Pripravte si teda soľný roztok pufrovaný fosfátmi
PBS alebo fosfátom pufrovaný soľný roztok je tlmivý roztok, ktorý je obzvlášť cenný, pretože napodobňuje koncentráciu iónov, osmolaritu a pH ľudských telových tekutín. Inými slovami, je izotonický pre ľudské roztoky, takže je menej pravdepodobné, že spôsobí poškodenie, toxicitu alebo nežiaduce zrážanie buniek v biologickom, lekárskom alebo biochemickom výskume.
Chemické zloženie PBS
Existuje niekoľko receptov na výrobu roztoku PBS. Esenciálny roztok obsahuje vodu, hydrogénfosforečnan sodný a chlorid sodný. Niektoré prípravky obsahujú chlorid draselný a dihydrogenfosforečnan draselný. EDTA sa môže tiež pridať do bunkového prípravku, aby sa zabránilo zhlukovaniu.
Fosfátom pufrovaný soľný roztok nie je ideálny na použitie v roztokoch, ktoré obsahujú dvojmocné katióny (Fe 2+, Zn 2+), pretože môže dôjsť k zrážaniu. Niektoré roztoky PBS však obsahujú vápnik alebo horčík. Pamätajte tiež na to, že fosfát môže inhibovať enzymatické reakcie. Pri práci s DNA buďte obzvlášť opatrní pri tomto potenciálnom negatíve. Aj keď je PBS vynikajúci pre fyziologické vedy, uvedomte si, že fosfát vo vzorke pufrovanej PBS sa môže vyzrážať, ak je vzorka zmiešaná s etanolom.
Typické chemické zloženie 1X PBS má konečnú koncentráciu 10 mM PO4 3-, 137 mM NaCI a 2,7 mM KCI. Tu je konečná koncentrácia činidiel v roztoku:
| NaCl | 137 | 8.0 |
| KCl | 2.7 | 0,2 |
| Na2HPO4 | 10 | 1.42 |
| KH 2 PO 4 | 1.8 | 0,24 |
Protokol na výrobu fyziologického roztoku pufrovaného fosfátmi
Podľa vášho účelu môžete vyrobiť 1X, 5X alebo 10X PBS. Mnoho ľudí si jednoducho kúpi tlmivé tablety PBS, rozpustí ich v destilovanej vode a podľa potreby upraví pH kyselinou chlorovodíkovou alebo hydroxidom sodným. Je však ľahké pripraviť riešenie od nuly. Tu sú recepty na 1X a 10X fosfátový pufrovaný soľný roztok: