Lexikón biológie SDS elektroforézy; Fórum o biológii
bilufi
plaz
Ahoj!
Musím napísať správu o svojej SDS elektroforéze a mala by obsahovať krátku teoretickú časť. Niečo som teraz napísal, ale nie som si istý, či to tak môžete urobiť. Má niekto skúsenosti a vie si o tom prečítať?
SDS elektroforéza je separačná metóda pre proteíny, ktorá je založená na ich rôznych molárnych hmotnostiach.
SDS znamená dodecylsulfát sodný (dodecylsulfát sodný) a je to aniónová detergentná molekula s veľkou nepolárnou a malou polárnou skupinou.
V prípade proteínu nepolárna oblasť smeruje dovnútra, polárna oblasť von. SDS sa viaže na proteín tak, že všetky proteíny vo vzorke sú negatívne nabité v dôsledku remodelovania. Komplexy SDS-proteín potom migrujú na kladný pól v elektrickom poli.
Elektroforéza sa uskutočňuje v polyakrylamidovom géli. Obsahuje póry, vďaka ktorým dochádza k separácii bielkovín. Väčšie bielkoviny musia najskôr póry od seba odtlačiť, aby difundovali cez gél. Toto trvá dlhšie, aby došlo k oddeleniu veľkosti častíc.
Po separácii môžu byť proteíny zafarbené Coomassie modrou priamo v géli.
Bol by som vďačný za konštruktívnu kritiku,
Moderátor
bilufi
plaz
Áno OK. Takže vec „formovania“ je skutočne hlúpa. „Vonkajší“ bol skutočne spojený s „záporne účtovaným“.
Ale potom to zmením.
Je „pomer poplatkov“ pevne stanovený termín?
Je to lepšie takto:
V prípade proteínu nepolárny calc ukazuje dovnútra, polárna oblasť smerom von. Proteíny denaturujú a SDS sa na ne viaže, takže proteíny vo vzorke sú všetky negatívne nabité v rovnakom rozsahu.
Moderátor
bilufi
plaz
Thorsten 1978
plaz
Keby som mal vysvetlenie na tému „formovania“, „denaturácie“ a „pomeru hmotnosť/náboj“, čo je podľa mňa celkom pochopiteľné. Mohol by som to zhrnúť podľa vlastných slov, ale vysvetlenie v knihe „Bioanalytik“ od Friedricha Lottspeicha považujem za veľmi dobré. Preto v tejto chvíli celá vec ako citát:
„SDS je aniónový detergent a pokrýva vnútorný náboj proteínov tak efektívne, že micely s konštantným negatívnym nábojom na jednotku hmotnosti sa vytvárajú s približne 1,4 g SDS na g proteínu. Počas prípravy vzorky sa vzorky s prebytkom SDS zahrejú na 95 ° C zahreje sa a terciárne a sekundárne štruktúry sa rozpustia štiepením vodíkových väzieb a rozťahovaním molekúl. Sírne mostíky medzi cysteínmi sa štiepia pridaním redukčnej tiolovej zlúčeniny, napríklad ß-merkaptoetanolu alebo ditiotreitolu. Napnuté reťazce aminokyselín nabité SDS tvoria elipsoidy. „