Krvná skupina OAB - Synevo

InformovaťÞii všeobecné

krvná

U ľudí bolo identifikovaných 26 systémov krvných skupín s 228 antigénmi; systém krvných skupín pozostáva z jedného alebo viacerých antigénov riadených jedným génom alebo komplexom dvoch alebo viacerých úzko spojených génov. Boli identifikované aj ďalšie antigény, ktoré neboli priradené k zavedeným systémom. Antigénmi erytrocytov môžu byť proteíny, glykoproteíny alebo glykolipidy. Väčšina je syntetizovaná erytrocytmi, avšak niektoré antigény, ako napríklad tie, ktoré patria do Lewisovho systému, sú adsorbované z plazmy na membráne erytrocytov. Niektoré antigény sú špecifické pre erytrocyty, iné sa nachádzajú v iných bunkách tela. Znalosť krvných skupín je pre transfúznu liečbu nevyhnutná. Takže jedinci, ktorí nemajú určité antigény erytrocytov, môžu produkovať aloprotilátky, keď sú vystavení krvi obsahujúcej tieto antigény v krvných transfúziách alebo počas tehotenstva. Protilátky, ktoré interagujú s antigénmi erytrocytov, spôsobujú okamžité alebo oneskorené hemolytické transfúzne reakcie a hemolytické ochorenie novorodenca 4 .

Systém krvných skupín ABO je najdôležitejším systémom krvných skupín, pretože: keď antigény nie sú exprimované na povrchu erytrocytov, zodpovedajúce protilátky sú vždy prítomné v plazme, stimuly pre produkciu protilátok sú predstavované rôznymi faktormi prostredia, ako napr. baktérie (napr. E. coli), ktoré sa na povrchových štruktúrach exprimujú takmer rovnako ako ABO sacharidy; vytvorené protilátky sú zmesou IgM (hlavne) a IgG, aktívnych pri 37 ° C a schopných aktivovať komplement, a vysoká hustota antigénnych miest na membráne erytrocytov umožňuje väzbu veľkého množstva protilátok vedúcich v prípade nekompatibilnej krvnej transfúzie v systéme ABO pri akútnych hemolytických transfúznych reakciách 2; 4 .

Všetci imunokompetentní jedinci produkujú prirodzené protilátky (izoaglutiníny alebo izohemolyzíny) proti chýbajúcim antigénom skupiny ABO (H). Anti-A a anti-B sú zvyčajne detegovateľné 3 až 6 mesiacov po narodení a vo veku 5 rokov dosahuje titer protilátok maximum a udržiava sa po celú dospelosť. Titer IgM protilátok môže s pokročilým vekom postupne klesať. Anti-A a anti-B protilátky sú tiež prítomné u tých, ktoré majú slabé A alebo B varianty. Novorodenci zvyčajne nemajú významné množstvo anti-A a anti-B v plazme, s výnimkou tých, ktoré sa narodili aloimunizovaným matkám, u ktorých môžu byť prítomné IgG protilátky od matky, ktoré prešli placentou. Protilátky ABO nie sú hlavnou príčinou hemolytickej choroby u novorodenca v dôsledku inhibície protilátok rozpustnými látkami A a/alebo B prítomnými v krvi, ako aj antigénmi A alebo B prítomnými v bunkách iných ako erytrocyty; väzbová afinita protilátok k molekulám cukru je tiež slabšia ako väzbová afinita protilátok k molekulám proteínov, ako je antigén D4. Hemolýza je pravdepodobnejšia, ak je matka skupina O, s detskou skupinou A 2 .

Odporúčania pre stanovenie krvnej skupiny ABO 2

  • pred transfúziou;
  • pred invazívnym alebo chirurgickým zákrokom potenciálne spojeným s krvácavými komplikáciami, ktoré si môžu vyžadovať transfúzie;
  • pred pôrodom a postnatálnym imunohematologickým monitorovaním matky a dieťaťa;
  • darcom krvi;
  • pre kompatibilitu so skupinou ABO pri transplantácii obličiek a srdca.

