Lieky vyrobené z rastlinných extraktov ako inhibítory lipázy - SCHREZENMEIER JUERGEN

1. Použitie nasledujúcich látok, látkových extraktov alebo látkových esencií ako jednotlivých zložiek alebo ako zmesi na výrobu perorálne podávaného liečiva, ktoré pôsobí ako inhibítor lipázy:
Kardamón a/alebo
Majorán a/alebo
Tymián a/alebo
Chili (Capsicum frutescens) a/alebo
Pupalkový a/alebo
Oreganové listy (oreganum vugare) a/alebo
Listy harmančeka (Chamomilla recutica) a/alebo
Muškátový oriešok (Myristica fragrans) a/alebo
Jablková omáčka (výlisky) a/alebo
Obilné klíčky a/alebo
Mandle a/alebo
Lieskový orech a/alebo
Orech a/alebo
Tekvicové semienko a/alebo
Cuphea wrightii a/alebo
Pupalkový a/alebo
Ľanový olej (Linum usitatissimum) a/alebo
lopúch veľký (Arctium lappa L) a/alebo
Ľan a/alebo
Klíčky Helianthus annuus (slnečnica) a/alebo
Nechtík lekársky (Calendula officinalis) a/alebo
Echinops banaticus a/alebo
Mallotus philippinensis a/alebo
Repka olejná a/alebo
Sezam a/alebo
čierny rasca a/alebo
Cynoglossum officinale a/alebo
Lapachotea a/alebo
Arctostaphylos uva-ursi a/alebo
Kamenný kvet (Flor de piedra) a/alebo
Propolis a/alebo
Primula Veris a/alebo
Magnolia officinalis a/alebo
Zeler (Apium graveolens)

lieky

2. Použitie nasledujúcich látok, extraktov látok alebo látkových esencií ako jednotlivých zložiek alebo zmesí
Kardamón a/alebo
Majorán a/alebo
Tymián a/alebo
Chili (Capsicum frutescens) a/alebo
Pupalkový a/alebo
Oreganové listy (oreganum vugare) a/alebo
Listy harmančeka (Chamomilla recutica) a/alebo
Muškátový oriešok (Myristica fragrans) a/alebo
Jablková omáčka (výlisky) a/alebo
Obilné klíčky a/alebo
Mandle a/alebo
Lieskový orech a/alebo
Orech a/alebo
Tekvicové semienko a/alebo
Cuphea wrightii a/alebo
Pupalkový a/alebo
Ľanový olej (Linum usitatissimum) a/alebo
lopúch veľký (Arctium lappa L) a/alebo
Ľan a/alebo
Klíčky Helianthus annuus (slnečnica) a/alebo
Nechtík lekársky (Calendula officinalis) a/alebo
Echinops banaticus a/alebo
Mallotus philippinensis a/alebo
Repka olejná a/alebo
Sezam a/alebo
čierny rasca a/alebo
Cynoglossum officinale a/alebo
Lapachotea a/alebo
Arctostaphylos uva-ursi a/alebo
Kamenný kvet (Flor de piedra) a/alebo
Propolis a/alebo
Primula Veris a/alebo
Magnolia officinalis a/alebo
Zeler (Apium graveolens)
ako inhibítory lipázy.

To sa dá dosiahnuť systematicky aktívnymi zložkami, ktoré sa vstrebávajú samy alebo sú deaktivované počas trávenia, a sú tak odstránené z reakčnej hmotnosti komplexom lipáza-kolipáza-tuk.

Podávanie inhibítorov lipázy sa považuje za užitočné liečivo pre pacientov s príznakmi metabolického syndrómu. Okrem toho je možné ako potravinárske aditíva použiť rastlinný extrakt alebo zložky z neho izolované inhibujúce lipázu.

Použitie rastlinných extraktov ako možných inhibítorov lipázy v zažívacom trakte je pomenované z niekoľkých patentov. Toto sú japonské aplikácie s nasledujúcimi číslami: JP 2003 026 585, JP 2002 275 077, JP 2002 047 194 .

Pozitívne účinky rastlinných extraktov na postprandiálny lipidový profil boli opísané v niekoľkých publikáciách, konkrétne v nasledujúcich látkach, ako sú Zylokaria Paliurus, semená hrozna, šalvia, Cassia mimosoides, L. var. Nomame Makine a Alpinia officinarum.

Okrem toho si vynález dal za úlohu určiť ďalšie rastliny, ktoré sa môžu použiť ako inhibítory lipázy.

