Laborjournal online Šialenstvo s Irisin
Čo? Irisin neexistuje?
V roku 2012 urobil časopis Nature senzačný objav. Americkí vedci, ktorí spolupracujú s firmou Pontus Boström a Bruce Spiegelman z Harvardskej lekárskej fakulty, opísali endogénny hormón na chudnutie nazývaný irisin. Dúhovka sa vytvára vo svaloch fyzickou námahou. Cez krv sa dostáva k tukovým vankúšikom a stimuluje biele tukové bunky (adipocyty) k premene na hnedé tukové tkanivo. Hnedé adipocyty zase spaľujú tuky priamo, aby vytvorili teplo, ochrannú funkciu novorodených cicavcov.
Farmaceutický priemysel sa už dlho zaujíma o to, aby konečne finančne otvoril obrovský trh s obezitou hromadných chorôb. Transformácia dospelých bielych tukových buniek na juvenilné hnedé adipocyty by bola zjavným terapeutickým prístupom, a preto sa tejto téme venuje množstvo pracovných skupín po celom svete. Ak by ste mohli použiť čarovný liek na stimuláciu slaninových pásov k tvorbe hnedých adipocytov a spaľovaniu tukov, bol by to pre farmaceutické spoločnosti najväčší neočakávaný prípad všetkých čias.
Schudnite - a už nikdy neochladnite
A splnený sen pre všetkých fanúšikov nadváhy. Musíte len ležať na gauči a vhodiť do nich pilulku Irisin s lupienkami a čokoládovými tyčinkami, a nielen že schudnete, budete sa cítiť príjemne a teplo aj vďaka teplu vytváranému hnedými tukovými bunkami a ušetríte za kúrenie. Niet divu, že publikácia Príroda otvorila nové pole výskumu a spustila vlnu citácií. V súčasnosti sa hovorí o asi 200 publikáciách, ktoré sa zaoberajú zázračným hormónom irisine. Ale ako to už často býva, tento sen nakoniec nie je hmatateľný.
Severonemeckí vedci okolo Elke Albrecht a Steffen Maak z Leibnizovho ústavu pre biológiu hospodárskych zvierat v Dummerstorfe mohli svojou najnovšou publikáciou v časopise Scientific Reports dodať posledný klinček do rakvy na irisinový humbuk a odhaliť vzrušenie zo zázračného hormónu ako artefaktu nešpecifickej väzby protilátky.
Krátko po zverejnení vyšla publikácia Boströma et al. Ostro kritizovaní kolegami vrátane komentátorov na stránke PubPeer. Išlo o technické chyby a biologické nezrovnalosti. Harold Erickson z Duke University v USA dokonca zhrnul svoju kritiku v recenzii (a neskôr Erickson z Maaku inicioval úspešnú spoluprácu pre vyššie uvedený príspevok).
Podľa Boströma a Spiegelmana je hormón irisín rozpustný v krvi štiepnym produktom proteínu FNDC5 viazaného na membránu. FNDC5 mRNA sa zase považuje za nadregulovanú v kostrovom svale v reakcii na fyzickú námahu sprostredkovanú transkripčným faktorom PGC1-a. Podľa Ericksona bohužiaľ v odbornej literatúre neexistujú dostatočné dôkazy o preferenčnej expresii FNDC5 v kostrovom svale alebo o transkripčnej úlohe PGC1-α pri jeho zvýšenej regulácii.
V každom prípade sa zdá, že gén FNDC5 mutoval u ľudí, ako ukázala pracovná skupina Jürgena Eckela z Nemeckého diabetického centra v Düsseldorfe v publikácii PLOS-ONE. Samotný lokus FNDC5 je zmenený vo svojom štartovacom kodóne ATG takým spôsobom, že by mohli byť ťažko dostupné akékoľvek úrovne expresie, ktoré stoja za zmienku. Pokiaľ ide o samotný derivát irisínu FNDC5, jeho prítomnosť už nie je istá u žiadneho druhu.
Po ľuďoch, koňoch alebo myšiach po dúhovke ani stopy
Podľa Steffena Maaka cirkulujúce kosatce nebolo možné nájsť ani u ľudí, ani u dostihových koní alebo iných hospodárskych zvierat vystavených športu. Irisin nebolo možné spoľahlivo detekovať ani u myší, o ktorých hovoril dokument Entdecker-Nature.
