Z detskej kliniky a detskej ambulancie u Dr.

Z detskej kliniky a detskej ambulancie u Dr. von Haunersche Detská nemocnica Univerzity Ludwiga Maximiliána v Mníchove Riaditeľ: profesor Dr. med. DR. h.c. D. Reinhardt Porovnanie štyroch ELISA pre IgA protilátky proti ľudskej tkanivovej transglutamináze a IgA a IgG anti-gliadínové protilátky a validácia komerčného testu na detekciu sekrečných IgA protilátok proti ľudskej tkanivovej transglutamináze a gliadínu v stolici Dizertačná práca na získanie doktorského titulu v odbore lekárstvo na lekárskej fakulte Univerzity Ludwiga Maximiliána v Mníchove Predniesla Veronika Diehl z Mníchova 2009

kliniky

So súhlasom Lekárskej fakulty Mníchovskej univerzity Reportér: Prof. Dr. S. Koletzko Spoluspravodajca: Priv. Doz. Dorit Nägler prof. Dr. R. Zachoval prof. Dr. DR. h.c. Dietrich Seidel Spoločný dozor PhD zamestnanca: Dr. Dekan M. Kappler: prof. Dr. med. DR. h.c. M. Reiser, FACR, FRCR Deň ústnej skúšky: 12.03.2009

1 Obsah 1. Úvod. 4 1.1 Základy celiakie. 4 1.1.1. Definícia. 4 1.1.2. Prevalencia celiakie. 4 1.1.3. Klinický obraz. 4 1.1.4. Rizikové skupiny. 5 1.2. História celiakie. 6 1.2.1. Pomenovanie. 6 1.2.2. Etiológia a terapia. 6 1.2.3. Patofyziológia a diagnostika. 7 2. Cieľ práce. 10 3. Materiál a metódy. 11 3.1. Študovať dizajn. 11 3.1.1. Sérológia. 11 3.1.2. Stolička. 12 3.2. Štatistické vyhodnotenie. 12 3.2.1. Štatistické základy. 13 3.2.2. Korelácia dvojitých meraní. 14 3.3. Kolektív pacientov. 14 3.3.1. Sérológia. 14 3.3.2. Stolička. 14 3.4. Vzorkovanie. 14 3.4.1. Biopsia. 14 3.4.2. Sérológia. 15 3.4.3. Stolička. 15 3.5. Histológia. 15 3.6. Vykonanie skúšky. 16 3.6.1. všeobecné testovacie zásady vyšetrovaní. 16 3.6.2. Materiál. 17 3.7. Opis sérologických testov. 19 3.7.1. Test podľa záväznej stránky. 3.7.2 Biomedicínsky test. 21 3.7.3 Test Eurospital. 23

2 3.7.4. Test na farmáciu. 25 3.8. Test stoličky spoločnosťou Immundiagnostik. 26 4. Výsledky. 27 4.1. Stanovenie protilátok v sére. 27 4.1.1. Skupina pacientov. 27 4.1.2. Kritériá pre zaradenie. 29 4.1.3. Vekové rozdelenie. 30 4.1.4. Nálezy histologického vyšetrenia. 30 4.1.5. Výsledky testov. 31 4.1.6. Porovnanie výsledkov skúšky. 38 4.2. Stanovenie protilátok v stolici. 45 4.2.1. Skupina pacientov. 45 4.2.2. Vekové rozdelenie. 46 4.2.3. Výsledok testu. 4.2.3.1. Výsledky retrospektívnej štúdie. 4.2.3.2. Výsledky výhľadovej štúdie. 50 5. Diskusia. 53 5.1. Sérológia. 5.1.1. Skupina pacientov. 53 5.1.2. Vekové rozdelenie. 5.1.3. Nedostatok IgA. 5.1.4. Metodické problémy pri vykonávaní skúšky. 58 5.1.5. Výsledky. 5.1.6. Diskusia o jednotlivých výrobcoch. 61 5.1.7. Variabilita v rámci testu. 66 5.1.8. Variabilita medzi testami. 67 5.2. Stolička. 68 5.2.1 Skupina pacientov. 68 5.2.2. Odber a spracovanie vzoriek. 68 5.2.3. Výsledky. 69 6. Záver. 71 6.1. Sérológia. 71 6.2. Vyšetrenie stolice. 71 7. Zhrnutie. 72

3 7.1. Úvod. 72 7.2. Metódy. 72 7.3. Výsledky. 73 7.3.1. Sérologické výsledky. 73 7.3.2. Výsledky vyšetrenia stolice. 73 7.4. Závery. 73 8. Príloha. 75 8.1. Bibliografia. 75 8.2. Zoznam skratiek. 89 8.3. Deň vďakyvzdania. 90 8.4. Pokračovať. 91

18 Sada Bindazyme Human Anti Gliadin IgA EIA, The Binding Site, Birmingham, England Sada Bindazyme Human Anti Gliadin IgG EIA Kit, The Binding Site, Birmingham, England Bindazyme Human Anti Tissue Transglutaminase EIA Kit, The Binding Site, Birmingham, England Monkey Sada Esophagus IFA, The Binding Site, Birmingham, Anglicko Automatická premývačka mikrotitračných doštičiek Čítačka mikrotitračných doštičiek (405 a 450 nm), fluorescenčný mikroskop s excitačným filtrom 495 nm a bariérovým filtrom 515 nm Presné pipety 10 ul, 50 ul, 100 ul, 1000 ul 3.6.2.2. Vyšetrenie stolice httg siga ELISA, spoločnosť Immundiagnostik AG, Bensheim, Nemecko Gliadin siga ELISA, spoločnosť Immundiagnostik AG, Bensheim, Nemecko Vortexový mixér Mikrotitračná čítačka doštičiek s filtrom 450 nm Mikrotitračná doštička Centrifuga, 3000-krát g Presné pipety s premenlivým objemom 10 - 1 000 µl štandardných sklenených alebo plastových skúmaviek.

21 Výsledok a limitná hodnota Tab. 3: Limitné hodnoty EMA, ktoré sme použili ako súčasť hodnotenia výsledku (na základe limitných hodnôt použitých v iných štúdiách) EMA negatívny 15 - 15 - 15 - 40 U/ml Tab. 6: Špecifikované výrobcom (Biomed) Limitná hodnota pre endomýzium IgA Endomýzium IgA negatívna šedá oblasť pozitívna 25 U/ml> 25 - 4U/ml Tabuľka 8: Limitná hodnota pre gliadín IgA negatívna šedá oblasť pozitívna IgA gliadín 1,5 U/ml tabuľka 9: Od výrobcu (Eurospital) stanovená hraničná hodnota pre 100g/ml negatívnej IgG transglutaminázy IgA negatívnej pozitivity bola zriedená v pomere 1: 1001 vzorkovým pufrom (dva kroky riedenia) a znova meraná. Výsledok a limitná hodnota Tabuľka 10: Limitná hodnota pre gliadín IgA/IgG a transglutaminázu uvedená výrobcom (Pharmacia) Gliadín IgA Gliadín IgG transglutamináza negatívna 17 U/ml> 17 U/ml> 8 U/ml Tu uvedené pre vyhodnotenie meraní ttg Normálne hodnoty boli stanovené na základe klinickej štúdie A. Bürgin-Wolffa a F. Hadziselimoviča, Laboratórium pre diagnostiku celiakie, CH-4410 Liestal, Švajčiarsko.