Názov práce

Diplomová práca Názov diplomovej práce Vplyv fajčenia na lipidový profil a vybrané parametre oxidačného stresu u zdravých dospelých Autor Julia Pöschl Požadovaný akademický titul Magistra der Naturwissenschaften (Mag.rer.nat) Viedeň, 2011 Číslo štúdie podľa študijného listu: A 474 Študijný odbor podľa študijného listu: Diplomové štúdium vedy o výžive Školiteľ: o. Univ.-Prof. DR. Ibrahim Elmadfa

práce

Tretie poďakovanie Rád by som sa pri tejto príležitosti poďakoval najmä mojim rodičom a najmä mojej matke. Túto prácu jej venujem, aby som sa jej zo srdca poďakoval za jej neobmedzenú podporu, trpezlivosť a pomoc počas štúdia. Špeciálne poďakovanie patrí aj pánovi o. Univ.-Prof. DR. Ibrahimovi Elmadfaovi za prevzatie mojej dizertačnej práce a priateľskú podporu počas mojej práce ako aj môjmu spoluriaditeľovi Dr. Elisabeth Fabian, ktorá bola vždy po mojej strane radami a činmi napriek svojej dopravnej nehode a dlhému rehabilitačnému pobytu. Na záver by som sa však chcel poďakovať môjmu najväčšiemu vzoru, môjmu otcovi. Jeho podpora ma posilnila pri uskutočňovaní mojich snov a pri dosahovaní mojich cieľov.

Vek VI 3.4.1. Metóda. 26 3.4.2. Použité materiály a vybavenie. 26 3.4.3. Vykonanie rozhodnutia. 27 3.4.4. Vyhodnotenie. 28 3.5. Stanovenie oxidovaného LDL cholesterolu (oxldl). 29 3.5.1. Metóda. 29 3.5.2. Použité materiály a vybavenie. 29 3.5.3. Riedenie vzoriek. 30 3.5.4. Vykonanie rozhodnutia. 30 3.5.5. Vyhodnotenie. 30 3.6. Stanovenie proteínov s pokročilou oxidáciou (AOPP). 31 3.6.1. Metóda. 31 3.6.2. Použité materiály a vybavenie. 31 3.6.3. Vykonanie rozhodnutia. 31 3.6.4. Vyhodnotenie. 32 3.7. Kontrola kvality. 32 3.8. Štatistické vyhodnotenie. 33 4. Výsledky. 34 4.1. Vekové a pohlavné rozdelenie. 34 4.2. Fajčenie. 37 4.3. Antropometrické parametre. 4.3.1. Výška 4.3.2. Telesná hmotnosť. 4.3.3. BMI. 44 4.3.4. Obvod pása. 44 4.3.5. Obvod bokov. 45 4.3.6. Pomer W/H. 46 4.4. Lipidový profil. 47 4.4.1. Celkový cholesterol. 47 4.4.2. HDL cholesterol. 48 4.4.3. Celkový/HDL cholesterol. 49 4.4.4. Triglyceridy. 49 4.4.5. LDL cholesterol. 50 4.4.6. LDL/HDL kvocient. 51 4.5. Parametre na stanovenie oxidačného stresu. 4.5.1. Celková antioxidačná kapacita (TAC). 52 4.5.2. MDA. 53 4.5.3. AOPP. 54 4.5.4. oxldl. 55

Vek VII 5. Diskusia. 5.1. Zohľadnenie celého kolektívu z hľadiska rozdielov medzi pohlaviami. 5.1.1. Lipidový profil, antropometria a kardiovaskulárne riziko. 5.1.2. Fajčenie, oxidačný stres a kardiovaskulárne riziko. 60 5.2. Fajčenie a jeho vplyv na lipidový profil, antropometriu a kardiovaskulárne riziko. 64 6. Záver. 66 7. Zhrnutie. 69 8. Zhrnutie. 71 9. Bibliografia. i

STRANA IX Zoznam obrázkov Obrázok 2-1: Patogenéza aterosklerotických zápalových reakcií. 13 Obrázok 2-2: Oxidačný stres. 18 Obrázok 3-1: Distribúcia fajčenia. 21 Obrázok 4-1: Rozdiel medzi ženami a mužmi, pokiaľ ide o lipidový profil a celkovú antioxidačnú kapacitu (*: p 0,85 u žien a WHR> 1,00 u mužov, existuje abdominálna obezita, a teda zvýšené kardiovaskulárne riziko ( ELMADFA, 2004). Redukcia viscerálneho a podkožného tuku v tele vedie k zníženiu kardiovaskulárnych rizikových faktorov a niekedy zlepšuje lipidový profil, krvný tlak, hladinu glukózy v krvi, HbA1cs a inzulínovú rezistenciu (HAUSTEIN, 2004).