Na vyriešenie tohto problému sú uvedené extrakty alebo esencie nasledujúcich látok a ich zmesí.
Kardamón
majoránka
tymián
Chilli (Capsicum frutescens)
Pupalkový večer
Oreganové listy (oreganum vugare)
Listy harmančeka (Chamomilla recutica)
Muškátový oriešok (Myristica fragrans)
Jablková omáčka (výlisky)
Obilné klíčky
mandľový
lieskový orech
orech
Tekvicové semiačko
Cuphea wrightii (e)
Pupalkový večer
Ľan olejný (Linum usitatissimum)
lopúch veľký (Arctium lappa L) (e)
Ľan (e)
Klíčky Helianthus annuus (slnečnica) (e)
Nechtík lekársky (Calendula officinalis) (e, h)
Echinops banaticus
Mallotus philippinensis (e)
Repka, e)
Sezam
čierny rasca (podstatné meno)
Cynoglossum officinale
Lapachotea (e)
Arctostaphylos uva-ursi
Kamenný kvet (flor de piedra)
Propolis
Primula Veris
Magnolia officinalis
Zeler (Apium graveolens)

Opis prípravy extraktov a) Extrakty CO 2:

Vysokotlaková extrakcia superkritickým oxidom uhličitým. Neobsahuje vodu, cukor ani bielkoviny.

Kardamón:

  • Časť použitej rastliny: semená s kapsulami z Elettaria cardamomum.
  • Surovina sa získavala z Guatemaly.
  • Konzistencia extraktu: olejovitá tekutina
  • Extrakt obsahuje 72% éterických olejov
  • Ostatné komponenty:
    α-pinén, β-pinén, β-myrcén, 1,8 cineol, linalool, α-terpineol, linalylacetát, terpinylacetát
Majoránka:
  • Časť použitej rastliny: Listy oregano majorana
  • Konzistencia extraktu: olejovitá tekutina
  • Extrakt obsahuje 80% éterických olejov
  • Ostatné komponenty:
    Sabinen, cis a trans Sabinenhydrát, Terpinen-4-ol, Sabinenhydratacetát
tymián

Časť použitej rastliny: listy týmusu obyčajného. Surovina sa získavala z Nemecka. Ďalšie informácie nájdete vyššie.

Látky inhibujúce lipázu v rastlinných extraktoch ešte neboli identifikované.

Opis prípravku a postupu na stanovenie enzýmových aktivít. Príprava skúšobného roztoku

Na prípravu testovacieho roztoku z extrahovaného prášku a tekutého materiálu sa 200 mg extrahovaného materiálu rozpustí v 1 ml vhodného rozpúšťadla a energicky sa mieša. Po centrifugácii pri 3 400 otáčkach počas 5 minút sa získaná kvapalná zložka použije ako testovací roztok. Na nastavenie pomeru medzi koncentráciou tuhých zložiek a hmotou enzýmu v poslednom experimente sa testovací roztok zriedil v pomere 1: 200, aby sa stanovila alkalická fosfatáza.

Na prípravu testovacieho roztoku z extraktov CO 2 a oleorezínov sa 100 μl olejovitého kvapalného extraktu rozpustí v 900 μl vhodného enzýmového pufra a nechá sa pôsobiť ultrazvukom pri 100 W po dobu 5 minút.

Pankreatická lipáza (pankreatická lipáza)

Na stanovenie aktivity pankreatickej lipázy in vitro sa uskutočnili dve stanovenia lipázy:

  • 1. Test na stanovenie aktivity lipázy pozostáva z
    - 200 μl 50 mM/L tlmivého roztoku BICIN (pH 8,0) obsahujúceho 1% arabskej technickej gumy.
    - 50 μl roztoku rastlinného extraktu a
    - 25 μl 0,35 mM/l roztoku pankreatickej lipázy

Táto zmes sa inkubovala 20 minút pri 37 ° C.

Konečné meranie aktivity pankreatickej lipázy sa uskutočňuje v autoanalyzátore pre klinickú chémiu (Konelab, Kone) s použitím testu lipázového kolorimetra s diacylglycerolom s metylresorufínom v tretej polohe ako substrátom a kolipázou a žlčovými soľami ako základnými kofaktormi. Tento proces je špecifický pre prankreatickú lipázu a je založený na enzýmoch štiepiacich metylresorufín zo substrátu.

Na stanovenie aktivity pankreatickej lipázy v autoanalyzátore bola vybraná nasledujúca pipetovacia schéma:

  • 1. 60 μl činidla 1: kolipáza a cholát
  • 2. 2 μl testovacieho roztoku + 10 μl premývacieho roztoku
  • 3. Inkubácia 180 sekúnd
  • 4. 40 μl činidla 2: kolorimetrický substrát a cholát
  • 5. Inkubácia po dobu 120 sekúnd

Aktivita lipázy sa stanovila na základe 12 meracích bodov po 83 sekundách. Metylrezorufín sa meral fotometricky pri 75 nanometroch.

  • 2. Inhibícia lipázy pod vplyvom rastlinných extraktov sa stanovila pomocou druhej metódy merania aktivity lipázy, pri ktorej sa meria uvoľňovanie voľných mastných kyselín počas hydrolýzy z trioleínu enzýmom.
    Na prípravu inkubačnej zmesi sa použije roztok pripravený na priame použitie (činidlo R1). R1 sa skladá z:
    26 mmol/L Tris pufor, pH 9,2
    19 mmol/l deoxycholát sodný
    0,1 mmol/l chlorid vápenatý
    0,3 mmol/l trioleínu
    Kolipáza 300 KU/L

Inkubačná zmes je zložená nasledovne:
50 μL 26 mmol/L Tris pufor, pH 9,2
50 μL 9,7 mmol/l trioleínová emulzia v R1
50 μL 0,134 mol/L pankreatickej lipázy v 26 mmol/L Tris pufru, pH 9,2
50 μL testovacieho roztoku

Pri skúmaní extraktov C02 sa použil 1% metylcelulóza v 26 mmol/l Tris tlmivého roztoku (pH 9,2).

Po inkubačnej dobe 30 minút pri 37 ° vo vodnom kúpeli sa reakcia zastavila pridaním 3 ml zmesi chloroform-heptán-metanol (50: 49: 1). Uvoľnené voľné mastné kyseliny sa extrahovali z reakčnej zmesi za intenzívneho miešania počas 10 minút. Po centrifugácii (3 400 otáčok, 10 minút) sa z chloroformovej fázy získajú 2 ml zvyšku a 1 ml medeného činidla (94 ml čistej vody, 6 ml 1N NaOH, 6,45 mmol/l na Cu (N03) 2, Pridá sa 0,1 mol/l trietanolamínu, 33% (hmotn./obj.) NaCl). Táto zmes sa intenzívne miešala 10 minút a centrifugovala sa pri 3400 otáčkach 10 minút. 1 ml bol odobratý z kvapaliny nad usadeninou a bol pridaný 1 ml chloroformu s 0,1% bathocuproínu a 0,05 (hmotn./obj.) 3-terc-butyl-4-hydroxyanizol. Komplex mastná kyselina-meď-bathocuproín sa nakoniec stanoví fotometricky pri 480 nm v štandardnom fotometri.

Aby sa zabezpečilo, že pokles aktivity lipázy nie je spôsobený nešpecifickým inhibítorom enzýmu alebo denaturáciou enzýmového komplexu, bola tiež stanovená aktivita a-amylázy a alkalickej fosfatázy. Inhibícia α-amylázy môže mať za následok zníženie postprandiálnej hladiny cukru v krvi a považuje sa za ďalší pozitívny účinok pre pacientov s cukrovkou.

Merania aktivity amylázy pod vplyvom rastlinných extraktov sa uskutočňovali nasledovne:
Inkubačná zmes na stanovenie aktivity amylázy pozostáva z celkom 250 μL:

  • - 200 μL 50 mM/L MOPSO tlmivého roztoku (pH 8,0) s 1% arabského guma
  • - 25 μl roztoku rastlinného extraktu a
  • - 25 μl 0,35 mM/l roztoku α-amylázy

Táto zmes sa inkubovala 20 minút pri 38 ° C. Konečné meranie aktivity pankreatickej lipázy sa uskutočňuje v autoanalyzátore pre chemickú chémiu (Konelab, Kone).

Princíp chemickej reakcie:

  • 1. Etylén-p-nitrofenol- (glukóza) 7 → etylén- (glukóza) 3-4 + ρ-nitrofenol- (glukóza) 2-4
  • 2. zvyšky ρ-nitrofenolu (glukózy) → ρ-nitrofenol (λ = 405 nm) + glukóza

Procedúra pipety v automatickom analyzátore na stanovenie aktivít α-amylázy sa uskutočňovala nasledovne:

  • 1. Činidlo 120 μL: substrát + α-glukozidáza
  • 2. Inkubácia 300 sekúnd
  • 3. 3 μL testovacieho roztoku
  • 4. Inkubácia po dobu 180 sekúnd

Aktivita a-amylázy sa stanoví meraním 5 bodov za 120 sekúnd.

Meranie aktivity alkalickej fosfatázy pod vplyvom rastlinných extraktov sa uskutočňovalo nasledovne:
Inkubačná zmes na stanovenie aktivity lipázy pozostávala z

  • - Obsahujúce 200 μL 50 mM/L tlmivého roztoku HEDTA (pH 8,0),
  • - 25 μL testovacieho roztoku rastlinného extraktu a
  • - 25 μl roztoku alkalickej fosfatázy 0,014 mM/l

Zmes sa inkubovala 20 minút pri 22 ° C.

Konečné meranie aktivity pankreatickej lipázy sa uskutočnilo v autoanalyzátore pre klinickú chémiu (Konelab, Kone).

Reakčná rovnica

  • 2-amino-2-metyl-1-propanol + ester 4-nitrofenylfosfátu → (2-amino-2-metyl-1-propanoö) fosfát + 4-nitrofenoxid (λ = 409 nm)

Postup pipety v automatickom analyzátore na stanovenie aktivity alkalickej fosfatázy bol nasledovný:

  • 1. 150 μL činidla
  • 2. 300 s inkubácia
  • 3. 3 μL testovacieho roztoku
  • 4. Inkubácia po dobu 120 s

Aktivita alkalickej fosfatázy sa stanovila pomocou 5 meracích bodov za 22 sekúnd.

Výsledky% inhibície enzýmov v enzymatických testoch: