Plazmatický (aktívny) ghrelín

Všeobecné informácie a odporúčania pre určenie krupobitia

Ghrelin je hormón s peptidovou štruktúrou (28 aminokyselín) produkovaný endokrinnými bunkami v gastrointestinálnej sliznici (hlavne bunkami P/D1 v žalúdku), ako aj epsilonovými bunkami v pankrease zodpovednými za stimuláciu hladu.

Bol izolovaný v roku 1999 zo žalúdka potkanov a bol opísaný ako endogénny ligand pre sekretagógový receptor rastového hormónu (GHS-R) v hypofýze. Ghrelin stimuluje uvoľňovanie rastového hormónu iným spôsobom ako GHRH (hormón uvoľňujúci rastový hormón).

Z chemického hľadiska má grelín jedinečnú štruktúru vďaka acylácii serínových zvyškov v polohe 3 reťazca aminokyselín procesom s kyselinou oktánovou - mastnou kyselinou, ktorý je katalyzovaný nedávno identifikovaným enzýmom GOAT (ghrelín O-acyltransferáza). Octanoilácia je nevyhnutná pre biologickú aktivitu hormónu.

Ghrelin sa vylučuje ako predchodca - preprogrelín; Po posttranslačných zmenách sa generuje acylovaná forma - acyl-ghrelín aj forma bez acylovaného-des-acyl-ghrelínu. V obehu sú prítomné oba typy grelínu, ale podľa posledných štúdií prevláda des-acyl-grelín, forma bez endokrinnej aktivity, ktorá má však určité bunkové účinky.

Orexigénny účinok grelínu je spôsobený pôsobením na klenuté a paraventrikulárne jadrá hypotalamu, o ktorých je známe, že sa podieľajú na regulácii chuti do jedla. Ghrelín teda aktivuje neuróny obsahujúce orexigénne peptidy (NPY - neuropeptid Y a AgRP - peptidy súvisiace s aguti) a inhibuje tie, ktoré obsahujú anorexigénne peptidy (CART - transkript súvisiaci s kokaínom a amfetamínom a POMC - proopiomelanokortín). Leptín má opačné účinky na rovnaké neuróny, čo naznačuje, že tieto dva hormóny sú komplementárnymi zložkami regulačného systému, ktorý informuje centrálny nervový systém o akútnej a chronickej energetickej nerovnováhe. Neuróny v oblúkovom jadre zasa prenášajú impulzy na neuróny obsahujúce orexín v laterálnej oblasti hypotalamu, čím stimulujú chuť do jedla.

Ghrelin sa nedávno podieľal na regulácii inzulínu aj na homeostáze glukózy. Väčšina štúdií teda naznačuje inverznú koreláciu medzi systémovými hladinami grelínu a inzulínu. Inzulín znižuje hladinu grelínu a grelín inhibuje sekréciu inzulínu. Hyperglykemický účinok grelínu je spôsobený na jednej strane jeho endokrinnými účinkami a na druhej strane priamym účinkom stimulácie glukoneogenézy na hepatocyty. Pokiaľ ide o jeho úlohu pri cukrovke, nízke hladiny grelínu súviseli s inzulínovou rezistenciou, hypertenziou a prevalenciou cukrovky typu II. Nízke hladiny grelínu sa navyše preukázali aj u pacientov s cukrovkou typu I (zdá sa, že tento hormón hrá úlohu pri regenerácii buniek beta-pankreasu) 1 .

Výcvik pacientov - zber sa uskutoční ráno v pôste (nalačno) 4 .

Odobratý exemplár - venózna krv; vacutainer je veľmi jemne pretrepaný prevrátením a okamžite umiestnený na ľad; prepravené do laboratória čo najskôr 4 .

Zberová nádoba - vakutainer s EDTA K3 + aprotinín (ružový uzáver) skladovaný v chladničke až do zberu; aprotinín sa používa na prevenciu degradácie proteázy acylovaného ghelínu 2 .

Zozbierané množstvo - pokiaľ to umožňuje vákuum 4 .

