Účinky školenia o neurodermatitíde v Gießene na stav pokožky a stresové skúsenosti - PDF na stiahnutie zadarmo

Účinky školenia o neurodermatitíde v Gießene na stav pokožky a stresové skúsenosti Inauguračná dizertačná práca zameraná na získanie titulu lekára na lekárskom oddelení Univerzity Justusa Liebiga v Gießene, ktorý predložil Michael Hartmut Schock z Gießen Gießen 2017

stav

Z Medical Center for Psychoneuroimmunology Clinic for Psychosomatics Director: Univ.-Prof. DR. med. Kruse z Justus Liebig University Giessen Recenzent: Recenzent: Prof. Dr. med. Eva Peters prof. Dr. med. Sporný deň Thilo Jakob: 07.08.2018

2.8.3 MERANIE ELISA (IMUNOASAY SÚVISIACE S ENZYMOM) 31 2.8.4 FACS (Triedenie buniek aktivované pomocou FLUORESCENCE) 32 2.9 METÓDY ZBERU A MERANIA ÚDAJOV 37 2.9.1 LABORATÓRNY MATERIÁL A PRACOVNÉ ZARIADENIA 37 2.9.2 VZOROVÉ AKVIZÍCIE 42 2.9.3 ELISA 2.9.4 MERANIE FACS 46 2.10 ŠTATISTIKA 49 2.10.1 SPRÁVA ÚDAJOV 49 2.10.2 FORMA ANALÝZY A ZHRNUTIE VZORKU 49 2.10.3 POPISNÁ ANALÝZA 50 2.10.4 ŠTATISTICKÉ HODNOTENIE 50 3 VÝSLEDKY 52 3.1 ZÁKLADNÉ ÚDAJE 52 3.2 VÝSLEDKY VYŠETROVANIA 53 3.2.2 DOTAZNÍK 54 3.2.3 CORTISOL, BDNF, SLURP-1 A IGE 58 3.2.4 IMMUNSTATUS 60 3.2.5 T-REGULAČNÝ LYMFOCYT 62 3.2.6 DENDRITICKÉ BUNKY 64 3.3 NEOČAKÁVANÉ PODUJATIA 66 4 DISKUSIA 67 4.1 DISKUSIA O VÝSLEDKOCH 67 4.1 .1 PODMIENKY POKOŽKY SA ZLEPŠUJÚ Z VÝCVIKU 67 4.1.2 ZNIŽOVANÁ ÚZKOSTI Z dôvodu VÝZNAMNÉHO ODPADU ZO STAI-X1 68 4.1.3 ŽIADNE ZMENY V STRESE A COPINGSCORES 70 4.1.4 MALÉ ZMENY V KONCOVE SÉRA. STRESOVÍ MEDIÁTORI 71 4.1.5 ANALÝZY FACS ZMENUJÚ ZMENY V OBYVATEĽSTVÁCH MONOCYTOVÝCH A PAMETNÝCH BUNIEK 75 4.2 OBMEDZENIA PRÁCE 79

4.3 ZÁVER 83 4.4 VÝHĽAD NEZODPOVEDANÝCH A NOVÝCH OTÁZOK 85 5 ZHRNUTIE 87 6 ZHRNUTIE 88 7 ZOZNAM SKRATIEK 89 8 ZOZNAM OBRÁZKOV 91 9 ZOZNAM TABULIEK 92 10 LITERATÚRNY ADRESÁR 94 11 PRÍLOHY 114 11.1 REFERENČNÁ DOKUMENTÁCIA 114 11.1

Úvod 1.5 Otázka predkladanej práce Cieľom predloženej práce bolo vyhodnotiť vplyvy Giessenovho výcvikového programu na priebeh AD z psychoneuroimunologického hľadiska. Za týmto účelom by ste si mali zodpovedať nasledujúce otázky: Znižuje účasť na školiacom kurze klinicky aktivitu atopickej dermatitídy? o Klesajú hodnoty skóre zápalovej aktivity pokožky SCORAD? Dajú sa zmeny určiť v samostatných správach účastníkov týkajúcich sa prežívania stresu, zvládania stresu a duševného a fyzického zdravia? o Existujú nejaké významné zmeny v kvalite života a svrbení? o Existujú nejaké zmeny v pocitoch stresu a úzkosti? o Mení sa psychomotorické zvládanie správania? o Existujú nejaké zmeny vo vnímaní zdravia a tendencii somatizovať? Dajú sa určiť zmeny v hladinách mediátora stresu kortizolu, BDNF, SLURP-1 a IgE? Existujú zmeny v populáciách buniek monocytov, T-regulačných buniek alebo dendritických buniek? 23

