Vírusová RNA pre hepatitídu C (kvantitatívna) - Synevo

Všeobecné informácie a odporúčania

Vírus hepatitídy C (HCV), člen rodiny Flaviviridae, sa prenáša hlavne parenterálne, s vysokou frekvenciou infekcie HCV u pacientov s transplantáciami orgánov alebo krvnými transfúziami, u ľudí s nadmerným užívaním drog a u pacientov na dialýze obličiek 1; 2 .

Akútne infekcie sú zvyčajne mierne alebo asymptomatické, ale progresia do chronickej hepatitídy sa vyskytuje v 60-90% prípadov.

Charakterizácia genómu HCV a proteínov ním kódovaných umožnila vývoj oboch sérologických metód na stanovenie špecifických protilátok a molekulárnych testov na potvrdenie diagnózy a sledovanie liečby. Prítomnosť anti-HCV protilátok je iba indikátorom expozície HCV a nemožno ju považovať za marker súčasnej infekcie 1 .

Spomedzi biochemických markerov poškodenia pečene boli hladiny alanínaminotransferázy (ALT) považované za dôležitý prvok v rozhodnutí vykonať biopsiu pečene a/alebo zahájiť antivírusovú liečbu. Stupeň zvýšenia ALT však nemôže priamo korelovať s úrovňou infekcie HCV, pretože: u pacientov s chronickou hepatitídou C môže hladina ALT v sére spontánne kolísať, pričom sú možné dlhé obdobia biochemickej remisie; Hladiny ALT môžu ovplyvňovať ďalšie faktory, ako je konzumácia alkoholu, súvisiace lieky, prítomnosť iných vírusových infekcií, nealkoholická steatóza pečene; existuje kategória pacientov (odhaduje sa na 20 - 40% prípadov chronickej infekcie HCV), ktorí majú trvale normálnu alebo diskrétne zvýšenú hladinu ALT za podmienok kontinuálnej vírusovej replikácie 3 .

Na druhej strane detekcia amplifikáciou nukleovej kyseliny pomocou reťazovej polymerizačnej reakcie (PCR) poskytuje mieru vírusovej replikácie, ktorá je užitočná tak na diagnostiku aktívnej infekcie, ako aj na sledovanie liečby. Nové testy, ktoré kvantifikujú vírusovú záťaž pomocou technológie „real-time PCR“, majú vyššiu analytickú citlivosť a oveľa širší (merateľný) rozsah linearity v porovnaní s konvenčnou technológiou PCR 1; 2 .

Pokiaľ ide o diagnózu, pomocou metódy PCR je možné zistiť virémiu HCV pred séroimunologickou konverziou 2 .

Stanovenie virémie je tiež užitočné pri stanovení progresie ochorenia a hodnotení účinnosti antivírusovej liečby, a to tak pre klasický liečebný režim, ktorý zahrnuje kombináciu pegylovaného interferónového prípravku (PegINFα) s ribavirínom, ako aj pre novšie protokoly obsahujúce lieky s priamym antivírusovým účinkom 1 .

Odobratý exemplár - venózna krv 2 .

Zberová nádoba - vacutainer obsahujúci EDTA ako antikoagulant 2 .

Zozbierané množstvo - pokiaľ to umožňuje vákuum 2 .

Dôvody zamietnutia skúsiť - použitie heparínu ako antikoagulancia 2 .

Po zbere je potrebné spracovanie - plazmu oddeľte maximálne 1 deň od odberu centrifugáciou pri 800-1600 x g počas 20 minút pri izbovej teplote, potom preneste do polypropylénovej skúmavky (min. 2 ml plazma) 2 .

Stabilita vzorky - separovaná plazma sa môže uchovávať 72 hodín pri izbovej teplote, 7 dní pri 2 - 8 ° C alebo najmenej 6 týždňov zmrazená pri -80 ° C. Vzorky je možné zmraziť/rozmraziť až päťkrát bez straty HCV 2 RNA .

Metóda - PCR v reálnom čase (TaqMan): reťazová polymerizačná reakcia s detekciou nahromadeného produktu PCR v reálnom čase, meraním emitovanej fluorescencie.

Poznámka: spracovanie vzorky sa vykonáva automaticky 2 .

