reakcií alebo identifikáciu enzýmových substrátov.

Používa sa tiež vo farmakokinetike na vykonávanie štúdií LADME (Absorpcia distribúcie oslobodenia od distribúcie metabolizmu).

exekúcia

Pre všetky aplikácie autorádiografie je spoločná potreba pašovať rádioaktívne izotopy do molekúl, ktoré sa majú analyzovať. Z dôvodu častého výskytu zodpovedajúcich stabilných izotopov v biomolekulách a ich relatívne nízkeho rizika sa často používajú rádioizotopy 14 C (uhlík), 35 S (síra), 32 P (fosfor) a 3 H (trícium).

Na bakteriálny kmeň transformovaný expresným plazmidom sa pôsobí živným médiom, ktoré obsahuje rádioaktívne značenú aminokyselinu 35S-metionín. 35 S-metionín je inkorporovaný do rekombinantného proteínu, ktorý je kódovaný v plazmide. Bakteriálny extrakt sa oddelí pomocou SDS-PAGE, gél sa vysuší a nanesie sa film. Potom, čo je film „vystavený“ beta lúčom emitovaným izotopmi, je na vyvinutom filme viditeľná poloha rekombinantného proteínu.

2. príklad - analýza aktivity enzýmu

ATPáza, enzým, ktorý štiepi nukleotidový ATP, sa inkubuje s rádioaktívne označeným32P-ATP. Zmes sa po rôznych časoch oddelí tenkovrstvovou chromatografiou, chromatografická platňa sa vysuší a umiestni na film. Sčernanie filmu pomocou 32P-fosfátu odráža aktivitu enzýmu.