Stanovenie faktora Rh - Synevo

Všeobecné informácie

faktora

Jedinec je považovaný za Rh pozitívneho, ak jeho erytrocyty exprimujú antigén D. Termín Rh negatívny sa týka neprítomnosti antigénu D. Neprítomnosť antigénu D sa vyskytuje u 15 - 17% jedincov bielej populácie a v iných populáciách je menej častá. V bielej populácii je neprítomnosť D antigénu spôsobená deléciou génu RHD, zatiaľ čo v ázijskej a čiernej populácii je spojená skôr s inaktiváciou génu ako s jeho deléciou. .

Niektoré erytrocyty exprimujúce D antigén vyžadujú na aglutináciu predĺženú inkubáciu s anti-D reagentom. Tieto erytrocyty sa považujú za D pozitívny antigén a sú opísané ako slabé D, predtým nazývané Du (v menej ako 1% prípadov). Za slabý fenotyp D sa považuje jeden z nasledujúcich troch mechanizmov 5:

  1. a) dedičnosť génu RHD kódujúceho proteín D so oslabenou antigénnou expresiou: je častejšia v čiernej populácii a je spojená s haplotypom Dce a v bielej populácii je spojená s DCe alebo DcE haplotypom.
  2. b) interakcia génu D s inými génmi: jedinci s génom D v trans polohe vzhľadom na gén C (napr. Dce/Ce) vykazujú oslabenú expresiu génu D.

Jedinci so slabým fenotypom D jedným z týchto dvoch mechanizmov netvoria po vystavení D-pozitívnym erytrocytom aloprotilátky.

  1. c) dedičnosť génu kódujúceho antigénny D komplex, ktorému chýbajú niektoré epitopy, nazývané tiež čiastočný D; títo jedinci môžu produkovať anti-D, ak sú transfúzovaní s D-pozitívnymi erytrocytmi. Z nich má D VI najmenší počet epitopov a títo ľudia majú najvyššie riziko imunizácie, ale významne nižšie ako negatívni D ľudia 3 .

Darcovia s nízkym D by mali byť považovaní za Rh (D) pozitívnych; je dôležité, aby neboli nesprávne označené ako Rh negatív, pretože slabý D antigén môže vyvolať imunitnú odpoveď, ak sa transfúzuje s Rh negatívnym jedincom 1; 3; 5. Jedinci so slabým D môžu byť transfúzovaní Rh pozitívnou krvou (okrem D VI) a tehotné ženy nevyžadujú anti-D2 imunoglobulínovú profylaxiu; Ak sa použije vhodné anti-D monoklonálne činidlo, väčšina antigénnych determinantov predtým klasifikovaných ako Du by sa už za bežných podmienok nemala odlišovať od D. .

Nulový fenotyp Rh nastáva, keď erytrocyty neexprimujú antigény Rh, a to najmenej prostredníctvom dvoch možných mechanizmov: dedičnosť génu kódujúceho abnormálny glykoproteín spojený s Rh s normálnymi génmi RHD a RHCE alebo dedičnosť mutácie negatívneho génu RHCE spojeného s R. Nulový fenotyp Rh je spojený so štrukturálnymi abnormalitami erytrocytov so stomatocytózou a hemolýzou. Títo jedinci tvoria aloprotilátky, ktoré interagujú so všetkými okrem erytrocytov. .

Anti-Rh protilátky sa vyskytujú aloimunizáciou po nekompatibilných transfúziách v systéme Rh alebo v tehotenstve. V systéme Rh sa môžu extrémne zriedkavo vyskytovať prirodzené protilátky bez známych antigénnych stimulov (anti-E, anti-Cw), vo väčšine prípadov klinicky irelevantné 1; 3. Aj pri hemolytických imunitných anémiách majú autoprotilátky často anti-Rh 1 aktivitu .

Väčšina anti-Rh protilátok je IgG, najmä IgG1 a IgG3 (neúplné aglutiníny), aj keď niektoré môžu byť IgM a zvyčajne neaktivujú komplement 5. IgM podobné väzbové protilátky sú zvyčajne prechodné a vyskytujú sa na začiatku imunizácie 1. Najbežnejšie sú anti-D protilátky, ktoré môžu spôsobiť hemolytické ochorenie novorodenca a závažné hemolytické transfúzne reakcie. Ich frekvencia sa významne znížila s anti-D profylaxiou u Rh-negatívnych tehotných žien s Rh-pozitívnym plodom. Anti-C, c, E, e protilátky sú spojené s hemolytickým ochorením novorodenca a miernymi transfúznymi hemolytickými reakciami 5 .

