Z Ústavu výživových vied - PDF na stiahnutie zadarmo

Z Inštitútu pre výživové vedy Účinky nadmerného príjmu vitamínu E na antioxidačný stav a citlivosť hemolýzy erytrocytov s rôznymi tukmi na strave na potkaních zvieratách Poľnohospodárska fakulta Univerzity Martina Luthera v Halle-Wittenberg (dekan: prof. Dr. habil. W. Merbach) ako dizertačnú prácu na získanie akademického titulu doktor vied o výžive (Dr. troph.), Ktorú predniesla diplomová tropologická lekárka narodená 7. marca 1976 Diana Flader v Nordhausene Recenzent: prof. Dr. Merbach habil. K. Eder PD Dr. habil. M. Brandsch prof. Dr. habil. Obrana G. Flachowského dňa: 9/12/2002 Halle/Saale 2002 urna: nbn: de: gbv: 3-000004327 [http://nbn-resolving.de/urn/resolver.pl?urn=nbn%3ade%3agbv%3a3 -000004327]

ústavu

Zoznam tabuliek a obrázkov VII. Tabuľka 32 Zloženie mastných kyselín pečeňovej fosfatidylcholínovej frakcie 60 v prvom experimente Tab. 33 Zloženie mastných kyselín membrány erytrocytov 62 Obrázok č. Titulná strana Obrázok 1 Kinetika oxidácie lipoproteínov s nízkou hustotou pri 234 nm 19

Zoznam tabuliek a obrázkov VIII Zoznam skratiek AIN aqua dest. ß-HMG-Co A reduktáza BSA BSTFA Cu-Zn-SOD DGE DNA δ E EC EC-SOD EDTA FAME FID GC-MS GSH GSH-Px GSSG G-6-P-DH Hb Hb-Hp komplex Hp HDL HPLC IE KGW LDL Americký inštitút výživy destilovaná voda ß-3-hydroxy-3-metylglutary-koenzým A-reduktáza hovädzí sérový albumín bis (trimetylsilyl) trifluóracetamid superoxid dismutáza obsahujúca meď a zinok Nemecká spoločnosť pre výživu zmena hustoty plazmy deoxyribonukleovej kyseliny pri extinkcii (názvoslovie enzýmov) nomenklatúra) extracelulárnej superoxiddismutáza etyléndiaminotetraoctová kyselina, mastné kyseliny (mastných kyselín, metylesterov) plameňovo ionizačný detektor plynová chromatografia s hmotnostnou spektrometriou glutatión glutatión peroxidáza oxidovaný glutatión glukóza-6-fosfátdehydrogenázy lipograde vysoký výkon hemoglobín s vysokou hustotou kvapaliny lipoglobin-highapy lipograde (vysoko výkonný lipo-phrotography) vysoko výkonná kvapalinová lipoglobin-vysoko výkonná hemoglobín, lipoglobin-high-performance lipoglobin, vysoko výkonný, vysoko výkonný, lipoglobin-lipograde Jednotky (1 IU vitamínu E = 1 mg DL-α-tokoferyl etat = 0,67 mg RRR-α-tokoferol) lipoproteínov s nízkou hustotou telesnej hmotnosti

Zoznam tabuliek a obrázkov IX LDH MetHb meqo 2 MDA Mn-SOD mrna MUFA n-6 mastné kyseliny n-3 mastné kyseliny NaCl NAD + NADH + NADPH NADPH oxidáza NADP + p PBS PC PE PH-GSH-Px POZ P/S PUFA SFA SIM SOD TBARS TBA TEP TMB UV s laktátdehydrogenázy metamoglobínu miliekvivalentoch aktívneho kyslíka malondialdehydu obsahujúce mangán, dismutáza superoxidu Messenger ribonukleovej kyseliny mononenasýtené mastné kyseliny (mononenasýtené mastné kyseliny), omega-6 mastných kyselín omega-6-mastná kyselina-nikotínamid-redukovaný nikotín-dinotamide-dinukleotid-nikotín-dinukleotid-dinukleotid-nikotínamidu-adenidic kyselina-dinukleotid riešenie omega-3-oxidovaný-nikotín-dinukleotid-dinukleotid redukovaný nikotínamid-adenín-dinukleotid-fosfát nikotínamid-adenín-dinukleotid-fosfát oxidovaný nikotínamid-adenín-dinukleotid-fosfát Významná hladina fosfátom pufrovaného soľného roztoku (fosforečnanom pufrovaného soľného roztoku) fosfatidíno-fosfát-peroxidáza-peroxidáza ) polynenasýtené Mastné kyseliny (polynenasýtené mastné kyseliny) Nasýtené mastné kyseliny (nasýtené mastné kyseliny) Vybrané sledovanie iontov Superoxid Dismutáza Kyselina tiobarbiturová Reaktívne látky Kyselina tiobarbiturová 1,1,3,3-tetraetoxypropán 3-, 3`-, 5-, 5`-tetrametylbenzidín Jednotka zdanlivá stráviteľnosť