Výcvik pacientov - nie je potrebné žiadne predchádzajúce školenie; užitočné sú informácie o infúznej liečbe makromolekulárnymi roztokmi uskutočnenými pred stanovením, transfúzie za posledných 120 dní, infekčné choroby s gramnegatívnymi zárodkami so sepsou/bez sepsy, zhubné ochorenia (karcinóm, lymfóm, myelóm) 3 .

Odobratý exemplár - a) kapilárna krv z dužiny prsta; b) venózna krv 3 .

Zberová nádoba - b) vacutainer bez prísad alebo aktivačného gélu (červený alebo bezfarebný uzáver); pre automatickú metódu: 4 ml vacutainer obsahujúci EDTA (tmavo fialové viečko) 3 .

Zozbierané množstvo - b) pokiaľ to umožňuje podtlak 3 .

Príčiny odmietnutia dôkazov - silne hemolyzovaný exemplár 3 .

Stabilita vzorky - skúška sa vykoná okamžite, ak to nie je možné, vzorka sa uchováva 48 hodín pri 2 - 8 ° C; pre automatickú metódu má vzorka krvi stabilitu 7 dní pri 2-8 ° C 3 .

Po zbere potrebné spracovanie - po úplnom zrážaní pri izbovej teplote sa sérum a zrazenina odstránia. Zo zostávajúcich červených krviniek sa pripraví 10% suspenzia vo vlastnej plazme alebo vo fyziologickom roztoku 1; 3. Pre metódu aglutinácie karty sa pripraví suspenzia 5% červených krviniek v špeciálnom suspenznom médiu. Pre automatickú metódu sa vzorka krvi centrifuguje, aby sa získala plazma, a zavedie sa do analyzátora (plazma zostane nad červenými krvinkami) 3 .

Metódy stanovenia - Laboratóriá Synevo vykonávajú:

a) priama/globulárna metóda (Beth-Vincent) na stanovenie krvnej skupiny ABO pomocou séra anti-A, anti-B a anti-AB s týmito variantmi:

- hemaglutinácia na platni 3. Používajú sa dve kontroly: kontrola AB (červené krvinky pacienta s AB sérom) a automatická kontrola (červené krvinky a vlastné sérum) 1 .

- aglutinácia a gélová filtrácia na kartách s mikroskúmavkami obsahujúcimi gél impregnovaný špecifickým činidlom špecifickým pre antigén erytrocytov (myšacie alebo ľudské monoklonálne protilátky) - priamy test skupiny ABO a stanovenie Ag RH1 (D) a Ag RH 1,2,3 (DCE).

Pre metódu aglutinácie karty je pozitívna reakcia validovaná, iba ak je kontrolná mikroskúmavka negatívna. Pozitívna reakcia sa odhaduje v závislosti od veľkosti aglutinátov od + do ++++.

Pri každom cykle vzoriek sa použije známa skupina a kontrolná krv Rh .

b) automatická metóda hemaglutinácie na jamkových doštičkách (v centrálnom laboratóriu Synevo)

Pracovné dosky (Erytype S) obsahujú 12 testovacích prúžkov s 8 jamkami (1 prúžok = kompletný ABO test a Rh faktor).

Krvná skupina sa stanoví priamou globulárnou metódou (Beth - Vincent), ktorá zvýrazňuje antigény erytrocytov pomocou testovacích sér (suché monoklonálne séra, ktoré lemujú časť reakčných jamiek), a nepriamou plazmovou metódou (Simonin Vincent). ), ktorý zvýrazňuje protilátky v plazme analyzované pomocou testovacích erytrocytov, pričom aglutinácia prebieha v nevyložených jamkách pracovného prúžku. Jamka na páse obsahuje kontrolu negatívnej reakcie.

Aglutinačná reakcia erytrocytov v priamej metóde je zosilnená použitím bromelaínu (proteolytický enzým, ktorý štiepi polypeptidové reťazce na povrchu červených krviniek, čím znižuje negatívne zaťaženie buniek; preto zvýši príťažlivú silu medzi červenými krvinkami v prítomnosti príslušnej protilátky).

