Krvná skupina OAB (Beth Vincent, Simonin); Ústredná vojenská pohotovostná fakultná nemocnica Dr.
Krvná skupina OAB (Beth Vincent, Simonin)
Všeobecné informácie
U ľudí bolo identifikovaných 26 systémov krvných skupín s 228 antigénmi; krvná skupina pozostáva z jedného alebo viacerých antigénov riadených jedným génom alebo komplexom dvoch alebo viacerých navzájom spojených génov.
Boli identifikované aj ďalšie antigény, ktoré neboli priradené zavedeným systémom. Antigénmi erytrocytov môžu byť proteíny, glykoproteíny alebo glykolipidy. Väčšina je syntetizovaná erytrocytmi, avšak niektoré antigény, ako napríklad tie, ktoré patria do Lewisovho systému, sú adsorbované z plazmy na membráne erytrocytov. Niektoré antigény sú špecifické pre erytrocyty, iné sa nachádzajú v iných bunkách tela. Znalosť krvných skupín je pre transfúznu liečbu nevyhnutná. Takže jedinci, ktorí nemajú určité antigény erytrocytov, môžu produkovať aloprotilátky, keď sú vystavení krvi obsahujúcej tieto antigény v krvných transfúziách alebo počas tehotenstva. Protilátky, ktoré interagujú s antigénmi erytrocytov, spôsobujú okamžité alebo oneskorené hemolytické transfúzne reakcie a hemolytické ochorenie novorodenca.
Systém krvných skupín ABO je najdôležitejším systémom krvných skupín, pretože: keď antigény nie sú exprimované na povrchu erytrocytov, zodpovedajúce protilátky sú vždy prítomné v plazme, stimuly pre tvorbu protilátok sú predstavované rôznymi faktormi prostredia, ako napr. baktérie (napr. E. coli), ktoré sa na povrchových štruktúrach exprimujú takmer rovnako ako ABO sacharidy; vytvorené protilátky predstavujú zmes IgM (hlavne) a IgG, aktívnu pri 37 ° C a schopnú aktivovať komplement, a vysoká hustota antigénnych miest na membráne erytrocytov umožňuje väzbu veľkého množstva protilátok vedúcich v prípade nekompatibilnej krvnej transfúzie v systéme ABO pri akútnych hemolytických transfúznych reakciách.
Všetci imunokompetentní jedinci produkujú prirodzené protilátky (izoaglutiníny alebo izohemolyzíny) proti chýbajúcim antigénom skupiny ABO (H). Anti-A a anti-B sú zvyčajne detegovateľné 3 až 6 mesiacov po narodení a vo veku 5 rokov dosahuje titer protilátok maximum a udržiava sa po celú dospelosť. Titer IgM protilátok môže s pokročilým vekom postupne klesať. Anti-A a anti-B protilátky sú tiež prítomné u tých, ktoré majú slabé A alebo B varianty. Novorodenci zvyčajne nemajú významné množstvo anti-A a anti-B v plazme, s výnimkou tých, ktoré sa narodili aloimunizovaným matkám, u ktorých môžu byť prítomné IgG protilátky od matky, ktoré prešli placentou. Protilátky ABO nie sú hlavnou príčinou hemolytickej choroby u novorodenca v dôsledku inhibície protilátok proti rozpustným látkam A a/alebo B prítomným v krvi, ako aj proti antigénom A alebo B prítomným v iných bunkách ako erytrocyty; väzbová afinita protilátok k molekulám cukru je tiež slabšia ako väzbová afinita protilátok k molekulám proteínov, ako je antigén D4. Hemolýza je pravdepodobnejšia, ak je matka skupina O, s detskou skupinou A2.
Odporúčania pre stanovenie krvnej skupiny ABO2
• pred transfúziou;
• pred invazívnym alebo chirurgickým zákrokom potenciálne spojeným s krvácavými komplikáciami, ktoré si môžu vyžadovať transfúzie;
• pred pôrodom a postnatálnym imunohematologickým monitorovaním matky a dieťaťa;
• darcom krvi;
• pre kompatibilitu so skupinou ABO pri transplantácii obličiek a srdca.
zbierka
Výcvik pacientov - nie je potrebné žiadne predchádzajúce školenie; užitočné sú informácie o infúznej liečbe makromolekulárnymi roztokmi uskutočnenými pred stanovením, transfúzie za posledných 120 dní, infekčné choroby s gramnegatívnymi zárodkami so sepsou/bez sepsy, zhubné ochorenia (karcinóm, lymfóm, myelóm).
Odobratý exemplár - a) kapilárna krv z dužiny prsta; b) príde krv.
Zberová nádoba - b) vacutainer bez prísad alebo aktivačného gélu (červený alebo bezfarebný uzáver).
Zozbierané množstvo - b) toľko, koľko umožňuje vákuum.
Príčiny odmietnutia dôkazov - silne hemolyzovaný exemplár.
