Možné použitia prietokovej cytometrie pomocou FACS - LABOKLIN GMBH; KLINICKÉ LABORATÓRIUM

Skratka FACS znamená fluorescenciaaoživený cell orting. Toto je špeciálna forma prietokovej cytometrie, pri ktorej je možné merať a analyzovať bunky označené fluorescenciou. Bunky prúdia v prúde kvapaliny laserovým lúčom a určuje sa veľkosť buniek, vnútorná štruktúra a relatívna intenzita fluorescencie. Pre početné typy buniek sú k dispozícii protilátky označené fluorescenciou, najmä lymfocyty, ktoré sú namierené proti imunofenotypovým povrchovým znakom (zhluk diferenciácie, skrátene „CD“) buniek. Tieto CD markery sa teraz dajú použiť na vyšetrenie buniek a ich bližšiu identifikáciu. Napríklad cytotoxické lymfocyty T-buniek sú pozitívne na CD3 a CD8, ale negatívne na CD21 a CD4.

cytometrie

Toto vyšetrenie sa využíva pri rutinnej diagnostike, najmä pri hematológii. Pretože testovaný materiál musí byť v tekutej forme, sú zvlášť vhodné vzorky krvi. Na zabezpečenie zmysluplného výsledku je dôležité, aby boli bunky neporušené, takže vyšetrenie by sa malo vykonať čo najskôr, maximálne do 3 dní. V spoločnosti LABOKLIN sa prístroj FACS používa na rôzne dôležité vyšetrenia.

1. Protilátky krvných doštičiek

Zvýšený imunoglobulín (hlavne IgG) na povrchu krvných doštičiek vedie k predčasnej fagocytóze krvných doštičiek makrofágmi s následkom trombocytopénie. Táto imunitne sprostredkovaná trombocytopénia (IMT) môže byť primárna alebo sekundárna. Zriedkavá primárna forma je spôsobená autoprotilátkami namierenými proti doštičkovým špecifickým epitopom. Na druhej strane sekundárna imunitne sprostredkovaná trombocytopénia súvisí s rôznymi liekmi, infekčnými agensmi (baktérie, vírusy, prvoky alebo heminty), neopláziou a inými imunitne sprostredkovanými chorobami.

Primárna IMT sa pozoruje predovšetkým u psov, dvakrát častejšie u žien ako u mužov, vo všetkých vekových skupinách, najčastejšie však u zvierat stredného veku. Predisponovanými plemenami sú kokeršpaniel, miniatúrny a pudl, starý anglický ovčiak (bobtail), zlatý retriever a nemecký ovčiak.
Nameraný počet krvných doštičiek je zvyčajne nižší ako 30 G/l pri primárnej IMT ako pri sekundárnej forme.

Diagnostiku je možné vykonať pomocou FACS pomocou detekcie protilátok proti krvným doštičkám. Uskutoční sa dvojitá inkubácia na detekciu IgG viazaného na krvné doštičky. Hladina protilátky 30% sa hodnotí ako pozitívny dôkaz pre IMT. Materiál vzorky (plná krv EDTA) nesmie byť starší ako 3 dni, aby sa dosiahlo vyhodnotiteľné imunofarbenie. Vyšetrenie musí byť zahájené pred začatím imunosupresívnej liečby, inak sa vyskytnú falošne negatívne výsledky. Ďalšou diagnostickou možnosťou je diagnostická terapia kortizónom a detekcia megakaryocytovej hyperplázie v kostnej dreni.

2. Stav bunkovej imunity

Bunkový imunitný stav zahŕňa kompletný krvný obraz, ako aj stanovenie relatívneho a absolútneho počtu periférnych lymfocytov: B bunky, celkové T bunky, ako aj CD4 + (pomocné T bunky) a CD8 + bunky (cytotoxické T bunky).

Imunofenotypizácia krvi je založená na selektívnom rozpoznávaní antigénov bunkového povrchu pomocou fluorescenčných farbivom označených monoklonálnych protilátok pomocou prietokovej cytometrie (FACS). Vyšetrenie bunkového imunitného stavu je indikované, ak klinické príznaky naznačujú primárnu alebo sekundárnu poruchu v bunkovom imunitnom systéme.

U psov môže byť stanovenie imunitného stavu užitočné pri diagnostike pyodermie, demodikózy, systémového lupus erythematosus a leishmaniózy a vrodených chýb T-buniek. Na kontrolu a úpravu dávky je možné pri farmakoterapii použiť kontrolné vyšetrenia.
U koní sa používa na objasnenie častých a dlhotrvajúcich infekcií.

Stanovenie imunitného stavu hrá osobitnú úlohu pri infekcii vírusom mačacej imunodeficiencie (FIV).

Vírus spôsobuje chronické, pretrvávajúce infekcie s progresívnym priebehom ochorenia. Infekcia imunokompetentných buniek imunitný systém postupne vyčerpáva.

Vírus vykazuje výrazný tropizmus pre T lymfocyty a makrofágy. Poškodením sú ovplyvnené hlavne funkcie T lymfocytov s prevahou kvantitatívnych a kvalitatívnych defektov v populácii pomocných buniek T. Po prvé, zvýšenie buniek CD8 + vedie k percentuálnemu zníženiu počtu buniek CD4 +. Počet buniek CD8 + zostáva zvýšený počas asymptomatického obdobia infekcie a klesá len relatívne krátko pred vývojom klinických príznakov. Na začiatku infekcie sú infikované hlavne bunky CD4 +, tu sa nachádza najväčšie množstvo vírusu. S progresiou infekcie vedie absolútny pokles buniek CD4 + k zníženiu kvocientu CD4 +/CD8 +.

Humorná imunitná obrana vykazuje poškodenie svojej funkcie pomerne neskoro. K zníženiu počtu B buniek obvykle dôjde až v konečnej fáze. Množstvo vírusu v krvi sa opäť významne zvyšuje, ale protilátková odpoveď už neprebieha.

Vytvorenie imunitného stavu môže preto poskytnúť hodnotenie prognózy v prípade primárneho alebo sekundárneho imunitného deficitu.

3. Diferenciácia leukémie

S lymfocytózou> 30 G/l alebo s lymfoproliferatívnym ochorením (leukémia, štádium V lymfómu) potvrdeným testom klonality (PARR) s minimálnym počtom leukocytov> 5 G/l možno pomocou FACS vykonať diferenciáciu leukémie. Použitím markerov CD na identifikáciu buniek možno toto vyšetrenie použiť na klasifikáciu akútnej alebo chronickej leukémie (CD34: marker kmeňových buniek), ktorá môže poskytnúť dôležité informácie o prognóze a výbere liečby. Ďalej možno neoplastické bunky rozdeliť na B-bunky a T-bunkové lymfocyty a podtypy.