Adhézia buniek - ľudia - výživa - prostredie
Princíp modelu toku
Nábor a aktivácia týchto leukocytov je viacstupňový proces vrátane valcovania,
(A) Príprava HUVEC získaného z pupočníkových žíl; (B) prietoková komora a perfúzny systém, ako aj (C) videodokumentácia adherentných buniek pomocou prietokového modelu. zahŕňa pevnú adhéziu leukocytov k endotelu, transendotelovú diapedézu a chemotakticky riadenú migráciu do miesta zápalu.
Endoteliálne a leukocytové adhézne molekuly rodiny selektínov a integrínov (napr. E-, P- alebo L-selektín a LFA-1 (CD11a/CD18), VCAM, ICAM) sú nevyhnutné pre extravazáciu neutrofilov počas zápalových procesov, pretože sprostredkujú vyššie uvedené procesy adhézie buniek.
Ako súčasť modelu in vitro na skúmanie adhézie a valcovania sa endoteliálne bunky (bunky HUVEC) najskôr kultivujú na mikroskopických podložných sklíčkach. Po dosiahnutí sútoku sa bunky umiestnia do prietokovej komory a leukocyty sa prechádzajú cez endotelové bunky pomocou perfúznej pumpy, pomocou ktorej je možné vypočítať a upraviť intravaskulárne strihové sily.
Obrázok vľavo hore.
Princíp statického modelu
Ako súčasť modelu in vitro na skúmanie adhézie sa endoteliálne bunky (bunky HUVEC) najskôr kultivujú na viacjamkových doštičkách ako v prietokovom modeli. Po dosiahnutí sútoku sú bunky stimulované príslušnými aktivátormi a inkubované s predtým zafarbenými mononukleárnymi bunkami (T lymfocyty) a potom je fluorimetricky meraná intenzita zafarbenia, ktorá je úmerná adherujúcim bunkám.
Farbivo kalceín-AM sa používa na farbenie mononukleárnych buniek. Toto nefluorescenčné farbivo preniká do bunkovej membrány a je intracelulárne štiepené nešpecifickými esterázami a vzniká fluorogénny nepriepustný kalceín. Kalceín, tiež známy pod menom Fluorexon, je derivát fluoresceínu a má svoje excitačné maximum pri 495 nm (excitácia) a svoje emisné maximum (emisiu) pri 515 nm, a preto ho možno kvantitatívne zaznamenať v čítačke Fluoroscan.
Skúšobné hodnotenie
Pomocou videom podporovanej dokumentácie sa obrazové série vyhodnocujú v rámci prietokového modelu a zaznamenáva sa pripojenie mononukleárnych buniek na obrazovú jednotku.
Obrázok vpravo hore.
Náklady na model toku
Približne 100 EUR na 4-jamkové multiplate
Náklady na statický model
Ukážka aplikácie
Vplyv mliečnych oligosacharidov na adhéziu leukocytov k ľudským endotelovým bunkám (Bode a kol. 2004a, b a Reiss a kol. 2004)