Molekulárne genetické a klinické štúdie intolerancie laktózy (hypolaktázie) - PDF Zadarmo

Z Ústavu pre klinickú chémiu a laboratórne lekárstvo Lekárskej fakulty Rostockej univerzity Riaditeľ: Prof. Dr. med. Peter Schuff-Werner Molekulárno-genetické a klinické vyšetrenia intolerancie laktózy (hypolaktázia) Úvodná dizertačná práca na získanie akademického titulu doktor medicíny Lekárskej fakulty Univerzity v Rostocku, ktorú predložil Johannes Futh narodený 20. februára 1981 v Postupime Rostock 2008 urna: nbn: de: gbv: 28-dis2010-0009-9

intolerancie

Dekan: Prof. Dr. med. Emil Reisinger 1. recenzent: Prof. Dr. med. Stefan Liebe (Klinika pre vnútorné lekárstvo/Gastroenterologická klinika/Univerzita v Rostocku) 2. recenzent: prof. Dr. med. Hartmut Hans-Jürgen Schmidt (Experimental Transplant Hepatology/Westfälische Wilhelmsuniversität Münster) 3. recenzent: Priv.-Doz. DR. med. Michael Steiner (Ústav pre klinickú chémiu a laboratórnu medicínu/Univerzita v Rostocku) Miesto dizertačnej práce: Rostock Public Defense Day: 27. mája 2009

Obsah Zoznam obrázkov Zoznam tabuliek Zoznam skratiek 1. Úvod.1 1.1 Historická osnova. 1 1.2 Klasifikácia nedostatku laktázy. 2 1.3 Fyziológia a patofyziológia malabsorpcie laktózy 3 1.4 Klinika malabsorpcie laktózy. 6 1.5 Diagnostika malabsorpcie laktózy. 8 1.6 Liečba malabsorpcie laktózy ... 9 1.7 Primárny nedostatok laktázy u dospelých. 11 1.7.1 Epidemiológia. 13 1.7.2 Molekulárna genetika 14 2. Cieľ. 17 3. Materiál a metódy 18 3.1 Testované osoby a pacienti 18 3.2 Izolácia DNA. 18 3.3 Genotypizácia. 19 3.3.1 PCR-RFLP. 19 3.3.2 PCR v reálnom čase (LightCycler). 23 3.4 Dychová skúška na laktózu H2. 27 4. Výsledky. 33 4.1 Epidemiologická štúdia. 33 4.1.1 Predmety. 33

4.1.2 Genotypizácia polymorfizmu LCT-13910 v skupine Rostock darcov krvi. 33 4.1.3 Genotypizácia polymorfizmu LCT-13910 v juhokórejskej skupine. 34 4.1.4 Genotypizácia polymorfizmu LCT-13910 pomocou PCR v reálnom čase (LightCycler). 34 4.2 Klinická štúdia. 34 4.2.1 Pacienti. 34 4.2.2 Prevalencia producentov H2. 36 4.2.3 Výrobcovia H2: výsledky dychových testov a genotypizácia H2. 36 4.2.4 Neproducenti H2: klinické nálezy a genotypizácia. 38 5. Diskusia. 40 5.1 Epidemiologická štúdia. 40 5.2 Klinická štúdia. 47 6. Zhrnutie. 59 7. Bibliografia. 61 téz Deklarácia nezávislosti Životopis Poďakovanie

Zoznam obrázkov 1.1 Fyziológia absorpcie laktózy. 5 1.2 Patofyziológia malabsorpcie laktózy. 6 3.3 Detekcia troch genotypov polymorfizmu LCT-13910. 23 3.4 Princíp prenosu fluorescenčnej rezonančnej energie (FRET). 26 3.5 Ilustrácia alelovo špecifických kriviek topenia polymorfizmu jedného nukleotidu LCT-13910. 27 3.6 Schéma hodnotenia na základe dychovej skúšky H2. 29 3.7 Schéma zhromažďovania nálezov so súčasným štatútom H2, ktorý nie je výrobcom 30 3.8 Dotazník na zaznamenávanie anamnestických údajov. 31 3.9 Protokol udalostí na zaznamenávanie sťažností pri vykonávaní dychovej skúšky na laktózu H2. 32 5.10 Prevalencia primárneho deficitu laktázy u dospelých v Európe. 42

5.18 Možné príčiny falošne pozitívnych a falošne negatívnych výsledkov dychovej skúšky H2. 51

Zoznam skratiek AC DNA dntp adenín cytozín deoxyribonukleová kyselina deoxynukleozid trifosfát EDTA kyselina etyléndiamintetraoctová F Forward (priamy primér) FLU fluorescenčné farbivo FRET fluorescenčný rezonančný prenos energie G guanín GLUT glukózový transportér laktaktaktáza-laktóza-laktóza-laktóza-laktóza-laktóza-laktóza-laktóza-laktóza deficit údržby Na sodík negatívny (kontrola) ppm častice na milión PCR polymerázová reťazová reakcia R reverzný (reverzný primer) RFLP dĺžka reštrikčného fragmentu polymorfizmus rpm počet otáčok za minútu SGLT transportér glukózy závislý na sodíku T tymín WT divoký typ

Laktoáza tenkého čreva Epitel tenkého čreva Črevný tranzit Laktóza Glukóza + galaktóza SGLT1 Tenké črevo Epitel hrubého čreva Krvná laktóza H 2 O H 2 O Bakteriálna fermentácia Mastné kyseliny s krátkym reťazcom Bakteriálne toxíny H 2 CO 2 Flatus Obrázok 1.2: Patofyziológia malabsorpcie laktózy. 1.4 Klinika malabsorpcie laktózy Príznaky, ktoré sa vyskytnú po požití potravín obsahujúcich laktózu, sú nešpecifické a zahŕňajú bolesti brucha, boroborymy, plynatosť a hnačky a občas zápchu. Ďalej je opísaných niekoľko systémových ťažkostí, ktorých príčinou sa považujú toxické metabolity, ktoré vznikajú v priebehu bakteriálneho metabolizmu laktózy (tabuľka 1.1). 6.

Laktóza musí byť uvedená v zozname zložiek. Priemerný obsah laktózy v niektorých vybraných potravinách je zhrnutý v tabuľke 1.2. Tabuľka 1.2: Obsah laktózy v mlieku a mliečnych výrobkoch (na základe Renner a Renz-Schauen 1994). Mlieko alebo mliečny výrobok Obsah laktózy (g na 100 g) Spotrebné mlieko (čerstvé mlieko, mlieko UHT) 4,8-5,0 Kondenzované mlieko (4–10% tuku) 9,3-12,5 Srvátka, srvátkové nápoje 2,0-5, 2 sušené mlieko 38,0 - 51,5 masla 0,6-0,7 tvarohu (10 - 70% tuku v sušine) 2,0 8,0 nízkotučného tvarohu 4,1 jogurt 3,7-5,6 tvrdý, Polotvrdý, mäkký syr