Dôležitosť a aplikácie laboratórnych analýz u neplodnosti sučky (prehľad)

Dôležitosť a použitie niektorých laboratórnych testov na neplodnosť sučky (prehľad)

Prvýkrát zverejnené: 10. novembra 2016

Redakčná skupina: MEDICHUB MEDIA

Abstrakt

Táto štúdia je súhrnom niektorých laboratórnych prostriedkov a metód používaných pri vyšetrovaní prípadov, ktoré môžu súvisieť s reprodukčnými chorobami a patológiou, respektíve neplodnosťou, u súk. Budú sa diskutovať možné príčiny a sérologické, cytologické, bakteriologické a imunologické hodnotenia s cieľom zdôrazniť udalosti prebiehajúce počas sledovania rodu, správneho riadenia a optimálnych podmienok chovu u sučky, ako aj identifikácie synkopov pri ich hodnotení.

Zhrnutie

Predložená štúdia je zhrnutím niektorých metód a paraklinických laboratórnych prostriedkov zapojených do vyšetrovania niektorých prípadov, ktoré môžu byť zahrnuté v oblasti reprodukčných porúch a patológie, na tému neplodnosti sučky. Budú uvedené a diskutované možné príčiny a vyhodnotenia sérologického, cytologického, bakteriologického a imunologického poriadku so zámerom zvýrazniť a upozorniť na kaskádu udalostí, ktoré sa týkajú estrálneho monitorovania, dobrého riadenia a optimálnych podmienok pre chov sučiek, ako aj identifikácie synkopov v ich hodnotenie.

Neplodnosť možno považovať za opak plodnosti a vyjadruje neschopnosť pohlavne dospelých žien sa množiť. Toto sa považuje za prechodnú reverzibilnú poruchu na rozdiel od sterility, ktorá je definitívnou a nezvratnou poruchou reprodukčnej funkcie. Kauzálne faktory týchto patologických stavov môžu pôsobiť od prvých štádií vývoja nového organizmu, počnúc štádiom zygoty, potom vo fázach embryonálnej organogenézy a vývoja plodu a potom v mimomaternicovom živote (od telenia do puberty a potom v genitálnom období). ). Gynekologický prieskum je zameraný na individuálne znalosti každého zvieraťa a jeho klasifikáciu vo fyziologickom alebo patologickom stave z reprodukčného hľadiska, na poznanie všeobecnej situácie hlavných reprodukčných indexov, ako aj opatrení, ktoré je potrebné urýchlene uplatniť na ich zlepšenie. Pretože je možné interferovať s pôsobením viacerých škodlivých faktorov, ktoré môžu sťažiť stanovenie etiologickej diagnózy, musí odborník zviera zvlášť pozorne preskúmať.

Pred samotným gynekologickým vyšetrením je potrebné analyzovať tieto prvky: výživa, hygiena, podmienky údržby, pohyb a odpočinok stáda, epidemiologická situácia, vykonávanie umelých oplodnení atď. Prvky, na základe ktorých sa vykonáva gynekologické vyšetrenie, sú: anamnéza a interné a externé klinické vyšetrenie (Bîrţoiu A., Seiciu F., 2006).

Medzi najčastejšie príznaky, ktoré sa vyskytujú u psov neschopných reprodukcie, patria nepravidelné rody, neschopnosť otehotnieť, váha pri nadviazaní sexuálneho kontaktu a strata tehotenstva. Na pomenovanie plodnosti v normálnych medziach u sučky s reprodukčnou schopnosťou zdravých kurčiat je potrebný normálny a pravidelný estrus so zdravým reprodukčným systémom, normálnymi vajíčkami, reprodukčnými hormónmi v optimálnych a konštantných medziach, oplodnením bez abnormalít spermiou, reakciou. pozitívum implementačného prostredia vytvoreného zygoty, jeho hniezdenia v endometriu, normálneho umiestnenia placenty a podpory gestácie až do termínu, stabilných koncentrácií progesterónu. Všetky tieto podmienky sa musia udržiavať na optimálnej úrovni počas dvoch mesiacov tehotenstva, inak sa reprodukčný proces zmení, čo vedie k neplodnosti (Fontbonne A., 2006).

