PDF QUANTA Lite TM F-aktín IgA ELISA iba na diagnostiku in vitro Iba pri zložitosti CLIA, vysoká - zadarmo

Stručný opis

Stiahnite si QUANTA Lite TM F-Actin IgA ELISA pre diagnostiku in vitro Zložitosť CLIA: vysoká.

quanta

Popis

ELISA QUANTA LiteTM F-aktín IgA

Iba pre „diagnostiku in vitro“ Zložitosť CLIA: vysoká

Účel použitia QUANTA LiteTM F-Actin IgA je enzýmovo viazaný imunosorbentný test (ELISA) na semikvantitatívnu detekciu protilátok IgA proti F-aktínu hladkých svalov v ľudskom sére. U pacientov s klinickými nálezmi naznačujúcimi celiakiu sa na hodnotenie pravdepodobnosti významnej atrofie klkov používa prítomnosť protilátok anti-F-aktínu triedy IgA.

Princíp testu F-aktínový antigén purifikovaný afinitnou chromatografiou sa naviazal na jamky polystyrénovej mikrotitračnej doštičky pri zachovaní pôvodnej konfigurácie. Predriedené kontroly a zriedené séra pacienta sa pipetujú do rôznych jamiek. Existujúce protilátky proti F-aktínu sa viažu na antigén. Zvyšok vzorky/kontroly sa odstráni premytím. Enzýmom značený anti-ľudský IgA sa napipetuje do jamiek a viaže sa na pacientovu protilátku počas druhej inkubácie. Po odstránení zvyšného konjugátu v ďalšom premývacom kroku sa pridá chromogénový substrát. Intenzita výslednej farebnej reakcie sa meria po zastavení pomocou fotometra na mikrotitračnej doštičke. Kvantitatívne hodnotenie sa vykonáva porovnaním extinkčných hodnôt pacientov s hodnotou kalibrátora.

Obsah testovacieho balenia 1. 2. 3. 4. 5. 6.

Mikrotitračná doštička ELISA potiahnutá vysoko purifikovaným antigénom F-aktínu (12 - 1 x 8 jamiek), s držiakom prúžkov vo fóliovom obale a s desikantom ELISA negatívna kontrola, 1 fľaša pufra so stabilizátorom a ľudské sérum bez ľudských protilátok proti F-aktínu, vopred nariedené, pripravené na použitie, 1 2 ml F-Actin IgA ELISA Low Positive (kalibrátor), 1 fľaša tlmivého roztoku so stabilizátorom a ľudské sérum s protilátkami proti F-Actinu, vopred nariedené pripravené na použitie, 1,2 ml F-Actin IgA ELISA vysoko pozitívne (pozitívna kontrola), 1 fľaša tlmivého roztoku so stabilizátorom a ľudským sérom s protilátkami proti F-aktínu, predriedený pripravený na použitie, 1,2 ml riedidla vzorky HRP, 1 fľaša - ružovo sfarbená s fyziologickým roztokom pufrovaným Tris, Tween 20, proteínové stabilizátory a konzervačné látky, 50 ml HRP premývací koncentrát, 1 fľaša so 40x koncentrátom - Zafarbené na červeno pufrovaným soľným roztokom a Tween 20, 25 ml. Riedenie nájdete v príslušnej kapitole pokynov. 1

HRP IgA konjugát (kozí), antihumánny IgA, 1 fľaša - žltá s pufrom, proteínové stabilizátory a konzervačné látky, 10 ml TMB Chromogénu, 1 fľaša so stabilizátormi, 10 ml zastavovacieho roztoku HRP, 0,344 M kyselina sírová, 1 fľaša - bezfarebná, 10 ml

Preventívne opatrenia 1. 2. 3. 4.

Uchovávajte všetky reagencie súpravy pri 2-8 ° C. Neuchovávajte v mrazničke. Činidlá sú stabilné až do konca doby spotreby, ak sú skladované a manipuluje sa s nimi podľa pokynov. Nepoužité prúžky mikrojamiek vráťte do pôvodného obalu, vzduchotesne ich utesnite a vráťte do chladničky. Zriedený premývací pufor je stabilný jeden týždeň pri 2 - 8 ° C.

Vzorky Test by sa mal vykonať so vzorkami séra. Pridanie azidov alebo iných stabilizátorov do vzoriek séra môže nepriaznivo ovplyvniť výsledky. Nemali by sa používať vzorky, ktoré sú mikrobakteriálne kontaminované, hemolytické, lipemické alebo inaktivované teplom. Po odbere krvi musí byť sérum oddelené od krvi. Dokument NCCLS H18-A3 odporúča pre vzorky pacientov nasledujúce podmienky skladovania: 1) Neskladujte vzorky pri izbovej teplote dlhšie ako 8 hodín. 2) Ak nie je možné vykonať test do 8 hodín, uskladnite vzorky na chladnom mieste pri teplote 2 - 8 ° C. 3) Ak sa test nedá vykonať do 48 hodín, musí sa vzorka zmraziť na -20 ° C alebo nižšiu. Zmrazené vzorky musia byť po rozmrazení a pred testovaním poriadne pretrepané

Postup skúšky Materiál prítomný v testovacej súprave 1 1 1 1 1 1 1 1 1

Mikrotitračná doštička F-Actin ELISA (12-1 x 8 jamiek), s držiakom prúžku 1,2 ml predriedenej negatívnej kontroly ELISA 1,2 ml predriedeného F-Actin IgA ELISA nízka pozitívna kontrola 1,2 ml predriedeného F-aktínu IgA ELISA vysoko pozitívna kontrola 50 ml riedidla na vzorky HRP, 25 ml premývacieho koncentrátu HRP, 40-násobný koncentrát, 10 ml konjugátu HRP IgA (z kozy), anti-ľudský IgA 10 ml TMB Chromogen, 10 ml zastavovacieho roztoku HRP, 0,344M kyselina sírová

Potrebný ďalší materiál Pipety pre jednorazové pipetovacie špičky 5, 100, 200-300 a 500 µL Injekčné liekovky Eppendorf na riedenie séra, 4 ml objem destilovanej alebo deionizovanej vody 1 L injekčná liekovka pre zriedený premývací koncentrát HRP Čítačka pre mikrotitračné doštičky s filtrom 450 nm (a 620 nm) pre bichromatické meranie)

Metóda prípravy skúšky 1. 2.

Nechajte všetky činidlá a vzorky zohriať na izbovú teplotu (20 - 26 ° C) a dôkladne ich premiešajte. Celý obsah (25 ml) premývacieho koncentrátu nahraďte 975 ml destilovanej vody. premiešajte (zriedenie 1:40). Zriedený tlmivý roztok je stabilný jeden týždeň pri 2 - 8 ° C. Ak sa nemá použiť celá mikrotitračná doštička naraz, môžu sa pridať 2 ml koncentrátu so 78 ml destilovanej vody na prípravu 16 jamiek. byť zmiešaný. Zrieďte vzorky séra 1: 101 zmiešaním 5 ul séra s 500 μL riedidla vzoriek pripraveného na použitie. Zriedené vzorky by sa mali testovať do 8 hodín. Neriedte nízko pozitívnu kontrolu F-aktín IgA ELISA, pozitívnu kontrolu F-aktín IgA ELISA a negatívnu kontrolu ELISA. Každý test vyžaduje dve jamky pre každú z troch kontrol a jednu alebo dve jamky pre vzorku pacienta (odporúča sa, aby sa všetky vzorky pripravovali dvojmo, kým sa nedosiahne požadovaná presnosť a reprodukovateľnosť).

