Ústav f; r Experimentálna biomedicína - funkcia doštičiek I. stoličky
Po zraneniach majú krvné doštičky zásadnú úlohu pri zastavení krvácania. V súčasnosti však existujú rozsiahle vedomosti, že krvné doštičky hrajú zásadnú úlohu aj pri závažných ochoreniach, ktoré nie sú primárne spojené s krvácaním. Skúmame úlohu funkcie krvných doštičiek pri relevantných chorobách, ako je sepsa.
Pozreli sme sa na rôzne aspekty tvorby a funkcie ľudských krvných doštičiek.
I) Štandardizovaná diagnostika funkcie krvných doštičiek
Ľudské doštičky sú veľmi jemné. Pred odobratím a spracovaním krvi až po potrebné vyšetrenia sa musia dodržiavať predanalytické normy kvality. Osvedčenou metódou na analýzu funkcie krvných doštičiek je agregometria. Táto technika však vyžaduje pomerne veľké množstvo krvi, a preto nie je vhodná pre ľudí s veľmi nízkym počtom krvných doštičiek alebo pre malé deti. Prietoková cytometria ponúka alternatívu, ktorá vyžaduje minimálne množstvo krvi a umožňuje súčasné vyšetrenie mnohých aspektov funkcie krvných doštičiek. Patrí sem vybavenie a hustota povrchových receptorov, uvoľňovanie vnútorných (alfa a hustých) granúl a schopnosť aktivovať integrínové receptory. Vyvinuli sme praktický prístup k diagnostike funkcií krvných doštičiek a navrhli sme algoritmus na identifikáciu základných genetických zmien v dedičných tendenciách krvácania.
II) Funkcia krvných doštičiek pri sepse
Sepsa je veľmi zložité ochorenie so systémovou dysreguláciou mnohých zložiek, ktorú môžu často vyvolať baktérie alebo plesne. V počiatočnej fáze ochorenia sa počet krvných doštičiek v krvi spočiatku zvyšuje (reaktívna trombocytóza), ale významne klesá s trvaním sepsy. Závažná trombocytopénia (veľmi nízky počet krvných doštičiek v krvi) je spojená so zlou prognózou. V spolupráci s jednotkou intenzívnej starostlivosti Lekárskej kliniky I Fakultnej nemocnice skúmame reaktivitu krvných doštičiek u pacientov so sepsou v priebehu ochorenia a dúfame, že lepšie charakterizujeme základné zmeny v krvných doštičkách, a tým vyvinieme prognostické a diagnostické markery.
III) Biogenéza krvných doštičiek a génová terapia
Krvné doštičky v krvi pochádzajú z prekurzorových buniek (krvotvorných kmeňových buniek) v kostnej dreni. Tieto reagujú na špecifické rastové faktory, ako je trombopoetín, potom sa diferencujú na (megakaryocyty) prekurzorové bunky a nakoniec na zrelé krvinky, ako sú megakaryocyty. Tie sa nachádzajú hlavne na cievach v kostnej dreni, kde uvoľňujú doštičky do krvi. Pretože krvné doštičky nemajú jadro, nemôžete ich sami geneticky modifikovať. Vypracovali sme protokol, podľa ktorého necháme krvotvorné kmeňové bunky v kostnej dreni (takzvané CD34-pozitívne bunky) diferencovať na megakaryocyty v bunkovej kultúre, ktoré sa potom odrežú ako „propelenty“ zrelých buniek, z ktorých vychádzajú krvné doštičky. Ďalej môžeme použiť „indukované pluripotentné kmeňové bunky“ (bunky iPS), ktoré je možné izolovať a odlíšiť od darcu, prípadne s patologickým pozadím. Tieto bunky môžu byť modifikované vektormi génovej terapie, aby sme mohli preskúmať vplyv na tvorbu krvných doštičiek v prípade nedostatku alebo prebytku jednotlivých proteínov. Cieľom je nakoniec umožniť bezpečnú korekciu vlastných krvotvorných kmeňových buniek s cieľom vykonať autológnu transplantáciu kmeňových buniek, a tým vyliečiť zriedkavé vrodené krvné doštičky a krvácavé choroby.