Neplodnosť môže postihnúť sučky všetkých vekových skupín, ale má tendenciu sa objavovať medzi geriatriou. U psov starších ako 6 rokov je častou príčinou cystická hyperplázia endometria. U psov, u ktorých sa v minulosti vyskytli infekcie maternice, sa môžu vyskytnúť ťažkosti aj pri implantácii oplodneného vajíčka. Ale vo väčšine prípadov je hlavnou príčinou neplodnosti inseminácia počas nesprávneho obdobia estru. Plemená psov náchylné na zlyhanie štítnej žľazy majú vyššiu prevalenciu problémov s plodnosťou. Plemená so zvláštnym rizikom hypotyreózy sú boxer, dobermán, jazvečík, zlatý retriever, nemecký buldog, írsky setr, trpasličí knírač a pudel.

Ďalšie kritériá, ktoré môžu hrať úlohu pri znižovaní možnosti reprodukcie u súk, sú:

psí vírus;
infekcie Toxoplasma spp .;
antispermové protilátky;
antimüllerian protilátky;
hiperadenocorticism;
hypotyreóza;
narušené funkcie vaječníkov;
chromozomálne aberácie;
vírusové alebo parazitárne systémové infekcie;
faktory neplodnosti u psa;
subklinické infekcie maternice;
Brucella canis;
nedostatok stimulácie pred kopuláciou s cieľom vyvolať ovuláciu sučky.

Hlavnou metódou kontroly estrálneho štádia sučky je vaginálna cytológia.

Všetky zmeny pozorované vo vaginálnej cytológii počas estru sučky sú dôsledkom zmien v koncentrácii estrogénu v tele. Pochopenie mechanizmu, ktorým k týmto zmenám dochádza, a ich následných viditeľných účinkov v cytológii v klinickom prostredí pomôže lekárovi pri kreslení grafu normálnych a abnormálnych cyklov. Estrogén sa produkuje steroidogénnou cestou, počínajúc bunkami teka, kde rôzne enzýmy premieňajú cholesterol na rôzne tehotenstvá a pravdepodobne na androstendiónové androgénne hormóny, ktoré sa následne transportujú pozdĺž bazálnej membrány do buniek granulózy (Okkens et al., 2006).

Stanovenie sérového progesterónu

U súk progesterón pôvodne pochádza z luteálneho tkaniva vaječníkov. Počas anestézie sú bazálne hladiny progesterónu v sére zvyčajne nižšie ako 1 ng/ml.

Počas proestru dochádza v niektorých folikulárnych bunkách k preovulačnej luteinizácii, ktorá niekoľko dní pred ovuláciou mení svoju produkciu estrogénu na produkciu progesterónu (Concannon, P.W., 2006). Sérové koncentrácie progesterónu počas proestra pomaly stúpajú okolo 1 ng/ml, kde sa stabilizujú niekoľko dní až takmer dva týždne. V určitom okamihu začnú koncentrácie opäť stúpať a dosiahnu okolo 5 ng/ml skôr, ako fena ovuluje (Concannon, P.W., 1977). Po začatí tohto zvyšovania progesterónu zostáva jeho rýchlosť rastu u súk konštantná, a preto klinický lekár môže korelovať fyziologické javy maxima sekrécie LH, ovulácie a začiatku plodného obdobia s príslušnými koncentráciami sérového progesterónu.

Existujú hermafroditické zvieratá so špecifickými zmenami na genitálnej úrovni, ktoré súvisia s chromozomálnymi, gonadálnymi a sexuálnymi fenotypovými aberáciami (Meyers - Wallen, 1993).

Aneuploidia, čo je chromozomálna aberácia meiózy alebo mitózy, ktorá vedie k trizómii alebo monozómii, je ďalšou dôležitou príčinou neplodnosti sučky. Genetické mutácie, ktoré ovplyvňujú vývoj psa, sa môžu vyskytnúť počas jedného z 3 základných bodov koncepcie: 1) počas chromozomálneho založenia rodu - monozómia (XO), trizómia (XXX alebo XXY) alebo chimérizmus (niektoré bunky XX, iné XY) tomu istému jednotlivcovi); 2) pri preklade rodu z chromozomálnej úrovne na úroveň gonád (rozdiel medzi skutočným pohlavím chromozómov a pohlavnými orgánmi, napríklad vaječníkmi feny sú XY, nie XX); 3) počas vývoja reprodukčného traktu a orgánov (vonkajší vzhľad ženských, ale s mužskými reprodukčnými orgánmi). Keď nastane jedna z týchto situácií, je normálna reprodukčná funkcia inhibovaná a nastáva trvalý a nezvratný stav anestézie (Breen et al., 2001).