Rh tlač erytrocytov sa vykonáva s monoklonálnymi anti-D sérami, ktoré reagujú vo fyziologickom roztoku a obsahujú ako ľudský IgM (ktorý nedeteguje kategóriu D VI) 3, tak polyklonálne IgG protilátky, ktoré sa môžu tiež použiť v antiglobulínovom teste na D slabý 2. K príprave anti-Rh séra sa pridáva ľudský alebo hovädzí albumín, ktorý upravuje dielektrickú konštantu média a podporuje aglutináciu Rh pozitívnych erytrocytov 1. .

Odporúčania pre stanovenie faktora Rh

  • pred transfúziou;
  • pred invazívnym alebo chirurgickým zákrokom potenciálne spojeným s krvácavými komplikáciami, ktoré si môžu vyžadovať transfúzie;
  • pred pôrodom a postnatálnym imunohematologickým monitorovaním matky a dieťaťa;
  • darcom krvi.

Rutinné vyšetrenie krvi nenaznačuje stanovenie iných antigénov Rh iných ako faktora Rh D. Stanovenie kompletného fenotypu Rh je indikované u darcov krvi, je potrebné o ňom uvažovať pri transfúziách u dievčat a žien pred menopauzou, u pacientov s chronickou transfúziou a u príjemcovia s nepravidelnými protilátkami proti erytrocytom 3 .

Výcvik pacientov - nie je potrebné žiadne predchádzajúce školenie; informácie o infúznej liečbe makromolekulárnymi roztokmi uskutočnenej pred stanovením sú užitočné transfúzie za posledných 120 dní 4 .

Odobratý exemplár - a) kapilárna krv z dužiny prsta; b) venózna krv 4 .

Zberová nádoba - b) vacutainer bez prísad alebo aktivačného gélu (červený alebo bezfarebný uzáver); pre automatickú metódu: 4 ml vacutainer obsahujúci EDTA (tmavo fialové viečko) 4 .

Zozbierané množstvo - b) pokiaľ to umožňuje podtlak 4 .

Príčiny odmietnutia dôkazov - silne hemolyzovaný exemplár 4 .

Stabilita vzorky - skúška sa vykoná okamžite, ak to nie je možné, vzorka sa uchováva 48 hodín pri 2 - 8 ° C; pre automatickú metódu má vzorka krvi stabilitu 7 dní pri 2-8 ° C 4 .

Po zbere potrebné spracovanie - po úplnom zrážaní pri izbovej teplote sa sérum a zrazenina odstránia. Zo zostávajúcich červených krviniek sa pripraví 40% suspenzia vo vlastnej plazme alebo vo fyziologickom roztoku. Pre metódu aglutinácie karty sa pripraví suspenzia 5% červených krviniek v špeciálnom suspenznom médiu 1; Pre automatickú metódu sa vzorka krvi centrifuguje, aby sa získala plazma, a vloží sa do analyzátora (plazma zostane nad červenými krvinkami) 4 .

Metóda stanovenia - v laboratóriách spoločnosti Synevo sa vykonávajú tieto metódy:

- hemaglutinácia na platni s monoklonálnym činidlom anti-D IgM 4. Stanovenie sa vykonáva pomocou dvoch rôznych typov monoklonálnych protilátok a test obsahuje autológnu kontrolu (albumínová kontrola - erytrocyty pacienta sa testujú v prostredí, v ktorom sú obsiahnuté monoklonálne protilátky), ako aj v kontrolnej skupine O červené krvinky, Rh pozitívne a Rh negatívne 1; 3 .

- aglutinácia a gélová filtrácia na kartách s mikroskúmavkami obsahujúcimi gél impregnovaný špecifickým činidlom špecifickým pre antigén erytrocytov (myšacie alebo ľudské monoklonálne protilátky) - priamy test skupiny ABO a stanovenie Ag RH1 (D) a Ag RH 1,2,3 (DCE).

Pri každom cykle vzoriek 4 sa použije známa kontrolná skupina a krv Rh .

