Porovnávacie štúdie o dermálnej penetrácii a permeácii v difúznych bunkách - PDF

Z Ústavu farmakológie, toxikológie a farmácie na Veterinárnej univerzite v Hannoveri Porovnávacie štúdie o penetrácii a permeácii dermou v difúznych bunkách NESPRÁVNA DISZERTÁCIA Získanie titulu doktora veterinárneho lekárstva (Dr. med. Vet.) Na univerzite veterinárneho lekárstva v Hannoveri. Prezentuje Silke Riedel. (rodená Franzbachová) z Gronau Hannover 23

difúznych

Vedecký dozor: Univ.-Prof. DR. M. Kietzmann 1. recenzent: Univ.-Prof. DR. M. Kietzmann 2. recenzent: Univ.-Prof. DR. H.C. Deň ústnych vyšetrení na rakovinu: 27., 23. mája

Venované s vďačnosťou mojim rodičom a rodine

1 ÚVOD 1 2 PREHĽAD LITERATÚRY 2 2.1 Štruktúra a funkcia pokožky 2 2.1.1 Epidermis 2 2.1.2 Dermis 5 2.1.3 Hypodermis 7 2.1.4 Prílohy 7 2.1.5 Cievny systém kože 8 2.2 Transdermálna penetrácia, permeácia a absorpcia 9 2.2. 1 Bariérová funkcia kože 9 2.2.2 Penetrácia do pokožky a farmakokinetika topicky aplikovaných látok 12 2.2.3 Ovplyvnenie penetrácie 19 2.3 Modely skúmania transkutánnej penetrácie a permeácie 22 2.3.1 In vivo modely 22 2.3.2 In vitro modely 23 2.3.2.1 Difúzne bunky 23 2.3.2.2 Saarbrückenov penetračný model 26 2.3.2.3 Bunkové kultúry a umelá pokožka 29 2.3.2.4 Perfúzne modely 3 2.4 Kyselina benzoová, testosterón a hydrokortizón ako testované látky na transdermálnu penetráciu a permeáciu 32 3 MATERIÁLY A METÓDY 35 3.1 Použitý testovací materiál 37 3.2.1 Kyselina benzoová 37 3.2.2 Hydrokortizón 37 3.2.3 Testosterón 38 3.3 Difúzne bunky 38

3.4 Vykonanie experimentu 39 3.5 Detekcia testovaných látok 4 3.5.1 Enzýmová imunotest 4 3.5.2 Stanovenie kyseliny benzoovej pomocou vysokotlakovej kvapalinovej chromatografie (HPLC) 41 3.6 Štatistické vyhodnotenie 43 4 VÝSLEDKY 44 4.1 Prienik a permeácia kyseliny benzoovej 44 4.1.1 Koža potkana 44 4.1.2 Koža psa 45 4.1.3 Koža koňa 46 4.1.4 Koža ošípaných 46 4.1.5 Koža kravy 49 4.2 Penetrácia a permeácia hydrokortizónu 51 4.2.1 Koža potkana 51 4.2.2 Koža psa 52 4.2.3 Koža koňa 53 4.2.4 Koža ošípaných 54 4.2.5 Koža kravy 55 4.3 Prienik testosterónu a permeácia 57 4.3.1 Koža potkana 57 4.3.2 Koža psa 58 4.3.3 Koža koňa 59 4.3.4 Koža ošípaných 6 4.3.5 Koža hovädzieho dobytka 61 5 DISKUSIA 63 5.1 Porovnanie umiestnenia kože v rámci živočíšneho druhu 63 5.1.1 Prenikanie kyselinou benzoovou 63 5.1.2 Prienik hydrokortizónom 64

5.1.3 Prienik testosterónu 65 5.2 Porovnanie druhov zvierat na základe telesných oblastí 66 5.2.1 Priepustnosť kyseliny benzoovej 66 5.2.2 Prienik hydrokortizónu 69 5.2.3 Prienik testosterónu 7 5.3 Porovnanie testovaných látok Kyselina benzoová, testosterón a hydrokortizón 73 5.4 Záver 76 6 ZHRNUTIE 79 7 ZHRNUTIE 8 7 ZHRNUTIE 9 PRÍLOHOVÉ TABUĽKY 99

Zoznam skratiek A. Arteria Obr. Ilustrácia cm centimetre cm² štvorcových centimetrov ELISA enzýmovo viazaný imunosorbentný test g gramy C stupne Celzia h hodiny HPLC vysokoúčinná kvapalinová chromatografia i.v. intravenózne l liter ln logaritmus m samec mg miligramov min. minúta ml mililiter mm milimeter µg mikrogram µl mikroliter µm mikrometer n počet pokusov ng nanogramy pozri tabuľku strán V. Vena w žena

32 (BRONAUGH a kol. 1982b) Pes 12-45 (SCHWARZ a MEYER 1994) 1-45 (CREED 1958) Kôň 25-45 (MEYER 22) 3-9 (TALUKDAR a kol. 1972) Prasa 34-47 (m ) (MEYER 1986) 41-57 (w) 7-14 (MEYER a NEURAND 1975) dobytok

32 (MEYER 21) 4-6 (GOLDSBERRY a CALHOUN 1958) Rindereuter 5-8 (SEEGERS 23) 6-2 (LUDEWIG et al. 1996) Tab. 1: Hrúbka epidermis chlpatej kože u rôznych druhov (údaje v µm)

3 Na nasledujúcich obrázkoch (obr. 1-6) je histologicky znázornená epidermis (pokožka brucha) živočíšneho druhu skúmaného v tejto práci. 1 2 3 4 5 6 5 µm Obr. 1-6: Epiderma (pokožka brucha) potkana (1), psa (2), koňa (3), prasaťa (4), hovädzieho dobytka (5) a kože vemena (6)