Abnormality sexuálnej diferenciácie: lymfocytová ooforitída, luteálne cysty z vaječníkov, hypofýzová nedostatočnosť, aplázia/hypoplázia vaječníkov.

Atypický syndróm kortizol-estrogénovej nerovnováhy (ACEIS) identifikuje prítomnosť neaktívneho alebo nedostatočného kortizolu, ktorý umožňuje produkciu veľkého množstva adeno-estrogénu. Tento nadbytok sa viaže nielen na receptor hormónov štítnej žľazy, ale tiež narúša imunitný systém, ktorý už viac nechráni pacienta. K zvýšeniu celkového estrogénu teda dochádza v dôsledku nerovnováhy danej strednou vrstvou adeno-hypofýzovej kôry s tvorbou kortizolu. Táto nerovnováha môže byť spôsobená nedostatkom, väzbou alebo inaktiváciou kortizolu, vysokou koncentráciou alebo takmer nulovou koncentráciou (Plechner, A.J., 2004).

Vplyv výživy na neplodnosť

Ak je v strave príliš veľa sacharidov, ktoré sa premieňajú na cukry (obilniny, zemiakový škrob, hrášok, mrkva a sladké zemiaky, ako aj jednoduché cukry ako med, ovocie a fruktóza), táto strava zvyšuje hladinu cukru v tele. vyrásť. To zase spôsobí uvoľnenie inzulínu na zníženie hladiny cukru. Keď hladina cukru klesne, uvoľní sa kortizol, ktorý pomáha zvyšovať hladinu cukru. Táto reakcia má bumerangový efekt s efektom tam a späť, ktorý môže spôsobiť vyčerpanie inzulínu. Tento tok ovplyvňuje hladinu estrogénu, progesterónu a testosterónu. Keď sa kortizol uvoľňuje opakovane v reakcii na stravu s vysokým obsahom cukru, súťaží s progesterónom o rovnaké receptory a kortizol sa zvyšuje vždy. A progesterón je nevyhnutný pre plodnosť (Olson, L., 2015).

Hypotyreóza je spojená s neplodnosťou a je charakterizovaná anestéziou, nepravidelnosťou estrálneho cyklu a predĺženým krvácaním z proestry (Johnson, 1980; Nesbitt a kol., 1980). Problémy s reprodukciou spojené s hypotyreózou sú spôsobené vysokými hladinami prolaktínu v sére (Chastin a Ganjam, 1986).

Antimülleriánsky hormón (AMH), člen homodimérneho glykoproteínu rodiny rastového faktora b (TGF-b), nazývaný tiež Müllerianova inhibičná látka, bol študovaný predovšetkým pre jeho úlohu pri regulácii diferenciácie mužov v embryonálnom období. Teda hormón produkovaný Sertoliho bunkami fetálneho semenníka indukuje regresiu Müllerových vývodov, primárnych prvkov ženského reprodukčného traktu, a tým prispieva k normálnemu vývoju mužských pohlavných orgánov. S nástupom puberty, AMH, rovnako ako inhibín B, je produkovaný bunkami granulovanej vrstvy ovariálnych rastových folikulov a nie primordiálnymi folikulami ani antrálnymi folikulami v konečnej rastovej fáze (pod priamou reguláciou FSH). Vďaka špecifickej expresii neselektovaných rastových folikulov (potenciálne plodných primárnych a sekundárnych folikulov) v bunkách zrnitej vrstvy je AMH ideálnym markerom na odhad rezervy vaječníkov (Visser et al., 2006).

Nízka expresia AMH s nízkym obsahom folikulov zníži prahovú hodnotu pre FSH, čo spôsobí, že folikuly budú v ďalšom cykle pokračovať v raste a ovulácii (Durlinger et al., 1999; Durlinger, 2002).

