Identifikácia dermatofytov - hmotnostná spektrometria (systém MALDI-TOF) Bioclinic

Prehľad

Dermatofyty alebo huby dermatofytov sú vláknité mikromycety keratofily taxonomicky klasifikované v poradí Onygenales, čeľaď Arthrodermataceae a sú potenciálnymi patogénmi ľudí a zvierat. Z morfologického hľadiska je charakteristická prítomnosť dvoch druhov konídií: mikrokonídií (s jednou bunkou) a makrokonídií (s niekoľkými bunkami, ktoré sa tiež nazývajú lóže).

Ich nedokonalé (nepohlavné) štádiá, tiež nazývané anamorfné formy, sú zoskupené do troch rodov - Epidermophyton, Microsporum a Trichophyton, zatiaľ čo dokonalé (sexuálne) štádiá známe ako teleomorfné formy sú obsiahnuté v rode Arthroderma.

Ekológia

V prírodných podmienkach majú dermatofyty schopnosť štiepiť keratín. Táto metabolická schopnosť im umožňuje prežiť v prostredí a niekedy aj pri produkcii povrchových chorôb na koži, vlasoch alebo nechtoch - u ľudí a zvierat.

V závislosti od typu keratínu, ktorý sa preferuje, patria druhy dermatofytov do troch kategórií:

Geofilovia používajú devitalizovaný keratín zo šupinatých buniek, vlasov a iných fragmentov dýh prítomných v prostredí, najmä v pôde. Choroby sa môžu zriedka vyskytnúť u ľudí a zvierat; prenos medzi jednotlivcami je takmer nulový.
Zoofily majú tropizmus pre keratín v pokožke a srsti zvierat. Ovplyvňuje hlavne zvieratá, aj keď niektoré sa dajú preniesť na človeka veľmi ľahko. Interpersonálny prenos, aj keď je možný, je extrémne nízky.
Antropofily hlavne parazitujú na ľudskom keratíne. Spôsobujú choroby ľudí, niekedy sa vyznačujú vysokým stupňom nákazy.

Geofilné druhy Zoofilné druhy Antropofilné druhy

M. cookei	M. canis	E. floccosum
M. gypseum	M. gallinae	M. audouinii
M. praecox	M. nanum	M. ferrugineum
T. ajelloi	M. persicolor	T. koncentricum
T. terrestre	T. erinacei	T. menthagrophytes var. interdigitálne
T. vanbruseghemii	T. menthagrophytes var. menatgrofyty	T. rubrum
T. simii	T. schoenleinii
T. tonsurans
T. violaceum
T. soudanense

Epidemiologické znaky

Zdroje kontaminácie a spôsob prenosu sú obzvlášť dôležitými epidemiologickými znakmi v procese identifikácie dotknutých druhov; napríklad kontakt s malými divými cicavcami alebo domácimi zvieratami môže byť príčinou stiahnutia dermatofytov produkovaných nosnými zoofilnými druhmi. Na druhej strane interpersonálny kontakt alebo vykonávanie určitých športových aktivít môžu predisponovať k výskytu infekcií prevažne antropofilnými druhmi dermatofytov.

Prevalencia dermatofytickej infekcie u bežnej populácie je 10 - 20%.

Špecifikácia niektorých anamnetických údajov epidemiologického charakteru lekárom v referenciách určených pre laboratórneho lekára je nielen odporúčaná, ale aj povinná, pretože zaisťuje vysoký stupeň presnosti identifikácie druhov dermatofytov.

Klinické aspekty

Dermatofyty ľahko napádajú epidermis a fazety - zrohovatené anatomické štruktúry
Lokálna zápalová reakcia je rôzneho stupňa intenzity, v závislosti od zapojeného dermatofytu a imunitného stavu infikovaného hostiteľa.
Výnimočne môže poškodenie tkaniva prechádzať do hlbších štruktúr; je prípad dermatofytickej choroby (Hadida-Schousboëova choroba) a mycetómov spôsobených niektorými dermatofytmi.

Klasifikácia klinických aspektov - povrchové dermatofyty

Epidermofiţii

Obrezaná epidermofytia (okrúhly „herpes“), najbežnejšia forma tinea corporis
Inguinálne intertrigo (tinea cruris)
Intertrigo interdigito-plantar (najbežnejší prejav tinea pedis)
Lézie plantárnej hyperkeratózy („vzhľad mokasínu“)
folikulitída
Tokelau (vnorená tinea)
Iné epidemofyty (kombinácie erytém-vezikul-erozívna-kôra)

Pilomicoze

Tinea capitis (choroby spojené s mikrosporickými a trichofytickými strihmi, kerion, favus)
Tinea tváre (sykóza)

Onychomykóza (tinea unguium)

