IMD Institute for Medical Diagnostics, Laboratory for Hepatitis C (HCV) Virus Load Stanovenie
V klinickej diagnostike sa čoraz viac využíva vysoko citlivá detekcia HCV RNA pomocou technológie amplifikácie nukleových kyselín (NAT). Ukázalo sa, že kvantitatívna PCR v reálnom čase je testom veľmi vysokej špecifickosti a citlivosti.
Diagnóza infekcie HCV
Vírus hepatitídy C sa prenáša krvou a krvnými produktmi. Riziko hepatitídy spojenej s transfúziou sa výrazne znížilo, okrem iného, širokým používaním krvných skríningových testov na HCV. Výskyt infekcie HCV je najvyšší pri zneužívaní intravenóznych látok a o niečo nižší pri inej perkutánnej expozícii.
Pretože pacienti infikovaní HCV tvoria špecifické protilátky, mohli by sa vyvinúť imunoserologické testy na špecifickú detekciu týchto protilátok. Avšak prítomnosť anti-HCV protilátok je iba indikátorom predchádzajúcej infekcie HCV a nemôže byť použitá ako marker súčasnej infekcie. Alternatívna vírusová kultúra na priamu detekciu nie je k dispozícii.
Meranie pečeňových enzýmov nie je priamym meradlom stupňa infekcie HCV, pretože zvýšené hodnoty môžu byť spôsobené rôznymi príčinami. Naproti tomu virémiu je možné merať stanovením HCV-RNA pomocou PCR (polymerázová reťazová reakcia). Pomocou PCR je možné detegovať HCV virémiu pred imunologickou sérokonverziou. Zmena v HCV RNA v sére alebo plazme sa používa na hodnotenie vírusovej odpovede na antivírusovú liečbu.
PCR v reálnom čase
Pri diagnostike pomocou PCR sú zosilnené špecifické oblasti z genómu patogénu. Pri PCR v reálnom čase sa detekcia uskutočňuje pomocou fluorescenčných farbív. Spravidla sú spojené s oligonukleotidovými sondami, ktoré sa špecificky viažu na PCR amplikón. Detekcia intenzity fluorescencie počas PCR v reálnom čase umožňuje detekciu a kvantifikáciu produktov bez toho, aby ste museli po PCR znovu otvárať skúmavky so vzorkou. To eliminuje riziko kontaminácie prenosom.
„Vírusová záťaž“ sa vyjadruje v medzinárodných jednotkách IU/ml. Podľa oficiálnej správy WHO1 zodpovedá 1 IU štandardu WHO približne 4 ekvivalentom genómu HCV (kópie). Metóda umožňuje spoľahlivé stanovenie vírusovej záťaže HCV všetkých genotypov HCV 1 až 6.
Vyhodnotenie výsledkov
Linearita metódy presahuje široký rozsah merania (43 až 7 x 107 IU/ml). Detekcia (nelineárna) sa tiež vykonáva v rozmedzí 1 - 42 IU/ml. Horná aj dolná detekčná hranica sa teda výrazne zlepšia a už nie je potrebné uskutočňovať dve rôzne metódy kvalitatívnej a kvantitatívnej detekcie.
Používa sa na citlivejšie zisťovanie virémie v počiatočnej fáze akútnej infekcie, na zlepšenie diferenciácie chronických infekcií HCV, ako aj na sledovanie v rámci antivírusovej liečby.
Výsledky, ktoré je možné dosiahnuť, sú uvedené v nasledujúcej tabuľke.