Syndróm pseudogestácie

Syndróm pseudogestrácie sa vyskytuje u netehotných súk po 6-12 týždňoch estru a je charakterizovaný známkami vulválneho edému, laktácie a zväčšenia mliečnej žľazy (Jones a kol., 1988).

Vaginálne neoplazmy sú najbežnejším typom nádoru v reprodukčnom systéme sučky (Manothaiudom et al., 1991). Najdôležitejšie vaginálne neoplazmy sú: prechodný bunkový karcinóm močovej trubice (CBT), prenosné pohlavné nádory (TVT), karcinóm dlaždicových buniek (SCC), leiomyóm a fibropapillum. Tieto vaginálne nádory sú zvyčajne prítomné u geriatrických psov, s výnimkou pohlavných nádorov, ktoré sa zvyčajne vyskytujú v mladosti.

Zvyčajnými diagnostickými metódami pre tieto nádory sú fyzikálne vyšetrenie, kompletný testovací panel, palpácia (digitálne vyšetrenie), vaginoskopia, vaginálna cytológia a chirurgická biopsia.

Imunologický základ neplodnosti

Patologická imunitná odpoveď je jednou z etiológie neplodnosti, aj keď zatiaľ nie je veľa dôkazov. Hlavným cieľom štúdia tejto etiológie by bolo syntetizovať údaje o tolerancii antigénu, jeho strate, imunitnej patogenéze, ktorá vyvoláva neplodnosť, a jeho laboratórnej diagnostike (Smith a kol., 1999).

Autoimunita a antigénne ciele v patológii vaječníkov

O zapojení autoimunitných mechanizmov do predčasného ukončenia funkcie vaječníkov diskutovalo veľa odborníkov. Pri niektorých patológiách vaječníkov, ako je idiopatická neplodnosť, syndróm polycystických vaječníkov alebo endometritída, sa navrhujú podobné mechanizmy. V každom prípade presná úloha autoimunity v patofyziológii týchto chorôb stále zostáva kontroverzná. Diagnóza autoimunitného ochorenia vaječníkov je založená na klinickom, biologickom a histologickom vyšetrení, osobitný záujem sa však venuje antiovariálnym autoprotilátkam.

Ako terče sú zapojené steroidogénne enzýmy, gonadotropíny a ich receptory, luteálne telo, pellucidová oblasť a oocyt.

Ženská tolerancia voči antigénom spermií

Ženské pohlavné ústrojenstvo je lemované bunkami imunitnej zložky, ktoré fagocytujú spermie a spracúvajú svoje antigény na imunitné rozpoznanie. Tento mechanizmus môžu ovplyvniť nasledujúce faktory:

n z veľkého počtu spermií uvoľnených v hornej časti vagíny je možné, že iba malá časť, imunologicky odlišná od zvyšnej väčšiny, získa prístup do vajíčkovodov; eliminácia spermií z genitálneho traktu znižuje počet tých, ktorí získajú prístup k imunitnému systému; degradácia antigénov spermií extracelulárnymi enzýmami špecifickými pre maternicu; fagocytóza spermií somatickými a makrofágovými bunkami, chemotaktická príťažlivosť pre makrofágy a neutrofily v maternicovom krčku maternice a v peritoneálnej dutine; nešpecifická väzba imunoglobulínov alebo prirodzene nepatogénnych protilátok na zrelé spermie, ako predbežný účinok na ich fagocytózu. Tento mechanizmus môže zase zvyšovať fagocytózu a imunogenicitu; prítomnosť imunosupresívnych faktorov v semene a folikulárnej tekutine atď.

Pre semenníky aj vaječníky nastáva, keď sa rovnováha nakloní v prospech patogénnych reaktívnych T buniek v sebe, a to: 1. vyčerpaním supresorových (regulačných) T buniek a 2. aktiváciou patogénnych reaktívnych T buniek v sebe samom.

