Aktivita faktora Willebrand-antigén - Synevo
Všeobecné informácie
Polčas rozpadu plazmy FvW je
8-12 hodín. Približne 15% cirkulujúcich FvW sa nachádza v kompartmente krvných doštičiek, čo je úplne odvodené z intramedulárnej syntézy, ale pre hemostázu sú potrebné obidve frakcie FvW. Endotelové bunky vylučujú multiméry väčšie ako tie, ktoré cirkulujú v plazme; sú degradované špecifickou metaloproteázou, ADAMTS13, čo vedie k zmenšeniu veľkosti najväčších multimérov. Znížená aktivita ADAMTS13, vrodená alebo získaná inhibítormi, hrá ústrednú úlohu v patofyziológii trombotickej trombocytopenickej purpury 3; 4 .
FvW má väzbové miesta pre FVIII, heparín, kolagén, krvné doštičky glykoproteínov GPIb a GPIIb-IIIa, ktoré majú pri hemostáze viac funkcií. FvW stabilizuje FVIII tak, že ho chráni pred inaktiváciou aktivovaným PC, čím predlžuje jeho polčas v obehu a efektívne ho lokalizuje v mieste vaskulárneho poškodenia 1; 2; 4. Každý monomér FvW má väzbové miesto pre FVIII, avšak in vivo je FVIII obsadených iba 1 - 2% monomérov, čo vysvetľuje, že prítomnosť veľmi veľkých multimérov nie je pre funkciu nosiča FVIII nevyhnutná. Zmena v plazme FvW je však spojená so zhodnými zmenami v plazmatickej koncentrácii FVIII 2 .
FvW je štruktúrny proteín a súčasť subendoteliálnej matrice. Hrá tiež dôležitú úlohu pri pripájaní krvných doštičiek k subendoteliálnym povrchom, najmä pri miernych až veľkých šmykových silách (funkcia čiastočne skúmaná in vivo meraním času krvácania), funguje ako mostík medzi krvnými doštičkami a podporuje agregáciu krvných doštičiek. Kotvenie krvných doštičiek spočiatku nastáva v mieste vaskulárneho poškodenia prostredníctvom interakcie FvW s GPIb, po ktorej nasleduje aktivácia doštičiek a expozícia GPIIb-IIIa, ktorý sa viaže na fibrinogén, FvW a ďalšie ligandy 1; 4. Obidve väzbové aktivity FvW sú maximálne v multiméroch s vysokou molekulovou hmotnosťou. Interakciu medzi GPIb a FvW je možné skúmať in vitro pridaním antibiotika ristocetín 2 .
Názvoslovie odporúčané Medzinárodnou spoločnosťou pre hemostázu a trombózu pre komplex FVIII-FvW je 2:
Aktivita kofaktora ristocetínu
Aktivita viazania kolagénu
FVIII väzbová kapacita
Abnormality funkcie FvW spôsobujú von Willebrandovu chorobu (vWD), najbežnejšie dedičné hemoragické ochorenie, s prevalenciou približne 1% v bežnej populácii, ale s klinicky významnou prevalenciou ochorenia 1: 1 000 4. Tento stav je charakterizovaný kožno-slizničným krvácaním, autozomálnym dominantným prenosom a predĺženým časom krvácania. Toto ochorenie nie je homogénne, na jednej strane z dôvodu viacerých fyziologických funkcií, ktoré FvW zohráva, a na druhej strane s preukázaním rôznych genetických modelov. Približne 60% zmien plazmatických hladín FvW sa pripisuje genetickým faktorom. Jednotlivci s krvnou skupinou 0 majú teda hladiny FvW v priemere o 30% nižšie ako jedinci s inými krvnými skupinami. Okrem toho je hladina FvW pod hormonálnou kontrolou; ovplyvňujú ju aj ďalšie faktory, ktoré komplikujú expresiu choroby. Boli zaznamenané variácie až do 20% pri menštruačnom cykle, pričom najnižšie hladiny boli zaznamenané vo včasnej folikulárnej fáze. Úroveň sa tiež zvyšuje s
15% za každú dekádu starnutia 3. Aktuálna klasifikácia vWD identifikuje dve hlavné kategórie 2; 3; 4:
Boli hlásené ďalšie podtypy, vrátane typu doštičiek (pseudo-vWD), ktoré sú výsledkom mutácií v doštičkách GPIb. Existujú tiež veľmi zriedkavé získané formy vWD spojené s prítomnosťou autoprotilátok v spojení s autoimunitnými ochoreniami, klonálnou proliferáciou, hypotyreózou 4; 6; 7 .
