Protokol o chronickej fibróze čriev vyvolaný infekciou salmonelou (preložený do nemčiny)
Zhrnutie
Tento protokol popisuje myší model črevnej fibrózy vyvolanej salmonelou, ktorý sa podobá hlavným patologickým znakom Crohnovej choroby, vrátane transmurálneho zápalu a fibrózy. Táto metóda sa môže použiť na hodnotenie hostiteľských faktorov, ktoré menia fibrotické výsledky u mutantných myší chovaných na genetickom pozadí c57Bl/6.
Abstrakt
Tkanivová fibróza, ktorá je charakterizovaná patologickým hromadením extracelulárnej matrix, ako je kolagén, je výsledkom pretrvávajúceho zápalu a dysregulovanej opravy. Pri zápalovom ochorení čriev (IBD) vedie fibróza k opakujúcim sa formáciám striktúr, pre ktoré neexistuje iná účinná terapia ako chirurgická resekcia. Kvôli neskorému nástupu sú procesy, ktoré vedú k fibróze, menej študované a do veľkej miery neznáme. Preto sú fibrotické komplikácie hlavnou výzvou pre IBD. Tento protokol popisuje robustný model črevnej fibrózy in vivo, pri ktorom predbežná liečba streptomycínom myší C57Bl/6 nasledovaná perorálnou sondou s dezinfekciou viď Fibróza slepého čreva. Vysvetľujú sa spôsoby prípravy S. Typhimurium-AroA na vakcináciu, kvantifikácia množstva patogénov v slepom čreve a slezine a hodnotenie ukladania kolagénu v črevných tkanivách. Tento experimentálny model choroby je užitočný na štúdium faktorov hostiteľa, ktoré buď zhoršujú alebo zhoršujú črevnú fibrózu podobnú CD.
Úvod
Vyžaduje sa predplatné. Odporučte prosím JoVE svojmu knihovníkovi.
Protokol
Všetky protokoly o zvieratách boli schválené Výborom pre starostlivosť o zvieratá University of British Columbia.
1. Príprava kultúr Salmonella Typhimurium AroA na orálnu sondu myší
2. Posúdenie kontaminácie salmonelami v tkanive
3. Farbenie červenou farbou Picrosirius a kvantifikácia kolagénu.
Vyžaduje sa predplatné. Odporučte prosím JoVE svojmu knihovníkovi.
Reprezentatívne výsledky
Liečba streptomycínom nasledovaná orálnou infekciou S. Typhimurium-AroA vedie k silnému črevnému zápalu a fibróze, najmä v slepom čreve (obrázok 1)). Z infikovaných zvierat sa dá získať typické množstvo ochorenia 108 až 109 CFU na 1 g slepého čreva a 104 CFU na 1 g sleziny (obrázok 2)). Vyhodnotenie fibrózy v cekálnych rezoch sfarbených červenou mikroskopiou ukazuje vrchol fibrózy 21 dní po infekcii, zatiaľ čo veľká časť patológie sa vyrieši do 42. dňa pi (obrázok 3) a Obrázok 4). Depozícia kolagénu je najvýraznejšia v submukóze čreva, zatiaľ čo fibróza je miernejšia v sliznici.
Na analýzu génovej expresie je možné použiť segment 1, ktorý predstavuje špičku Cecal, zatiaľ čo segment 2 je pre histológiu fixovaný v 10% pufrovanom formalíne a segment 3 je homogenizovaný pre stanovenie počtu baktérií.
CFM salmonely na hmotnosť tkaniva počas infekcie. Tento údaj zistili Lo et al. 26 zmenené. Kliknutím sem zobrazíte väčšiu verziu tohto obrázka.
Snímky svetelného poľa z Cece neinfikovaných zvierat a zvierat 21 a 42 dní po infekcii S. Typhimurium AroA. Stupnica, 200 m. Tento údaj bol prevzatý od Lo et al. 26 zmenené.
(A.) Farbenie PSR + sa normalizovalo v oblasti tkaniva. Dôležitosť určená jednostranným testom ANOVA Kruskal-Wallis s Dunnovým Post testom. **, P 0,05. Tento údaj zistili Lo et al. 26 zmenené. (B.) Príklad kvantifikácie kolagénu v cekálnom tkanive pomocou Fidži. Kliknutím sem zobrazíte väčšiu verziu tohto obrázka.
Vyžaduje sa predplatné. Odporučte prosím JoVE svojmu knihovníkovi.
Diskusia
Vyžaduje sa predplatné. Odporučte prosím JoVE svojmu knihovníkovi.
Zverejnenie
Autori nemusia zverejňovať žiadne finančné konflikty záujmov.