Medzi vaječníky patria rozpoznané štruktúry autoprotilátok: oocyty a folikuly, pellucidová oblasť, granulózne bunky, fekálne bunky, luteálne bunky a choriové gonadotropínové receptory. Bola by možná úloha hyperstimulácie vaječníkov pred oplodnením in vitro pri produkcii autoprotilátok vaječníkov, ako aj opakované traumy z vaječníka extrakciou oocytu na oplodnenie in vitro (Agarwal et al., 2007).

Antispermové protilátky (ASA)

Skutočnosť, že spermie môžu vyvolať výskyt protilátok, je dobre známa už od roku 1899. ASA sú zistiteľné u nevysvetliteľnej neplodnosti u 7-15% mužov a 13-80% žien.

Nachádza sa v sére, sperme, na povrchu spermií a v hliene krčka maternice. Patria do triedy imunoglobulínov IgG, IgM a IgA.

Laboratórne vyšetrenie imunologickej neplodnosti

Doteraz bolo predložených veľmi málo bunkami sprostredkovaných imunitných testov. Je to spôsobené zložitosťou bunkového imunitného systému, ako aj zložkami sprostredkujúcimi neplodnosť, ktoré sa stále definujú a vyvíjajú. Ak existuje podozrenie na neplodnosť spôsobenú ASA (nevysvetliteľná neplodnosť), môže sa použiť jeden z dostupných testov. Sú rozdelené do 5 skupín:

Aglutinačné testy - makro: Gélový aglutinačný test (GAT); Zmiešaná antiglobulínová reakcia (MAR); Test Immunobead® je špecifický postup používaný na detekciu prítomnosti protilátok IgG, IgM a IgA, ktorý demonštruje, ktorá oblasť spermií (hlava, krk alebo chvost) ovplyvňuje autoprotilátky. Spermie sa kombinujú s polyakrylamidovými časticami, predtým potiahnutými buď anti-IgG, anti-IgM alebo anti-IgA.

Fluorescencia protilátok: imunofluorescencia (IF); prietoková cytometria.

Kolorimetria: Enzýmovo viazaný imunosorbentný test (ELISA).

Rádioimunitné hodnotenie: Rádioaktívne značený antiglobulínový test.

Každý z týchto testov má svoje výhody aj nevýhody. Pre úplné vyhodnotenie je vhodné použiť všetky tieto testy, ktoré poskytujú lokalizáciu, izotyp a kvantifikáciu väzieb medzi protilátkami.

Luteálna nedostatočnosť sučky ako dôsledok autoimunitnej odpovede na progesterón

Skrátenie estrálneho cyklu, smrť embryí a potraty môžu byť spojené s nedostatočnou sekréciou progesterónu v luteálnom tele sučky. Kontroluje sa koncentrácia progesterónu, prolaktínu a relaxínu v hypoluteickej fáze a kontrola počas tehotenstva a počas netehotného estrálneho cyklu. Ďalej sa psie antiprogesterónové protilátky analyzovali na možnú stratu embryí spojenú s hormonálnymi zmenami, korelovanú s odpoveďou hormonálnych protilátok (Jenny K. a kol., 2006).

Diferenciálna diagnóza neplodnosti sa robí medzi problémami s riadením a klinickým protokolom o časovom limite ovulácie, sučky, ktoré následne neumožnili pripevnenie alebo nechytili paseku po nútenom pripojení alebo umelom oplodnení, pričom sa kontroluje počas plodného obdobia POĽNOHOSPODÁRI.

Obdobia vnímavosti a plodnosti počas estru sa významne líšia u normálnych súk, a dokonca aj u jednotlivca v nasledujúcich cykloch. Tieto obdobia sa nemusia zhodovať s počiatočnou voľbou optimálneho času dodania, desiaty - 14. deň po prvom vaginálnom krvácaní. Protokoly na stanovenie načasovania ovulácie pomocou vaginálnej cytológie, opakovanej vaginoskopie a kontroly hladín progesterónu a LH sú užitočné pri identifikácii plodného obdobia, v ktorom je potrebné zahájiť očkovanie, čo umožňuje správne zvládnutie očkovania. Klinický lekár musí mať na pamäti, že optimálny čas ovulácie je možné stanoviť, iba ak budú korelované všetky výsledky súvisiacich vyšetrení a testov (Jenny K. a kol., 2006).