Zoznam tabuliek a obrázkov X VLDL 7-ß-OH-Cholesterol Lipoproteíny Lipoproteíny s veľmi nízkou hustotou 7-B-Hydroxycholesterol

Úvod 3 Je potrebné preskúmať peroxidáciu lipidov, aby bolo možné preukázať možné prooxidačné účinky nadmerného príjmu vitamínu E in vivo. Pretože erytrocyty sú veľmi citlivé na oxidačný stres, mal by sa preskúmať aj vplyv nadmerného príjmu vitamínu E na hemolytickú citlivosť erytrocytov. Pretože tuk v strave má tiež vplyv na oxidačné procesy, boli vybrané dva rôzne tuky v strave. Možné prooxidačné účinky doplnkov s vysokým obsahom vitamínu E by zvýšil tuk z potravy s vysokým obsahom PUFA. Lososový olej bol preto zvolený ako diétny tuk, pretože lososový olej má vysoký podiel vysoko nenasýtených omega-3 (n-3) pufov, ktoré sú veľmi citlivé na oxidáciu (MALIS et al. 1990, ZSIGMOND et al. 1990, SAITO a NAKATSUGAWA 1994, CHIANG. a TSAI 1995, VALK a HORNSTRA 2000). Ďalej sa bravčová masť používala ako tuk s vysokým obsahom nasýtených mastných kyselín (SFA) a nízkym obsahom n-3 PUFA. Pri použití bravčovej masti sa dalo očakávať menej oxidačných procesov ako pri použití lososového oleja.

Materiál a metódy 7 Tabuľka 4: Obsah celulózy a vitamínu E v použitých diétach Diétna skupina L/S 100 L/S 500 L/S 1000 L/S 3 000 L/S10 000 Celulóza 49,9 49,5 49 47 40 [g/kg diéta] Vitamín E 1 [g/kg diéta] 0,1 0,5 1 3 10 1 Bol pridaný vitamín E. ako DL-α-tokoferylacetát. Zloženie minerálnych a vitamínových doplnkov je uvedené v tabuľkách 5 a 6, v uvedenom poradí. odkazujú na. Tabuľka 5: Zloženie minerálnych doplnkov Zložka Koncentrácia Množstvo prvkov [g/kg stravy] Uhličitan vápenatý (36% vápnik) 8,44 Fosforečnan vápenatý (17,5% fosfát, 22% vápnik) 8,92 Chlorid draselný (52,4% draslík, 47, 2% chlorid) 6,87 oxid horečnatý (50% horčík) 1,014 uhličitan sodný (27% sodík) 3,774 stopových prvkov [mg/kg stravy] síran železnatý (30% železo) 116 oxid zinočnatý (79% zinok) 38 oxid mangánu (62% mangánu) 16 síran meďnatý (25% meď) 24 Jodičnan vápenatý (62% jód) 0,32 Selén sodný (45% selén) 0,33 Tab. 6: Zloženie doplnku vitamínov, zložka vitamín A (5 000 IU/g), vitamín D 3 (5 000 IU/g) vitamín K (510 mg/g) tiamín (1 000 mg/g) riboflavín (800 mg/g) pyridoxín (1 000 mg/g) biotín (20 mg/g) kyselina pantoténová (1 000 mg/g) kyselina nikotínová (990 mg/g) vitamín B 12 (1 000 µg/g) kyselina listová (1 000 mg/g) cholínchlorid IU: medzinárodná koncentrácia jednotiek [na kg stravy] 4 000 IU 1 000 IU 0,75 mg 5 mg 6 mg 6 mg 0,2 mg 15 mg 30 mg 0, 25 mg 2 mg 1000 mg

Materiál a metódy 19 1.200 maximálna koncentrácia konjugovaných diénov 1.100 1.000 0,900 vyhynutie 0,800 0,700 0,600 0,500 0,400 Lag-Time 0,300 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 500 čas za minútu Obr. 1: Kinetika oxidácie lipoproteínov nízkej hustoty pri 234 nm 2.3.6 Stanovenie markerov peroxidácie lipidov 2.3.6.1 Koncentrácia látok reaktívnych s kyselinou tiobarbiturovou Detekcia produktu malondialdehydu (MDA) alebo TBARS sekundárneho produktu peroxidácie lipidov sa uskutočňovala jednou metódou upravené od CONTI et al. (1991). Princíp testu TBA je založený na komplexnej tvorbe dvoch molekúl kyseliny tiobarbiturovej (TBA) s jednou molekulou MDA za tepla pri kyslej hodnote pH (HALLIWELL a GUTTERIDGE 1988). Tento komplex MDA-TBA absorbuje svetlo pri 542 nm. Táto tvorba komplexu však nie je pre MDA špecifická, pretože s TBA môžu reagovať aj iné aldehydy, cukry a žlčové pigmenty (HALLIWELL a GUTTERIDGE 1988). 750 ul TBA činidla sa pipetovalo do 100 ul vzorky alebo štandardu. Nasledovala inkubácia pri 95 ° C počas 60 minút. TBARS sa potom extrahovali 3 ml n-butanolu a stanovili sa spektrofotometricky (Ultrospec 2000) pri 542 nm.