Odporúčania na testovanie - diagnostika nedostatku/abnormality FvW, subtypizácie vWD a diferenciácie od hemofílie A (spolu so stanovením aktivity FVIII); sledovanie terapeutickej účinnosti liečby desmopresínom alebo koncentrátom FvW (FvW: RCo) 7 .
Výcvik pacientov - na prázdny žalúdok (na prázdny žalúdok) 5. Je potrebné sa vyhnúť liečbe perorálnymi antikoagulanciami 2 týždne pred a heparínom dva dni pred testovaním; nebudú odobraté z heparinizovaného katétra 6. Testy by sa mali robiť na diaľku od transfúzií, substitučnej liečby FvW, podávania desmopresínu 7 .
Odobratý exemplár - venózna krv 5 .
Zberová nádoba - vacutainer s 0,105 M citrátom sodným (citrát sodný - krvný pomer = 1/9). Tlak vyvíjaný turniketom musí byť medzi hodnotou systolického tlaku a hodnotou diastolického tlaku a nesmie presiahnuť 1 minútu. Ak zlyhala venózna punkcia, nový pokus o rovnakú žilu je možné vykonať až po 10 minútach .
Zozbierané množstvo - 2 vysávače sa zozbierajú, pokiaľ to vákuum umožňuje; aby sa zabránilo čiastočnej koagulácii vzorky, zabezpečí sa správne zmiešanie krvi s antikoagulantom inverznými pohybmi trubice 5. .
Po zbere potrebné spracovanie - vzorka sa centrifuguje po dobu 15 minút pri 2 500 g, okamžite nasleduje plazmová separácia a zmrazenie; vzorky odobraté mimo laboratória sa prepravia do nádoby určenej na zmrazené vzorky 5 .
Príčiny odmietnutia dôkazov - vacutainer, ktorý nie je plný; hemolyzovaná alebo zrážaná vzorka krvi; plazma, ktorá nebola zmrazená v laboratóriu 5 .
Stabilita vzorky - oddelená plazma je stabilná 4 týždne pri - 20 ° C 5 .
FvW: Ag - imunoturbidimetrický: meria hladinu FvW nezávisle od zloženia plazmových multimérov (latexové častice obalené špecifickými anti-FvW polyklonálnymi protilátkami aglutinujú v prítomnosti antigénu FvW a zvyšujú optickú hustotu, priamo úmernú koncentrácii FvW v testovanej plazme). .
FvW: RCo - plazma pacienta sa zmieša s krvnými doštičkami fixovanými vo formalíne za prítomnosti ristocetínu a rozsah agregácie krvných doštičiek sa zistí fotoopticky a je úmerný plazmatickej aktivite FvW 6. .
Referenčné hodnoty 5
- Antigén:
| 15 dní - 1 mesiac | 46 - 220% |
| 1–5 mesiacov | 36 - 217% |
| 5 -11 mesiacov | 48 - 199% |
| 11 mesiacov - 5 rokov | 41 -186% |
| 5 - 10 rokov | 45 - 145% |
| 10 -17 rokov | 56 - 123% |
| > 17 rokov - Ľudia s krvnou skupinou O | 42-141% |
| > 17 rokov - Ľudia s krvnou skupinou A, B alebo AB | 66-176% |
2. AKTIVITA:
| Ľudia s krvnou skupinou O | 40 - 125% |
| Ľudia s krvnou skupinou A, B alebo AB | 49-163% |
Interpretácia výsledkov
vWD by sa mal brať do úvahy pri diferenciálnej diagnostike každého pacienta s osobnou a rodinnou anamnézou krvácania, ktorý má normálnu PT a aPTT. aPTT sa môže predĺžiť v ťažkých formách vWD s nízkymi hladinami FVIII 6. Počet krvných doštičiek je tiež zvyčajne normálny, ale u pacientov s typom 2B sa môže vyskytnúť trombocytopénia. Čas krvácania sa zvyčajne predlžuje, ale pri ľahkých formách vWD môže byť normálny.
V tabuľke sú uvedené modifikácie dvoch špecifických testov na FvW spolu s aktivitou FVIII v rôznych druhoch vWD 2; 6; 7.