- automatická hemaglutinačná metóda na doštičkách s jamkami (v centrálnom laboratóriu Synevo)

Pracovné doštičky (Erytype S) obsahujú 12 testovacích prúžkov s 8 jamkami (1 prúžok = kompletný ABO test a Rh faktor). Na stanovenie Rh sa použijú 2 suché monoklonálne séra anti-D IgM, ktoré sú vložené do dvoch jamiek prúžku 4. .

Interpretácia výsledkov

Pre metódu hemaglutinácie na platni

Príjemcovia krvi a novorodenci:

  • Rh (D) pozitívny, ak sú jednoznačne pozitívne výsledky (> = 2+) dosiahnuté s anti-D testovacími sérami a kontrola auta je negatívna;
  • Rh (D) negatívny, ak sú jednoznačne negatívne výsledky dosiahnuté s oboma anti-D testovacími sérami, bez ohľadu na výsledok testu automobilu.

Ak sa dosiahnu slabo pozitívne výsledky, je potrebné vykonať ďalšie testovanie (3 .

Ak je u darcov negatívny počiatočný test na D, mal by sa vykonať druhý test na zistenie slabého D (toto sa nevyžaduje u príjemcov krvi, ktorí by mali byť transfúzovaní s Rh negatívnou krvou). Tiež stanovenie prítomnosti slabého D u tehotných žien vylučuje zbytočné ošetrenie anti-D imunoglobulínom. Predtým, ako pacienta označíme ako slabého D, musíme sa uistiť, či mu nebol nedávno transfúzovaný Rh pozitívny erytrocyt 2 .

Pre metódu aglutinácie karty je pozitívna reakcia validovaná, iba ak je kontrolná mikroskúmavka negatívna. Pozitívna reakcia sa hodnotí v závislosti od disperzie aglutinátov v mikroskúmavke od + do ++++, a to takto: - pozitívny výsledok (++++); - slabý pozitívny výsledok (+ až +++); - negatívny výsledok (-).

Interpretácia výsledku v mikroskúmavke RH1 (D)

Pozitívny výsledok v mikroskúmavke RH1 (D) naznačuje prítomnosť antigénu RH1 (D) na povrchu skúmaných erytrocytov. Karty ABO/RH používané v laboratóriu neumožňujú detekciu všetkých slabo imunogénnych D antigénov ani čiastočne RH1 fenotypu kategórie VI (D VI)

Pre tieto konkrétne antigény sa musia vykonať ďalšie testy.

Interpretácia výsledku v mikroskúmavke RH1,2,3 (DCE)

Pozitívny výsledok v skúmavke RH1,2,3 (DCE) naznačuje prítomnosť antigénu RH1 (D) a/alebo RH2 (C) a/alebo RH3 (E) na povrchu testovaných červených krviniek. .

Po uskutočnení aglutinačnej reakcie sa každá jamka pracovného prúžku vyhodnotí a automaticky vyfotografuje analyzátorom, pričom výsledky sa interpretujú takto:

  • Pozitívna reakcia - prítomnosť aglutinácie (intenzita sa odhaduje od 1+ - 4+)
  • Negatívna reakcia - žiadna aglutinácia
  • Nepresvedčivá reakcia - +/- reakcia bude interpretovaná lekárom

Všetky získané obrázky a výsledky skontroluje a overí lekár 4 .

Limity a rušenie

Falošné pozitívne reakcie (pozitívna albumínová kontrola) 1

  • červené krvinky v rolkách/rolkách (myelóm, Waldenströmova makroglobulinémia) - stanovenie sa obnoví po umytí červených krviniek;
  • poliaglutinarea;
  • hemolytické anémie s horúcimi autoprotilátkami (prítomnosť protilátok IgG na povrchu červených krviniek) - skupina sa obnoví pomocou činidla, z ktorého sa odstráni albumín, ktorý obsahuje anti-D spojivá schopné aglutinovať červené krvinky vo fyziologickom roztoku (anti-D soľný roztok).

  • hemolytická anémia novorodenca (blokáda D antigénnych miest materskými protilátkami) 1;
  • jedinec so slabou Rh D - možná slabá a neskorá aglutinácia; tieto prípady sú postúpené špecializovanej službe, kde sa slabé stanovenie D stanoví pomocou nepriameho antiglobulínového testu s anti-D IgG (neúplný polyklonálny) 1; 3 .