Vek 5 Podľa rakúskych štatistík má 44% mužov a 55% žien v Rakúsku normálnu váhu. 43% mužskej populácie sa považuje za nadváhu a 12% dokonca za obéznych. U ženskej obéznej populácie je to 13%. Vo vekovej skupine od 60 do 74 rokov je frekvencia nadváhy a obezity najvyššia u oboch pohlaví (muži: 19%; ženy: 21%). Ak teraz porovnáme výsledky prieskumu BMI z rokov 2006/07 s otázkami špeciálneho prieskumu zdravotníctva v rámci mikrosčítania v roku 1999, dospeli sme k nasledujúcemu záveru: Významný nárast obéznych ľudí možno pozorovať u oboch pohlaví a vo všetkých vekových skupinách. Čo sa týka rozsahu podváhy (BMI 200 mg/dl alebo 5,2 mmol/l triglyceridov:> 160 mg/dl alebo 1,8 mmol/l LDL cholesterol:> 130 mg/dl alebo 3,4 mmol/l l HDL cholesterol: ph = 7,4 3.3 Stanovenie malondialdehydu v plazme 3.3.1 Metóda Malondialdehyd je produktom rozkladu peroxidácie lipidov. Je preto dôležitou metódou na stanovenie oxidačného poškodenia biomolekúl. Plazmatická koncentrácia MDA bola stanovená v roku Stanovené v priebehu tejto práce pomocou HPLC (WONG et al., 1996).

Strana 24 3.3.2. Použité materiály a vybavenie Tabuľka 3-3: Zariadenie na stanovenie MDA Kolóna: LichroCART 125-4 Lichrosher 100 RP-18,5 μm, ochranná kolóna Merck: LichroCART 250-4 Lichrosher 100 RP-18, 10 μm, Merck LaChrom Merck Hitachi Chromatografické systémové čerpadlo L-7100 Fluoriscenčný spektrofotometer F-1050 Integrator D-7500 Tabuľka 3-4: Činidlá pre použité chemikálie na stanovenie MDA súvisiace s tetraetoxypropánom Sigma č. T-9889 Etanol pa Riedel de Haën č. 32221 kyselina fosforečná 85% Riedel de Haën No.30417 Thiobarbituric Acid Sigma No. T-5500 Methanol Merck LiChrosolvo No. 1.06007.2500 Dihydrogenfosforečnan draselný Riedel de Haën č. 04245 Tabuľka 3-5: Podmienky HPLC pre stanovenie MDA Mobilná fáza A: B = 60:40 A: Fosfátový pufor (vopred rozpustite 6,8 g dihydrogenfosforečnanu draselného v 800 ml destilovanej vody; upravte pH = 6,8 pomocou 1 M KOH; naplňte do 1 l destilovanou vodou; prefiltrujte) B: objem vstreknutia metanolu prietok 20 ul 1,0 ml/min Tlak 85 bar Citlivosť 20 detekčná emisná vlnová dĺžka: 563 nm excitácia š vlnová dĺžka: 532 nm, doba prevádzky 5 minút

Page 28 Tabuľka 3-8: Reagenty PBS ABTS tlmivý roztok Štandardná plazma Myoglobín H202 slepý 410 µl 400 µl - - 20 µl 170 µl štandardný 410 µl 400 µl 10 µl - 20 µl 170 µl vzorka 400 µl 400 µl - 20 ul 20 ul 170 ul Po pridaní H202 k testovanej zmesi sa počas 6 minút fotometricky meria extinkčná krivka pri 734 nm. Toto je doba, ktorú môže najvyšší štandard Troloxu inhibovať reakciu. 3.4.4. Vyhodnotenie Koncové body 5 štandardov a vzoriek sú vyjadrené ako percentá slepého pokusu. (Prázdna hodnota abs. - štandardná abs.)/Prázdna hodnota abs. = [%] (Prázdna hodnota abs. - absencia vzorky)/Prázdna hodnota abs. = [%] Hodnotenie sa vykonáva lineárnou regresiou štandardných úrovní, pretože existuje priamy vzťah medzi% mierami štandardov a ich koncentráciou. Antioxidačná kapacita vzorky sa udáva ako mmol Trolox ekvivalentov (Trolox-Ä)/l. Tabuľka 3-9: Štandardné koncentrácie na vyhodnotenie TAC č. Trolox [2,5 mm] Koncentrácia PBS pufru [ul] [µl] [mmol/l] Štandard 1 100 400 0,5 Štandard 2 200 300 1 Štandard 3 300 200 1,5 štandard 4 400 100 2,0 štandard 5 100-2,5