Vyskúšajte stabilitu - skúška sa vykoná okamžite, ak to nie je možné, vzorka sa uchováva 48 hodín pri 2 - 8 ° C.
Po zbere potrebné spracovanie - po úplnom zrážaní pri izbovej teplote sa sérum a zrazenina odstránia. Zo zvyšných červených krviniek sa pripraví 10% suspenzia vo vlastnej plazme alebo vo fyziologickom roztoku. Pre spôsob aglutinácie na kartách sa pripraví suspenzia 5% červených krviniek v špeciálnom suspenznom médiu.
Metóda
Metóda stanovenia - v laboratóriách Synevo sa vykonáva priama/globulárna metóda (Beth-Vincent) na stanovenie krvnej skupiny ABO pomocou séra anti-A, anti-B a anti-AB s nasledujúcimi variantmi:
- hemaglutinácia na platni3. Používajú sa dve kontroly: kontrola AB (červené krvinky pacienta s AB sérom) a kontrola auta (červené krvinky a vlastné sérum).
- aglutinácia a gélová filtrácia na kartičkách mikroskúmaviek obsahujúcich gél impregnovaný špecifickým činidlom pre antigén erytrocytov, ktoré sa má určiť (myšie alebo ľudské monoklonálne protilátky) - priamy test zoskupenia ABO a stanovenie Ag RH1 (D) a Ag RH 1, 2,3 (DCE).
Limity a interferencie
Výsledok stanovenia krvnej skupiny si musia prečítať dvaja ľudia a musia sa nakoniec potvrdiť na druhej vzorke krvi.
Pre metódu aglutinácie karty je pozitívna reakcia validovaná, iba ak je kontrolná mikrotrubička negatívna. Pozitívna reakcia sa cení v závislosti od veľkosti aglutinátov od + do ++++.
Chyby čítania v dôsledku technických chýb:
- špinavé sklenené výrobky; bakteriálna kontaminácia;
- prítomnosť mikrotagov (nesprávna aglutinácia);
- nepozorované: proporcie erytrocytov/séra, poradie kvapiek krvných testovacích sér (rozporuplná aglutinácia), čas čítania - neskoré čítanie: suché okraje (nesprávna aglutinácia), skoré čítanie (nedostatok aglutinácie alebo slabá aglutinácia).
Chyby spôsobené červenými krvinkami
Falošné aglutinátory
a) Prítomnosť valčekov (pseudoaglutinácia): použitie makromolekulárnych roztokov (Dextran, HES), poruchy zrážania, neúplne zrážané vzorky krvi, hyperfibrinogenémia, produkty degradácie fibrínu, fibrinolytické látky, dysproteinémia, paraproteinémia, kryoglobulinémia, zvýšený krvný tlak, vysoké hladiny heparínu, protamíniumsulfátu), reumatoidné faktory, zvýšený cholesterol, bilirubín, leukocytóza, leukocytové enzýmy2. Kontrola AB je pozitívna; premytie erytrocytov umožňuje správny výkon globulárnej vzorky.
b) Samoaglutinácia
• Prítomnosť studených aglutinínov (svetlo automobilu je pozitívne). Vzorka krvi a reagencie sa predinkubujú pri 37 ° C a test sa vykoná za tepla.
• Červené krvinky pokryté aloprotilátkami: novorodenec z nekompatibilného tehotenstva (v systéme Rh, ABO),
pacient transfúzovaný nekompatibilnou krvou.
• Stanovenie krvnej skupiny z krvi odobratej z pupočníka: Whartonová želatína, makromolekulárna látka, ktorá obklopuje erytrocyty, dáva vzhľad pseudoaglutinátov. Na jeho odstránenie je potrebné erytrocyty pred stanovením najmenej 6-krát umyť.
• Prítomnosť imunitných komplexov liekov.
c) Polyglutinácia
Pri septikémiách s gramnegatívnymi bacilami sú kryptoantigény (T) vystavené enzymatickým účinkom bakteriálnych látok, ktoré sú rozpoznávané pomocou protilátok (anti-T) prítomných vo väčšine ľudských séra2. Svedok AB je pozitívny.
Absentujúce alebo slabé aglutinácie alebo aspekt dvojitej populácie: aglutinácia nie je úplná s prítomnosťou voľných červených krviniek (aglutinácie sa objavujú na ružovom pozadí):
• stará krv;
• slabé antigény: novorodenci, predčasne narodení;
• slabé podskupiny A alebo B;
• zoslabenie antigénov (pri leukémiách, lymfómoch, Hodgkinovej chorobe);
• pacient so skupinou A alebo B transfúzovaný s krvou skupiny O, krvácanie z matkinho plodu;
• prítomnosť veľkého množstva látky A alebo B v plazme (rakovina žalúdka, pankreas), ktorá neutralizuje testované protilátky (na ich odstránenie sa musia umyť červené krvinky);
• prítomnosť chiméry alebo mozaiky (výnimočné, napr. Post-medulárny aloštep).