Maak a jeho kolegovia používali špeciálne dlhodobo vybrané línie myší, ktoré vykazovali vysoký výkon na bežiacom páse a boli pôvodne schopné detekovať irisín. Vyšetrovanie s inými protilátkami však vyvolalo pochybnosti o reprodukovateľnosti výsledkov.
Na rozdiel od väčšiny výskumníkov Irisin použilo Maakovo laboratórium namiesto ELISA o niečo zložitejšiu metódu Western blot. Rozhodujúca výhoda: Pri separácii veľkosti pomocou SDS-PAGE sa dá dobre vyhodnotiť špecificita protilátky. Je „správna“ veľkosť pásky silná a ostrá a vyčnieva dostatočne jasne z nešpecifického odpočinku? Iba potom je možné tejto protilátke dôverovať. Pri teste ELISA sa však celá „polievka“ meria plošne. Takže v podstate človek nevie, akú veľkosť má proteín rozpoznávaný protilátkou ELISA a koľko rôznych proteínov je detekovaných súčasne. Ak sa ako vzorka použije aj krv s bohatou rozmanitosťou bielkovín, potom je v prípade exotických epitopov, ako je irisín, jednoducho naivný - alebo dokonca hrubá nedbanlivosť - vzdať sa kontroly špecifickosti protilátok. Je to tak preto, lebo priemyselní výrobcovia zvyčajne testujú svoje protilátky iba proti purifikovaným rekombinantným epitopom a len zriedka proti bunkovým lyzátom alebo tkanivu.
Irisínové protilátky ukazujú niečo, čo tam vôbec nie je
Takéto komerčné protilátky a súpravy ELISA pochádzajú od Boströma et al. a v mnohých následných publikáciách ako prostriedok voľby. Takže sa stalo, že v ľudskej krvi bolo možné šťastne zistiť všetko medzi 0,01 ng/ml a viac ako 2 000 ng/ml irisínu. Vo svojej súčasnej publikácii Maak a kolegovia prostredníctvom mnohých kontrolných testov s irisínovými peptidmi zistili, že všetky komerčné protilátky a súpravy ELISA rozpoznávajú rekombinantný a syntetický irisín, sú však veľmi nešpecifické a viažu tiež úplne nezúčastnené krvné proteíny.
Komerčné protilátky vykazovali nešpecifické pozitívne signály dokonca aj vo vzorkách, ktoré neobsahovali irisínový peptid. Protilátka od Abcam, ktorá bola použitá na objav Irisinu Boströmom a kol. použité nebolo úplne spoľahlivé. Toto bolo namierené proti C-koncovej doméne proteínu FNDC5; takže presne proti časti, ktorá by NEMALA vôbec obsahovať Irisin.
To, že s nimi Boström a Spiegelman stále lovili svoje dúhovky, je prekvapujúce a všetci zúčastnení, vrátane recenzentov, to mali vedieť. Príroda napriek tomu papier hľadajúci senzáciu prijal. Vedúci štúdie Spiegelman nedbalo odpovedal na kritiku PubPeera tým, že Abcam nesprávne špecifikoval epitop protilátky. Maak opísal svoj nasledujúci argument pre Laborjournal ako „nie veľmi presvedčivý“. Keď kolegovia chceli vidieť dôveryhodné dôkazy pre toto tvrdenie, urazený Spiegelman prerušil diskusiu. Odvtedy nereagoval na ďalšiu kritiku svojich publikácií o PubPeer.
Boström je teraz vedúcim skupiny na Inštitúte Karolinska vo Švédsku, nedávno ho však univerzita v Göteborgu odsúdila za vedecké pochybenie, manipuláciu s údajmi a falšovanie výsledkov. Nie je prekvapením, že Nature necháva nereprodukovateľný a nespoľahlivý papier nekomentovaný, rovnako ako mnoho iných nemŕtvych zombie publikácií. Štúdiu Maak odmietol sesterský časopis Nature Communications pre jej „nedostatočný koncepčný význam“. Nech je to už akokoľvek, do výskumu Irisinu by sa zatiaľ nemalo čerpať ďalšie financovanie.
Posledné zmeny: 05.12.2015