Vývoj metódy LCMSMS na analýzu látok na ochranu polárnych plodín a ich látok

1 Weihenstephan Science Center for Nutrition, Land Use and Environment Fakulta biologických vied Katedra ekologickej chémie a analýzy životného prostredia Technická univerzita v Mníchove Vývoj metódy LC/MS/MS pre analýzu aktívnych zložiek polárnych pesticídov a ich metabolitov v plodinách Monica Elena Pantiru Kompletná kópia fakulty Vedecké stredisko Weihenstephan pre výživu, využitie pôdy a životné prostredie na Technickej univerzite v Mníchove získať akademický titul dizertačnej práce schválenej doktorom prírodných vied. Predseda skúšajúci dizertačnej práce Univ.-Prof. DR. rer. nat. habil. W. Huber 1. Univ.-Prof. DR. rer. nat. DR. H. c. (RO) A. Kettrup 2. univ.-prof. DR. rer. nat. DR. agr. habil. H. Parlar Dizertačná práca bola predložená na Technickú univerzitu v Mníchove dňa a prijatá Weihenstephan Science Center for Nutrition, Land Use and Environment dňa.

metódy

2 Poďakovanie Táto práca bola vytvorená v období od októbra 2001 do júla 2004 na Ústave pre ekologickú chémiu, Výskumnom centre pre životné prostredie a zdravie GSF. Rád by som poďakoval nemeckej akademickej výmennej službe za financovanie. Prof. Dr. DR. H. c. Antonius Kettrup Ďakujem veľmi pekne za zaujímavú tému, dobré pracovné príležitosti v ústave a za jeho benevolentnú podporu v každom ohľade. DR. Moje špeciálne poďakovanie patrí Dieterovi Martensovi za dobrý dohľad nad prácou, vedeckú diskusiu, neustálu ochotu pomáhať, rôznorodú podporu, pozornú nápravu tejto práce a jeho radosť z vyučovania. DR. Rád by som poďakoval Patrickovi Bohnovi za rady, prebiehajúce diskusie a veľmi dobrú spoluprácu. Obzvlášť by som sa chcel poďakovať pani Věre Meyerovej a pánovi Stephanovi Forsterovi za aktívnu podporu pri spracovaní vzoriek a dobrú spoluprácu. Karin Fischer, Dr. Jutta Lintelmann, Dr. Georg Matuschek, Dr. Zvlášť by som sa chcel poďakovať Willibaldovi Kammovi, Agnes Feketeovej a Dariuszovi Antkowiakovi za vynikajúcu pracovnú atmosféru.

5 Obsah 1 Úvod Ciele práce Stav výskumu a teoretické princípy Vývoj multi-metód Postupné kroky v klasickej multi-metóde pre analýzu pesticídov Príprava vzorky Extrakcia Čistenie Inštrumentálna analýza Chromatografické metódy Ostatné metódy stanovenia Hmotnostná spektrometria Väzbové techniky Systémy hmotnostného analyzátora ESI APCI APPI Zrýchlenie rozlíšenia hmotnostného spektrometra MS/MS Maticové efekty v LC/Materiály a metódy MS Použité zariadenia Použité materiály Štatistické a matematické metódy Štatistické metódy Matematické metódy Ďalšie informácie Výsledky Oddelenie a detekcia Optimalizácia ionizácie. 47

6 5.1.2 Stanovenie najintenzívnejšieho zdroja a dcérskych iónov a optimalizácia parametrov detekcie závislých od látky Výber zdroja ionizácie (porovnanie ESI-APCI) Metóda HPLC Predbežné testy s HPLC-DAD Mobilná fáza Separačné kolóny Prechody HPLC Skenovacie okno Zvýšenie citlivosti Porovnanie modifikátorov Injekčné objemy Charakteristické údaje inštrumentálnej analýzy Detekčný limit a limit kvantifikácie Kalibračné funkcie Presný test metódy LC/MS/MS Optimalizácia extrakcie Predbežné testy Vplyv hodnoty pH Rozpúšťadlo Extrakcia mastných matríc Extrakcia suchých matíc Čistenie extraktov Čistenie acetónových extraktov Čistenie GPC Testovanie rôznych pevných fáz na čistenie extraktu Vplyv matrice Čistenie metanolových extraktov ChemElut ( Hydromatrix) Oasis HLB EnviCarb Chromabond-HRP Účinnosť tuhej fázy HRP na čistenie extraktov vzoriek. Porovnanie ChemElut a HRP

7 5.3.3 Čistenie acetonitrilových extraktov C Testy s Oasis MCX Vyšetrenia zamerané na zníženie alebo vylúčenie účinkov matice Vplyvy matice Čistenie extraktu Porovnanie GPC, Hydromatrix a SPE Porovnanie extrakčných rozpúšťadiel Matice bohaté na tuky Kvantifikácia pomocou externých štandardov Kvantifikácia pomocou štandardov označených izotopmi Kvantifikácia pomocou štandardov označených izotopmi Kvantifikácia pomocou maticových štandardov Overenie metódy Špecifikácia metódy Analytické parametre a štatistické vyhodnotenie Limity kvantifikácie a slepé hodnoty Výťažnosť a opakovateľnosť Zhrnutie Výhľad Bibliografia Príloha