P a g e 32 3.6.4. Vyhodnotenie Koncentrácia AOPP sa hodnotila pomocou priamej lineárnej štandardnej krivky, ktorá sa vytvorila zo šiestich štandardov (koncentrácia: 0 umol/l 100 umol/l). 3.7. Zabezpečenie kvality S cieľom overiť kvalitu a presnosť použitých metód sa pre každú detekciu uskutočnila intraanalýza (stanovenie desiatich rovnakých vzoriek) a intertest (stanovenie rovnakej vzorky v piatich rôznych dňoch) (tabuľka 3.12). Tabuľka 3-12: Variačné koeficienty (CV) parametrov Intra Assay a Inter Assay CV Intra Assay CV (%) Inter Assay CV (%) Celkové lipidy 2,9 4,3 4,3 Celkový cholesterol 2,1 2,3 HDL Cholesterol 1,4 4, 3 Triglyceridy 1,6 2,4 MDA 0,4 1,5 TAC 0,3 0,8 AOPP 1,0 1,4 oxldl 1,4 3,6

Strana 33 3.8. Štatistické vyhodnotenie Štatistické vyhodnotenie výsledkov analýz sa uskutočnilo pomocou štatistického softvéru SPSS 16.0 pre Windows. Bol uskutočnený Kolmogorov-Smirnovov test na kontrolu jednotlivých parametrov z hľadiska normálneho rozdelenia a homogenity odchýlky. Priemerné porovnanie normálne distribuovaných charakteristík sa uskutočnilo pomocou t-testu pre nezávislé vzorky, zatiaľ čo Mann-Whitneyov U-test sa použil pre údaje, ktoré neboli normálne distribuované. Lineárne regresné analýzy sa uskutočňovali podľa Pearsona.

Vek 47 1,2 1 [a] [b] 0,8 pomer W/H 0,6 0,4 0,2 0 Ženy Muži Fajčiari Nefajčiari Ex-fajčiari Obrázok 4-6: Porovnanie pomeru W/H medzi jednotlivými skupinami a: ženy ženy p 200mg/dl alebo> 5,2 mmol/l. Ak vezmeme do úvahy celkový kolektív, hodnota bola v priemere 5,2 ± 1,2 mmol/l, a teda u 51% testovaných osôb nad odporúčaným referenčným rozsahom. Medzi pohlaviami neboli takmer žiadne rozdiely, ale zvýšená hodnota sa zistila u 56% fajčiarov, 49% nefajčiarov a 46% bývalých fajčiarov. Taktiež sa zistili signifikantne pozitívne korelácie (uvádza sa p 5. Táto hodnota bola prekročená iba u 12% testovaných osôb, 36% z nich u žien a 64% z nich u mužov. Kvocient sa významne líšil medzi pohlaviami (p 160 mg/dl a 1 8 mmol/l, čo teda predstavuje zvýšené kardiovaskulárne riziko. V porovnaní medzi pohlaviami mali vyšetrovaní muži priemerne vyššiu hodnotu ako zúčastnené ženy (p 1,8 mmol/l bolo 10% u žien, u mužov (20%) bola dvakrát vyššia, čo je výrazný rozdiel v porovnaní s priemerom-

Na druhej strane nebolo možné určiť, či sa testovaná osoba označuje ako fajčiar, bývalý fajčiar alebo prísny nefajčiar (tabuľka 4.4.). Riziko však bolo vyššie u bývalých fajčiarov (22%) a fajčiarov (16%) v porovnaní s nefajčiarmi (8%). Výsledok tejto štúdie ukazuje významnú koreláciu medzi hmotnosťou (GK: r = 0,311, p 130 mg/dl alebo 3,4 mmol/l, čo bolo v prípade viac ako 30% zúčastnených subjektov. Významný rozdiel (p 3 4 mmol/l) a s tým spojené zvýšené riziko kardiovaskulárnych chorôb bolo výraznejšie u účastníkov štúdie mužov. Iba necelých 60% mužov a 71% žien malo hodnotného fajčiara, p