DNA Epstein-Barr-vírusu (EBV) v krvi (kvantitatívna) - Synevo
Všeobecné informácie
Vírus Epstein-Barr (EBV) je spájaný s celým radom benígnych a malígnych ochorení vrátane: infekčnej mononukleózy, lymfómu, posttransplantačného lymfoproliferatívneho syndrómu a nazofaryngeálneho karcinómu.
Stanovenie vírusového genómu EBV-DNA sa v klinických laboratóriách čoraz viac využíva pri diagnostike a monitorovaní chorôb vyvolaných touto infekciou 6 .
Infekcie EBV sú veľmi rozšírené, takže vo veku 35 - 40 rokov 95% dospelých prišlo do styku s týmto vírusom. Mnoho detí dostane infekciu skoro v živote, ale vo väčšine prípadov je asymptomatická alebo sa vyvinie ako mierna infekcia horných dýchacích ciest 7. U dospievajúcich a mladých dospelých môže primárna infekcia EBV spôsobiť v 35-50% prípadov infekčnú mononukleózu - benígny lymfoproliferatívny stav charakterizovaný horúčkou, fyzickou asténiou, faryngitídou a polyadenopatiou.
Pre primárne infekcie je charakteristická zvýšená virémia, ktorá klesá na nedetegovateľné hodnoty, keď imunitný systém infekciu rozpozná a reguluje. Rovnako ako iné herpes vírusy, aj EBV môže zostať v tele v pokojnom stave roky (latentná infekcia). Periodické reaktivácie sprevádza prechodná virémia. U niektorých pacientov sa neskôr vyvinú novotvary spojené s EBV infekciou a ako charakteristický znak majú veľmi vysokú hladinu virémie. Kvantitatívne stanovenie EBV-DNA teda nielen detekuje aktívnu infekciu, ale je aj „nádorovým markerom“ pre určité typy malígnych procesov 2; 3; 4; 9 .
Nádory spojené s EBV sú posttransplantačné lymfoproliferatívne syndrómy, nazofaryngeálny karcinóm, lymfómy spojené so syndrómom získanej imunodeficiencie (AIDS) a Burkittov lymfóm. .
Cieľovou bunkou pre infekciu EBV je lymfocyt B. Imunokompromitovaní pacienti, ktorí nemajú protilátky proti EBV (často deti), sú vystavení riziku vzniku akútnej infekcie EBV, ktorá môže spôsobiť lymfoproliferatívne syndrómy; patria sem posttransplantačné lymfoproliferatívne syndrómy a lymfómy spojené so syndrómom získanej imunodeficiencie (AIDS) 5. Výskyt posttransplantačných lymfoproliferatívnych syndrómov sa pohybuje od 1% u pacientov po transplantácii obličky po 9% u pacientov po transplantácii srdca/pľúc a 12% u pacientov po transplantácii pankreasu 7 .
Odporúčania pre kvantitatívne stanovenie EBV-DNA
Sérologická diagnóza je zriedka užitočná pri hodnotení infekcie u pacientov so zníženou imunitou a pri monitorovaní nádorov vyvolaných EBV, najmä po transplantácii. Pretože kultúra vírusu nie je prístupná klinickému laboratóriu, usudzuje sa, že EBV-DNA môže slúžiť ako „nádorový marker“ pri hodnotení lymfoproliferatívnych chorôb a nazofaryngeálneho karcinómu 2. Hladina DNA v krvi (kvantifikovaná kvantitatívnou PCR) sa začína zvyšovať niekoľko mesiacov pred nástupom lymfoproliferatívneho ochorenia a po začatí liečby klesá. Z tohto dôvodu môže byť stanovenie EBV-DNA v krvi prediktívnym markerom u vnímavých pacientov, pretože je možné odhadnúť riziko vzniku posttransplantačných lymfoproliferatívnych syndrómov v nasledujúcich 3 - 4 mesiacoch v závislosti od hodnôt virémie. Sériové stanovenia EBV-DNA sú tiež užitočné pri hodnotení odpovede na liečbu pacientov s lymfoproliferatívnymi ochoreniami 6 .
V nazofaryngeálnom karcinóme je virémia na začiatku vysoká, klesá počas rádioterapie, stáva sa nedetekovateľnou po dosiahnutí remisie, ale pretrváva v relapsoch 1; 4 .
Výcvik pacientov - nevyžaduje sa 6 .
Odobratý exemplár - krv príde 6 .
Zberová nádoba - vacutainer obsahujúci EDTA ako antikoagulant 6 .
Zozbierané množstvo - koľko umožňuje vákuum 6 .
Po zbere potrebné spracovanie - test nie bude odstredený 6 .
Príčiny odmietnutia dôkazov - staré, zrážané, hemolyzované vzorky; použitie heparínu ako antikoagulancia 6 .
Vyskúšajte stabilitu - vzorky krvi sú stabilné 3 dni pri 2 - 8 ° C Vzorky nezmrazujú! 6 .
Metóda - PCR v reálnom čase: reťazová polymerizačná reakcia s detekciou nahromadeného produktu PCR v reálnom čase meraním emitovanej fluorescencie 6 .
Detekčný limit - Detekčný limit pracovnej metódy v rozsahu linearity (merateľný) je 2415 IU/ml. Analytická citlivosť je 1 800 IU/ml. 1 IU/ml = 0,61 kópií/ml 6 .
Interpretácia výsledkov
Hodnoty virémie, ktoré sa postupne zvyšujú pri sériových stanoveních, naznačujú posttransplantačné lymfoproliferatívne syndrómy.
Pacienti so zníženou imunitou, ktorí majú reaktiváciu infekcie, ale nevyvinú sa u nich lymfoproliferatívne syndrómy, majú zvyčajne nízku hladinu virémie.
V niektorých situáciách môže analyzátor indikovať hodnoty pod detekčným limitom metódy. Budú komunikované so zmienkou: „Výsledok nemusí byť reprodukovateľný kvôli malému počtu kópií vírusového genómu“ 8 .
Limity a interferencie
Sériové stanovenia EBV-DNA sú pri hodnotení rizika posttransplantačného lymfoproliferatívneho syndrómu oveľa užitočnejšie ako izolovaná virémia 8. .
1. Chan AT, Lo YM, Zee B, Chan LY, Ma BB, Leung SF, Mo F, Lai M, Ho S, Huang DP, Johnson PJ. Plazmatická DNA vírusu Epstein-Barrovej a zvyškové ochorenie po rádioterapii na nediferencovaný nazofaryngeálny karcinóm. In J. Natl Cancer Inst, 2002; 94: 1614-1619.
2. Autori: David H. Persing, Thomas F. Smith, Fred C. Tenover. PCR detekcia a typizácia vírusu Epstein-Barr. In Diagnostická molekulárna mikrobiológia. 1993. 344-355
3. Ventilátor H, Gulley ML. Meranie vírusovej záťaže Epstein-Barrovej ako markeru ochorenia súvisiaceho s EBV. In Mol Diagn. 2001; 6: 279-289.
4. Gulley ML, Tang W. Laboratórne testy na choroby spojené s vírusom Epstein-Barr. In J Molec Diagn, 2008; 10: 279-292.
5. Guy Boivin. Diagnóza herpesvírusovej infekcie centrálneho nervového systému. In Herpes 11. Supplement 2004; 2, 49-54.
6. Laboratórium Synevo. Konkrétne odkazy na použitú technológiu práce. 2015. Typ odkazu: katalóg.
7. Luderer Rianne a kol. Real Time Epstein-Barr Virus PCR na diagnostiku primárnych infekcií EBV a reaktiváciu EB. In Molecular Diagnosis, 2005; 9 (4): 195-200.
8. Mayo Clinic/Mayo Medical LaboratoriesTest katalógy a príručky. Detekcia DNA vírusu Epstein-Barr (EBV) pomocou PCR, kvantitatívne, krv. www.mayomedicallaboratories.com. Typ odkazu: Internetová komunikácia.
9. Ryan JL, Fan H, Swinnen LJ, Schichman SA, Raab-Traub N, Covington M, Elmore S, Gulley ML. DNA vírusu Epstein-Barr (EBV) v plazme nie je enkapsidovaná u pacientov s malignitami súvisiacimi s EBV. In Diagn Mol Pathol. 2004; 13: 61-68.