Po zbere potrebné spracovanie - do maximálne 30 minút od zberu sa plazma oddelí centrifugáciou (najlepšie v centrifúge ochladenej na 2 - 8 ° C) počas 10 minút pri 3 500 ot./min; na oddelenie plazmy sa používa plastová pipeta; separovaná plazma sa okamžite okyslí na pH 3-4 (na každý 1 ml plazmy sa pridá 100 ul 1N HCl) a potom sa znovu centrifuguje 5 minút pri 3 500 ot./min; supernatant sa prevedie do sekundárnej skúmavky; vzorka sa spracuje okamžite; ak to nie je možné, plazma sa skladuje pri -20 ° C v plastovej nádobe (polypropylén alebo polystyrén); vzorky odobraté mimo priestorov laboratória sa prepravia do nádoby určenej na zmrazené vzorky 2; .

Stabilita vzorky - plazma je dlhodobo stabilná pri -20 ° C alebo pri -70 ° C; nerozmrazujte/nezmrazujte 2; 4 .

Metóda - ELISA; test vykonaný v našom laboratóriu zistil acylovanú formu - aktívny ghrelín.

Referenčné hodnoty -.

Detekčný limit - 4 pg/ml 4 .

Interpretácia výsledkov

Plazmatické hladiny sa zvyšujú bezprostredne pred každým jedlom a znižujú sa na minimum do 1 hodiny od príjmu potravy. Rozsah a trvanie postprandiálnej redukcie závisí od počtu kalórií a obsahu tuku v prijatej potravine. Postprandiálna supresia je u obéznych pacientov nižšia, grelín pravdepodobne prispieva k patogenéze obezity.

Cirkulujúce hladiny grelínu nepriamo korelujú s indexom telesnej hmotnosti (BMI). Hladiny sa teda zvyšujú pri mentálnej anorexii a kachexii, znižujú sa pri obezite a vracajú sa k normálnej hmotnosti. Výnimkou zo spojenia s BMI je Prader-Williho syndróm, pri ktorom je obezita spojená s vysokými hladinami ghrelinu.

Hladiny grelínu sa menia za iných klinických stavov:

Poklesy: po bypassu žalúdka a gastrektómii, chronická gastritída spojená s infekciou H. pylori, hypertyreóza (vysvetľuje úbytok hmotnosti, ktorý sa za týchto podmienok bežne vyskytuje), syndróm krátkeho čreva (pravdepodobne v dôsledku straty tkanív produkujúcich ghrelín), mužský hypogonadizmus, syndróm polycystických vaječníkov, Cushingov syndróm.

Nízka hladina grelínu je nezávisle spojená s cukrovkou typu I a II.

U starších ľudí boli hlásené nižšie hladiny grelínu.

Prírastky: bulimia nervosa, chronické obmedzenie príjmu potravy, žalúdočné alebo pankreatické ghrelinómy 1 .

Limity a rušenie

Plazmatické hladiny grelínu sú ovplyvnené radom hormónov, liekov a iných látok:

Poklesy: inzulín, perorálna alebo intravenózna glukóza, somatostatín a jeho prírodný analóg kortikostatín, anorexigénne peptidy (YY peptid, oxintomodulín, urokotín-1), hormóny štítnej žľazy, glukokortikoidy.

Prírastky: agonisty acetylcholínu, kombinované podávanie GHRH a arginínu, testosterón (u pacientov s hypogonadizmom), estrogén a inzulínový rastový faktor-1 (IGF-1 u pacientov s mentálnou anorexiou) 1 .

Bibliografia:

Adelino F. Leite-Moreira a João-Bruno Soares. Fyziologické, patologické a potenciálne terapeutické úlohy grelínu. In Drug Discovery Today, zv. 12, č. 7./8. Apríla 2007.
Hiroshi Hosoda a kol. Optimálne podmienky zberu a skladovania pre meranie Ghrelínu: Oktanoylová modifikácia Ghrelínu sa vo vzorkách krvi rýchlo hydrolyzuje na desacyl Ghrelin. In Clinical Chemistry, 2004, roč. 50, č. 6, 1077-1080.
Korner J a kol. Účinky Roux-en-Y žalúdočnej bypassovej operácie nalačno a postprandiálne koncentrácie plazmatického grelínu, YY peptidu a inzulínu. V J- Clin. Endokrinol. Metab. 90, 359 + 365, 2005.
Laboratórium Synevo. Konkrétne odkazy na použitú technológiu práce. 2012. Typ odkazu: katalóg.
M. Kojima, K. Kangawa. Ghrelin: Štruktúra a funkcia. In Physiol Rev 85: 495–522, 2005.