MEA - Nalievanie Petriho misiek - MycoGenetics

Osvedčenou metódou kultivácie mikroorganizmov a húb je kultivácia v Petriho miskách na polotuhom, sterilnom agarovom kultivačnom médiu. Agar-agar je polysacharid a je vyrobený z červených morských rias. Agar je schopný stuhnúť/gélovať vodu. Vytvorí sa trojrozmerná sieť, ktorá optimálne podporuje rast zdravého mycélia.

petriho

Pokyny pre kultivačné médium so sladovým extraktom

  • 2 x 1 liter sklenená fľaša na mlieko s vekom (vyčistená)
  • 1 liter destilovanej vody
  • 25 g agaru-agaru
  • 20 g sladového extraktu (prášok)
  • Voliteľné: 2 g kvasnicového extraktu + 1 g peptónu
  • Alobal
  • Tlakový hrniec
  • HEPA filter
  • 40 x PS Petriho misky (sterilné)
  • Parafilm
  • Sterilium/Antifect dezinfekčný prostriedok
  • Jednorazové rukavice
  • Chránič zubov

Pripravte MEA

Najskôr vložte všetky ingrediencie do hrnca a zmes zahrejte so zatvoreným vekom a za občasného miešania, kým sa všetky zložky nerozpustia vo vode. Potom rozdeľte roztok rovnomerne medzi obe fľaše s mliekom. Pretože sladový extrakt môže pri varení veľa napeniť, fľaše by nemali byť naplnené viac ako do polovice.

Teraz vezmite do ruky veľkorysý kúsok hliníkovej fólie - ak je fólia tenká, mali by ste si vziať dvojitú vrstvu - a položte ju na otvorenú fľašu s mliekom. Teraz mierne nasaďte veko a mierne ho pootočte, aby sa počas varenia mohol vyrovnať tlak, ale veko stále nespadne z hrdla fľaše. Teraz vezmite ďalší veľký kúsok alobalu a položte ho cez viečko fľaše s mliekom. Fóliu zatlačte nadol a pevne proti fľaši. Uistite sa, že potom nie sú v blízkosti veka praskliny. Ak je to potrebné, vezmite ďalšiu vrstvu hliníkovej fólie.

MEA kultivačné médium je teraz možné sterilizovať 20 minút pri 121 ° C v autokláve.

Sterilizujte MEA

Za týmto účelom naplňte hrniec vodou tak, aby boli fľaše vo vode asi 3 - 5 cm. Použite tiež sitovú vložku hrnca tak, aby fľaše nestáli priamo na podlahe. V opačnom prípade existuje riziko, že sa sklo rozbije alebo že sa sladový extrakt v živnom médiu zráža (zhlukuje) v dôsledku nadmerne vysokých teplôt.

Keď autokláv dosiahne svoju prevádzkovú teplotu, začne sterilizačný čas 20 minút. Potom nechajte nádobu trochu vychladnúť. Medzitým si môžete pripraviť svoje pracovisko pred HEPA filtrom.

Pripravte pracovisko filtra HEPA

Štartujte svoj HEPA filter najmenej 15 minút pred začatím práce. Pracovnú plochu dôkladne očistite dezinfekčným prostriedkom na povrch a pripravte Petriho misky. Fľaše na mlieko s MEA, ktoré ešte nevychladli, sú najbezpečnejšie na ochladenie pred spustením filtra. Len čo MEA roztok dosiahne cca 50 ° C, môžete ním naplniť Petriho misky.

Nalejte a zalepte Petriho misky

Za týmto účelom si nasaďte jednorazové rukavice a masku na tvár. Potom si ruky očistite dezinfekčným prostriedkom. Nastriekajte ním tiež obal Petriho misiek. Navlhčite tiež dezinfekčným prostriedkom povrch fľaše s mliekom a hliníkovú fóliu. Teraz fóliu čo najviac odstráňte, aby ste mohli zložiť veko. Čistým/sterilným nožom rozrežte obal Petriho misky a vyberte z neho toľko Petriho misiek, koľko ich môžete jednou rukou zhora stohovať. Jedlá položte na seba a vedľa nich svoje otvorené MEA riešenie. Znova si očistite ruky dezinfekčným prostriedkom a potom začnite nalievať Petriho misky.

Urobíte to tak, že jednou rukou zhora chytíte Petriho misky a necháte iba spodnú časť dolnej misky. Druhou rukou vezmite fľašu s mliekom a rýchlo nalejte roztok do misky. Znova položte všetky Petriho misky na seba a tentokrát ich vezmite všetky, s výnimkou najnižšej už naliatej Petriho misky a spodnej časti druhej Petriho misky, ktorú teraz môžete naplniť MEA atď. Týmto spôsobom môžu Petriho misky pomaly stvrdnúť a len sa vytvorí malá kondenzácia.