Distálna subungválna onychomykóza
Proximálna subungválna onychomykóza
Povrchová leukémia
Celková onychodystrofia

Micellanea

Dermatofytické ochorenie

Dermatofytický mycetóm

ŽATA

laboratórny lekár musí byť informovaný o mnohých dôležitých aspektoch, ktoré sú obzvlášť užitočné pri diagnostike: typ lézie, povolanie pacienta (ak existuje podozrenie na súvislosť s ochorením), akékoľvek domáce zvieratá, s ktorými prišiel do styku, cesty pacienta do zahraničia, vstup v kontakte s ľuďmi z endemických oblastí pre určité dermatofyty, s častými bazénmi, telocvičňami, fitnes klubmi alebo salónmi krásy v období pred výskytom lézií.
prednostne sa vzorky odoberajú pred podaním antimykotík (v prípade topických prípravkov sa odporúča interval najmenej 5 - 7 dní od posledného podania)
predchádzajúca dekontaminácia oblasti zberu sa neodporúča, pretože môže byť ovplyvnená životaschopnosť hubových prvkov a získavanie negatívnych kultúr.

chĺpky sa zbierajú pinzetou, najlepšie pod UV svetlom, v tmavej miestnosti. Posiela sa do laboratória v sterilnej nádobe. Maximálna pohotovostná doba: 72 hodín pri izbovej teplote.
fragmenty nechtov sa zbierajú zo spojenia zdravého tkaniva s postihnutým, škrabaním sterilnou kyretou alebo strihaním nožnicami. Posiela sa do laboratória v sterilnej nádobe. Maximálna pohotovostná doba: 72 hodín pri izbovej teplote.
kožné šupiny sa zbierajú zoškrabaním aktívnej oblasti lézie (obvykle periférnej) sterilnou kyretou alebo stlačením a opakovaným utieraním sterilným tampónom navlhčeným sterilným soľným roztokom. Odber pufra sa odporúča pre lézie obrezaného dermatofytu a zahŕňa okamžité naočkovanie vzorky do izolačného média.
mokré lézie sa odoberajú sterilnými tampónmi, ktoré sa odosielajú do laboratória v transportnom médiu.

POZOR! Dermatofyty sa zničia, ak sa skladujú pri teplote 4 - 6 ° C.

Priame mikroskopické vyšetrenie

Je to povinné, umožňuje rýchle potvrdenie podozrenia na dermatofytickú infekciu a informácie lekára, dávno pred pozitívom kultivácie.

Kultúra

Izolácia patogénnych húb je podporovaná očkovaním vzoriek odobratých na pevnom médiu obsahujúcom cykloheximid, látku schopnú čiastočne alebo úplne inhibovať vývoj kontaminujúcich húb. Izolácia húb z patologických vzoriek v laboratórnych podmienkach je bez ohľadu na ich charakter nepopierateľnou nevyhnutnosťou pre pochopenie infekčného procesu a pre začatie antimykotickej liečby.

Identifikácia húb dermatofytov hmotnostnou spektrometriou

Klasické metódy identifikácie húb dermatofytov sú založené na pozorovaní makroskopických znakov (pigmentácia, rastový režim, textúra kolónií), na použití selektívnych kultivačných médií a mikroskopickom vyšetrení makro/mikrokonídií. Tieto metódy sú mimoriadne namáhavé.

Systém MALDI-TOF využívajúci hmotnostnú spektrometriu je v súčasnosti vynikajúcou alternatívou k bežným metódam identifikácie.

Interpretácia výsledkov

Pozitívny výsledok pri natívnom mikroskopickom vyšetrení

Prítomnosť prvkov naznačujúcich plesňovú infekciu je dostatočná na začatie liečby, ale nezaručuje získanie pozitívnych kultúr.

Negatívny výsledok pri mikroskopii, pozitívny v kultúre

Označuje nízke množstvo húb dermatofytov vo vzorke odobratej v blízkosti postihnutej oblasti. Je indikovaná antimykotická liečba.

Negatívna kultúra, pozitívny výsledok v priamej mikroskopii

Môže to byť spôsobené zberom v strede lézie, kde už dermatofyty nie sú životaschopné, a môže to byť dôsledok predchádzajúcej antimykotickej liečby. 33% vzoriek nechtov poskytuje falošne negatívne kultúry.

Dôležitosť izolácie húb zo vzoriek

Vo väčšine prípadov má izolácia húb dermatofytov klinické dôsledky. Saprofytické huby (Scopulariopsis brevicaulis, Fusarium sp.) Vyskytujú sa sekundárne po dermatofytickej infekcii alebo traume.

Pokiaľ ide o úlomky nechtov, odporúča sa opakovať ich zber, ak sú izolované v kultúre Fusarium sp., Aspergillus alebo Acremonium sp.