Nízka pozitívna kontrola ELISA pre F-aktín IgA, vysoká pozitívna kontrola F-aktín IgA ELISA a negatívna kontrola ELISA by sa mali vykonávať spolu s každým testom, aby sa zabezpečilo, že všetky reagencie a test fungujú správne. Pretože F-aktín IgA ELISA nízka pozitívna kontrola, F-aktín IgA ELISA vysoká pozitívna kontrola a ELISA negatívna kontrola sú predriedené, krok riedenia vzoriek pacienta nie je pre kontroly potrebný. Dodatočné kontroly na zabezpečenie kvality je možné vykonať v súlade s národnými alebo 3. usmerneniami

medzinárodné regulačné alebo akreditačné orgány. Príslušné kontroly je možné získať z ľudského séra a testovať pri 25 ° C

Negatívne Spochybniteľné Pozitívne 1. 2. 3.

Pozitívny výsledok anti-F-aktínu IgA u pacientov s celiakiou naznačuje zvýšenú pravdepodobnosť závažnej atrofie klkov. Negatívny výsledok naznačuje neprítomnosť protilátok IgA proti F-aktínu alebo koncentrácie pod detekčným limitom testovacieho systému. K laboratórnym výsledkom odporúčame pridať nasledujúcu poznámku: „Nasledujúce výsledky boli získané pomocou testu INOVA QUANTA LiteTM F-Actin IgA ELISA. Hodnoty F-aktínu IgA, ktoré boli stanovené pomocou testovacích systémov od iných výrobcov, nie je možné zameniť. Úroveň zisteného titra IgA nemôže korelovať s titrom sledovaného parametra. ““

Obmedzenia postupu 1. 2. 3. 4.

Imunitné komplexy alebo iné agregáty imunoglobulínov v sére pacienta môžu spôsobiť nešpecifickú väzbu a falošne pozitívne výsledky. Nie všetci pacienti s celiakiou sú pozitívni na protilátky proti IgA proti F-aktínu. Nie všetky SMA pozitívne vzorky majú protilátky proti F-aktínu IgA. Detekciu protilátok proti F-aktínu-IgA u pacientov s ochorením pečene je potrebné interpretovať opatrne, pretože prítomnosť protilátok proti F-aktínu-IgG v tejto skupine chorôb je často spojená s protilátkami proti F-aktínu-IgA, ktoré nemusia súvisieť. s črevnou patológiou. Protilátky proti F-aktínu IgA by sa mali merať iba u pacientov s celiakiou ako pomôcka pri hodnotení poškodenia čriev. Výsledky tohto testu by sa mali používať spolu s klinickými výsledkami a inými sérologickými testami. Výkonnostné charakteristiky pre iné vzorky ako séra neboli stanovené. 4

Údaje o výkone Očakávané hodnoty Normálny rozsah Panel 500 vzoriek od zjavne zdravých osôb (250 mužov a 250 žien) bol testovaný pomocou súpravy QUANTA LiteTM F-Actin IgA ELISA Kit. Vek bol medzi 18 a 80 rokmi (medián = 41). Špecifickosť testu bola 92,2% (461/500). Zistilo sa, že 3 z 39 vzoriek sú pozitívne na protilátky tTG-IgA, takže by mohlo ísť o nediagnostikovaných pacientov s celiakiou. Jedna z týchto troch vzoriek bola tiež pozitívna na endomýzium a je prakticky isté, že ide o celiakiu. Prevalencia celiakie u normálnej populácie v USA sa odhaduje na 1 zo 133; dôkazy o nediagnostikovaných pacientoch s celiakiou v normálnej skupine teda nie sú neočakávané

Klinická citlivosť a špecifickosť Pretože test QUANTA Lite ™ F-aktín IgA je určený na použitie na hodnotenie pravdepodobnosti poškodenia čreva u pacientov s celiakiou, citlivosť a špecificita sa stanovili na základe 445 vzoriek s výsledkami biopsie. Zo 445 vzoriek malo 157 patológiu typu 3 a 288 typu 0, 1 alebo 2 podľa Marsh. 27 N = 445 Marsh zárez F-aktínové IgA jednotky M3a/b/c M0, M1, M2 celkové množstvo Pos (> 24, 9 jednotiek) 76 14 90 Neg (24,9 jednotiek) 60 30 90 Neg (