SERVALight EosUltra Western Blot Chemiluminiscence HRP Substrate Kit - PDF na stiahnutie zadarmo

1 NÁVOD NA POUŽITIE SERVALight EosUltra Western Blot Chemiluminiscence HRP Substrate Kit (katalógové číslo) SERVA Electrophoresis GmbH Carl-Benz-Str. 7 D Heidelberg telefón, fax

servalight

2 Obsah 1. SERVALIGHT EOSULTRA Všeobecné informácie Komponenty súpravy Podmienky skladovania 2 2. VYKONANIE DETEKCIE Dôležité na začiatku Potrebné, nedodané materiály a riešenia Schéma protokolu detekcie Western blot 5 3. RIEŠENIE PROBLÉMU 7 4. INFORMÁCIE O OBJEDNÁVKE 8 Ver 03/12 1

3 1. SERVALight EosUltra 1.1. Všeobecné informácie SERVALight EosUltra je vysoko citlivý chemiluminiscenčný substrát na detekciu konjugátov chrenovej peroxidázy (HRP), napr. značené protilátky na imunoblotoch. Intenzita signálu substrátu umožňuje detekciu antigénu v dolnom rozmedzí femtogramu (10 - 15). Výhody: Detekcia na filmoch alebo s dokumentačnými systémami vhodnými na chemiluminiscenciu, napr. ProXima C16Phi +, Isogen Veľmi krátke doby expozície a/alebo vyššie zriedenia protilátok vďaka optimalizovaným signálom intenzívnym na svetlo SERVALight EosUltra nie je vhodný na použitie v diagnostike alebo iných klinických aplikáciách, ale iba na výskum a vývoj. SERVALight vyrába spoločnosť Cyanagen Srl. Spoločnosť Cyanagen Srl je predmetom nasledujúcich patentov USA a EÚ US, EP, US, ako aj už prihlásených a zodpovedajúco platných patentov pre iné krajiny. Súčasti súpravy Kat. Č. Roztok SERVALight EosUltra Luminol Roztok SERVALight EosUltra Peroxid ml 10 ml ml 50 ml ml 100 ml 1.3. Podmienky skladovania Súpravu skladujte pri teplote 2 8 C. Ak sa skladuje pri odporúčanej teplote, je možné ju používať minimálne do: pozri štítok. 2

6 2.3. Schéma inkubácie blokujúcej prenos gélovej elektroforézy s gélovou elektroforézou 1. Inkubácia protilátky 2. Detekcia inkubácie protilátky SERVALight EosUltra 2.4. Protokol (1) Odstráňte škvrnu z blotového prístroja a potom ju blokujte pri laboratórnej teplote (min.) Alebo pri 2-8 ° C cez noc. (2) Odstráňte blokovacie činidlo a pridajte prvý pracovný roztok protilátky vo vhodnom zriedení. Inkubácia 1 hodinu pri laboratórnej teplote alebo cez noc pri trepaní pri 2-8 ° C. (3) Následné premytie membrány premývacím pufrom (5 minút). Opakujte krok umývania 4-6 krát. Väčšie objemy pufra alebo počet krokov premytia môžu pomôcť znížiť pozadie. (4) Pridajte vhodné zriedenie konjugátu HRP. 1 h inkubácia škvŕn za trepania pri izbovej teplote. (5) Opakujte krok (3). (6) Pred detekciou by mali mať detekčné roztoky izbovú teplotu. (7) Pripravte pracovný roztok substrátu zmiešaním rovnakých pomerov roztoku peroxidu s roztokom luminolu. Na cm2 membrány sa má použiť 0,1 ml pracovného roztoku. 5

7 (8) Pracovný roztok je stabilný 24 hodín pri izbovej teplote. (9) 5 minút inkubácie blotovej membrány s pracovným roztokom substrátu. (10) Preneste chránenú škvrnu (napr. Zabalte do potravinovej fólie bez vzduchových bublín) do kazety s fóliou s proteínom hore a vložte fóliu. Tu by ste mali pracovať vo vhodnej tmavej komore. Film by mal počas expozície zostať suchý. DÔLEŽITÉ: Prebytočný substrát by sa mal z blotu odstrániť. Film by sa mal nanášať opatrne, pretože z dôvodu intenzity signálu môže dokonca aj mierne posunutie filmu/škvrny viesť k rozmazaným alebo nesprávnym signálom. (11) Najskôr sa odporúča expozičný čas 60 s. V závislosti od sily signálu možno podľa toho zvoliť ďalší expozičný čas pre optimálnu intenzitu signálu. (12) Potom sa exponovaný film vyvolá. (13) Alternatívne k vývoju filmu sa detekcia môže vykonávať aj pomocou vhodných dokumentačných systémov, napr. ProXima C16 Phi +, Isogen. (14) Ak je to potrebné, škvrna sa môže po detekcii odstrániť a znovu naplniť protilátkami. 6.

9 4. Objednávacie údaje pre membrány Kat.č. Immobilon (PVDF), 26,5 cm x 3,75 m, veľkosť pórov: 0,2 μm (1 kotúč) Fluorobind (PVDF), 10 x 10 cm, veľkosť pórov: 0,2 μm (20 listov) Fluorobind (PVDF), 25 cm x 3 m, veľkosť pórov: 0,2 µm (1 kotúč) Protein Standard SERVA Western Blot Protein Standard Reagents Tween Detekčné reagencie/súpravy Chemiluminiscenčné činidlo pre chrenperoxidázu SERVALight Polaris CL HRP WB Substrát Kit SERVALight Eos CL HRP WB Substrát Kit SERVALight Helios Súprava substrátu CL HRP WB