Referenčné hodnoty - nedetegovateľná HCV-RNA; detekčný limit metódy v rozsahu linearity je 15 IU/ml, čo je hodnota, ktorá sa zhoduje s analytickou citlivosťou. „Nedetekovateľný“ výsledok znamená, že ide buď o veľmi nízku virémiu (pod kvantifikačný limit), alebo o neprítomnú virémiu. Výsledok HCV RNA 2 .

Interpretácia výsledkov

Výsledky virémie sú vyjadrené numericky (IU/ml) a v logaritmickej forme (log IU/ml). Logaritmická expresia je užitočná na hodnotenie odpovede na liečbu. Zmena 1 logaritmu virémie od základnej hodnoty naznačuje 10-násobné zvýšenie alebo zníženie. Dosiahnutie pozitívneho výsledku naznačuje prítomnosť aktívnej infekcie .

Monitorovanie virémie pre klasický režim antivírusovej liečby

PegINFα v kombinácii s ribavirínom je indikovaný na liečbu chronickej hepatitídy typu C u dospelých pacientov s HCV-pozitívnou RNA, ako aj u pacientov s kompenzovanou cirhózou pečene po vírusovej infekcii C.

Cieľom antivírusovej liečby je trvalá virologická odpoveď (SVR) definované ako nedetegovateľná HCV-RNA 6 mesiacov po ukončení liečby.

Odpoveď na antivírusovú liečbu je ovplyvnená mnohými faktormi, buď virologickými (genotyp HVC, hladina bazálnej virémie) alebo súvisiacimi s hostiteľom (rasa, závažnosť ochorenia pečene, inzulínová rezistencia). Spolu s nimi existujú aj opraviteľné faktory, ktoré sa objavili počas počiatočnej liečby, ale do ktorých je možné zasiahnuť pri druhom pokuse o liečbu (vysoké zníženie dávky alebo dokonca prerušenie liečby z dôvodu hematologických vedľajších účinkov alebo depresie; nízka compliance). 4 .

V závislosti od toho, kedy došlo k vírusovému klírensu, môže virologická odpoveď spadať do jednej z nasledujúcich kategórií:

- rýchla virologická odpoveď (RVR): získanie nezistiteľnej HCV-RNA 4 týždne po začiatku liečby; pacienti sa považujú za „rýchlo reagujúcich“;

- včasná virologická odpoveď („Včasná virologická odpoveď“, EVR): definované nezistiteľnou virémiou 12 týždňov po začiatku liečby; pacienti sa považujú za „reagujúcich na štandardy“;

- pomalá virologická odpoveď („Pomalá virologická odpoveď“) alebo čiastočne skorá virologická odpoveď: definované poklesom virémie o ≥ 2 log10 oproti východiskovej hodnote 12 týždňov po začiatku liečby a získaním nedetegovateľnej HCV RNA v 24. týždni; pacienti sa považujú za „pomaly reagujúcich“ 3; 4 .

Na druhej strane so zlyhaním antivírusovej liečby súvisia nasledujúce kategórie:

- nevirologická odpoveď: definované poklesom virémie o 4 .

Trvanie kombinovanej liečby závisí od vírusového genotypu. Podľa štandardných programov antivírusovej liečby majú byť pacienti infikovaní HCV genotypu 1 alebo genotypu 4 liečení po dobu 48 týždňov bez ohľadu na východiskovú virémiu. Nadnárodné klinické štúdie preukázali, že u pacientov infikovaných genotypmi 2 alebo 3 sa môže trvanie kombinovanej liečby znížiť na 24 týždňov bez zníženia účinnosti (miera trvalej virologickej odpovede je 84%) 5 .

Údaje zo štúdie INDIV-2 naznačujú možnosť zahájenia individualizovanej terapie riadenej virologickou odpoveďou u pacientov s genotypom 1/4 nasledovne:

Monitorovanie virémie pre protokoly, ktoré zahŕňajú priamo pôsobiace antivirotiká (liečba bez interferónu)

Virémia sa stanoví pred začiatkom liečby, voliteľne po 2 - 4 týždňoch, na konci liečby (po 8, 12, 16 alebo 24 týždňoch, v závislosti od terapeutického režimu) a po 12 alebo 24 týždňoch po ukončení liečby 7 .

Heparín inhibuje PCR, preto by sa nemal používať ako antikoagulant 2 .