V záverečnej fáze je každá jamka pracovného prúžku analyzovaná a automaticky vyfotografovaná analyzátorom, pričom výsledky sú interpretované takto:

  • Pozitívna reakcia - prítomnosť aglutinácie (intenzita sa odhaduje od 1+ - 4+)
  • Negatívna reakcia - žiadna aglutinácia
  • Nepresvedčivá reakcia - +/- reakcia bude interpretovaná lekárom

Všetky získané obrázky a výsledky skontroluje a overí lekár 3 .

Limity a rušenie

Výsledok stanovenia krvnej skupiny by si mali prečítať dvaja ľudia a mali by sa nakoniec potvrdiť na druhej vzorke krvi 1; .

Chyby čítania v dôsledku technických chýb:

- špinavé sklenené výrobky; bakteriálna kontaminácia;

- prítomnosť mikrotagov (nesprávna aglutinácia);

- nepozorované: proporcie červených krviniek/séra, poradie kvapiek krvných testov (protichodné aglutinácie), čas čítania - neskoré čítanie: suché okraje (nesprávna aglutinácia), skoré čítanie (chýbajúca aglutinácia alebo slabá aglutinácia).

Chyby spôsobené červenými krvinkami

a) Prítomnosť roliet (pseudoaglutinácia): použitie makromolekulárnych roztokov (Dextran, HES), poruchy zrážania, neúplne zrážané vzorky krvi, hyperfibrinogenémia, produkty degradácie fibrínu, fibrinolytické látky, dysproteinémia, paraproteinémia, kryoglobín, lieky (vysoké dávky heparínu, protamíniumsulfátu), reumatoidné faktory, zvýšený cholesterol, bilirubín, leukocytóza, leukocytové enzýmy 2. Kontrola AB je pozitívna; eradikácia erytrocytov umožňuje správny výkon globulárnej vzorky 1 .

  • Prítomnosť studených aglutinínov (svetlo automobilu je pozitívne). Vzorka krvi a reagencie sa predinkubujú pri 37 ° C a test sa vykoná za horúca 2 .
  • Červené krvinky pokryté aloprotilátkami: novorodenec z nekompatibilného tehotenstva (v systéme Rh, ABO), pacient transfúzovaný nekompatibilnou krvou.
  • Stanovenie krvnej skupiny z krvi odobratej z pupočníka: Whartonová želatína, makromolekulárna látka, ktorá obklopuje erytrocyty, dáva vzhľad pseudoaglutinátov. Na jeho odstránenie je potrebné erytrocyty premyť najmenej 6-krát pred stanovením 1 .
  • Prítomnosť imunitných komplexov liekov.

Pri septikémiách s gramnegatívnymi bacilami sú kryptoantigény (T) vystavené enzymatickým účinkom bakteriálnych látok, ktoré sú rozpoznávané pomocou protilátok (anti-T) prítomných vo väčšine ľudských séra 2. Kontrola AB je pozitívna 1 .

Absencia alebo slabá aglutinácia alebo zdvojnásobenie výskytu populácie: aglutinácia nie je úplná s prítomnosťou voľných červených krviniek (aglutináty sa objavujú na ružovom pozadí) 1; 2:

  • stará krv;
  • slabé antigény: novorodenci, predčasné;
  • slabé podskupiny A alebo B;
  • zoslabenie antigénu (pri leukémiách, lymfómoch, Hodgkinovej chorobe);
  • pacient skupiny A alebo B transfúzovaný krvou skupiny O, krvácanie z matkinho plodu;
  • prítomnosť veľkého množstva látky A alebo B v plazme (rakovina žalúdka, pankreas), ktorá neutralizuje testované protilátky (na ich odstránenie sa musia umyť červené krvinky);
  • prítomnosť chiméry alebo mozaiky (výnimočné, napr. transplantácia kostnej drene).