Kolísanie retenčného času - 1. časť SHIMADZU DEUTSCHLAND

9 - retenčný čas časť 1

10 - retenčný čas časť 2

11 - Životnosť stĺpca - 1. časť

12 - Životnosť stĺpca - 2. časť

času

Najbežnejším typom detekcie v HPLC je UV absorpcia, fluorescencia a detekcia indexu lomu. Tieto typy detekcie nie sú špecifické pre jednotlivé látky a vo väčšine prípadov sa analytom prideľuje retenčný čas. Ak kolísa retenčný čas, môžu sa vyskytnúť nesprávne výsledky. Preto je reprodukovateľnosť retenčného času veľmi dôležitá.

V nasledujúcom, ako aj v budúcom týždni, sú predstavené rôzne vplyvy.

1. Vplyv teploty

Rovnako ako u mnohých problémov pri HPLC má teplota tiež vplyv na retenčný čas. Čím vyššia je teplota, tým nižšia je viskozita mobilnej fázy. Preto spätný tlak v systéme klesá aj pri zvyšovaní teploty. Všeobecne platí, že zmena teploty o 1 ° C vedie k posunu retenčného času o 1 až 2%. Preto je časový posun v dôsledku teplotných výkyvov väčší pre analyty s neskorou elúciou. V nasledujúcich štyroch boli parabény merané pri rôznych teplotách.

Ak porovnáte meranie pri 20 a 50 ° C, celkový čas chodu je takmer polovičný. Tento vplyv je možné samozrejme tiež použiť na optimalizáciu alebo skrátenie metódy za predpokladu, že zostane v špecifikáciách stĺpca. Pri veľmi vysokých teplotách sa však dá očakávať, že väčšina stĺpov bude mať kratšiu životnosť.

Ak sa má teplota použiť na optimalizáciu, je potrebné si uvedomiť, že nie všetky analyty reagujú na zmenu teploty rovnakým spôsobom. Ako je uvedené v príklade vpravo, môžu sa správať veľmi odlišne. Zatiaľ čo sa analyty separujú pri 20 ° C, kyselina sorbová a kyselina benzoová koelujú pri 30 ° C. Ak sa teplota ešte zvýši, môže sa elučná sekvencia dokonca obrátiť. Ak si toto nevšimnete, môžu sa tu vyskytnúť aj nesprávne výsledky.

V najlepšom prípade používajte stĺpovú pec, aby ste udržali teplotu svojho stĺpca čo najstálejšiu.

1: kyselina sorbová, 2: kyselina benzoová, 3: metylparabén

2. Zmena prietoku

Každé čerpadlo má určitý počet spotrebných dielov, ktoré by sa mali pravidelne vymieňať. Napríklad väčšina piestových tesnení je určená na čerpanie určitého objemu. Ak opotrebenie príliš pokročilo, môže dôjsť k jeho netesnosti a tým k ovplyvneniu prietoku. Ak kolísajú retenčné časy, môže byť problémom aj chybné čerpadlo.

Najjednoduchší spôsob kontroly čerpadiel je ich meranie. Za týmto účelom vezmite odmerný valec, pripojte protitlakovú kapiláru priamo k čerpadlu a nastavte definovaný prietok. Teraz porovnajte čas, za ktorý sa načerpá určitý objem, s nastaveným prietokom.

V pravidelných intervaloch kontrolujte spotrebný materiál z vašej HPLC. Majte tiež pripravené náhradné diely, aby bolo možné rýchlo vymeniť chybné diely.

Bohužiaľ, všetky opatrenia, ktoré vedú k stabilizácii chromatografických podmienok, sú málo užitočné, ak pracujete s veľmi robustnými metódami. Za takýchto podmienok majú aj malé zmeny, napríklad teploty alebo eluentu, zásadný vplyv na retenčný čas.

Výsledkom je, že vzorky sa musia často opakovať alebo sa hodnotenie musí prepracovať ručne. To je veľký problém, najmä v regulovanom prostredí.

Je lepšie investovať viac času do vývoja robustných metód. Pri spätnom pohľade budete mať menej úsilia a viac času na rutinu a čas investovaný predtým sa veľmi rýchlo amortizuje.

Čo je potrebné zvážiť každý deň:

Všeobecné:

  • Vykonávajte pravidelné skúšky spôsobilosti
  • V pravidelných intervaloch kontrolujte spotrebný materiál
  • Dokumentácia retenčných časov, rozpustenia atď. Referenčných roztokov

Systém:

  • Na reguláciu teploty používajte kolónovú pec
  • Veďte si stĺpcový denník
  • Údržba dokumentov

Budúci týždeň bude mať téma fluktuácie retenčného času s vplyvmi zloženia eluenta, stĺpca a času ekvilibrácie tiež.