Metodika 2.7 Priebeh štúdie Plánovanie štúdie sa začalo 24. decembra 2014. Po schválení žiadosti o etiku 21. januára 2016 sa začalo s náborom. Školiace kurzy sa konali v Giessene v priemere päťkrát ročne, s počtom účastníkov medzi 6 a 10 ľuďmi. Z nich bolo zvyčajne možné prijať medzi 6 a 8 ľuďmi, takže nábor a odber vzoriek krvi trval dobrý rok. Zvýšená miera predčasného ukončenia školskej dochádzky sa vyskytla na začiatku, čo je problém, o ktorom sa hovorí spolu s jeho riešeniami v časti 4.2. Nábor kontrolných skupín bol menej problematický, väčšina pochádzala priamo z Giessenu, takže dlhšie cesty neboli problémom. V tomto okamihu bol informačný systém a príspevok úplne zavedený. Merania Elisa a FACS sa potom uskutočnili v relatívne krátkom období niekoľkých týždňov, aby sa minimalizovali vonkajšie vplyvy spôsobené kolísaním teploty a vlhkosti. Počet n = 40 subjektov na rameno štúdie, na ktoré sa zameral protokol štúdie, nemohol byť dosiahnutý kvôli vysokej miere predčasného ukončenia štúdia. Hodnotenie sa uskutočnilo s 55 testovanými osobami. 27

Metóda, pri ktorej sa bunky s požadovanými protilátkami merajú oddelene od ostatných buniek a určuje sa ich počet. Na kalibráciu meraní sa na začiatku vykoná kompenzačné meranie. Protilátky označené farbami sa nanášajú na umelé nosiče merania, takzvané guľôčky, zodpovedajúce bunkám, a meria sa ich absorpcia svetla. Týmto spôsobom možno definovať oblasti pre brány opísané v texte vyššie. Každé meranie navyše vyžaduje negatívnu kontrolu, izotyp. Táto protilátka značená farbivom sa nešpecificky viaže na všetky bunky a porovnáva sa s neskoršími výsledkami merania. To zaisťuje, že cieľové bunky môžu byť správne identifikované. V ďalšom texte sú hradlové stratégie populácií cieľových buniek vysvetlené pomocou diagramov. Na základe brán tvorených spektrami laseru je možné špecificky zvoliť bunky označené protilátkou. Výsledky sú uvedené v percentách buniek vo vzťahu k celkovému množstvu v predchádzajúcej skupine (materská koncentrácia). 33

Metodika 2.8.4.1 Imunitný stav s populáciami monocytov a bunkami prirodzeného zabíjania Všetky udalosti Zvyšky buniek FSC> 20 P1 Živé bunky Apopt. Bunky 7-AAD Vitálne bunky CD3 + CD19- CD3- CD19 + CD16 + CD56 + CD3 + CD4 + CD3 + CD19 + T bunky B bunky NK bunky T- pomocné bunky afterrα7 + afterrα7 + afterrα7 + afterrα7 + zhlukované e bunky afterrα7 + T bunky afterrα7 + B bunky afterrα7 + B bunky po Bunky nachrα7 + Th bunky CD14 + CD16 + monocyty nachrα7 + nachrα7 + monocyty Klasické monocyty CD14 ++ CD16 - intermediárne monocyty CD14 ++ CD16 + CD14 + CD16 ++ neklasické monocyty Obrázok 3: Gatingová stratégia na meranie imunitného stavu 34

Metodika 2.8.4.2 T regulačné bunky a súvisiace všetky udalosti Bunkové zvyšky FSC> 20 živých buniek Ostatné bunky CD3- CD3 + T lymfocyty CD8 + CD4 + T supresorové bunky T pomocné bunky CD45RA + CCR4- CD45RA- CCR4 + CD4 + CD25 + Naívne T pomocné bunky Akt.T- Pomocné bunky CD4 + T-regulačné lymfocyty CD127lo CD25 + FoxP3 + FoxP3 + T-reg. Lymfocyty Ostatné FoxP3-CD127lo T-regulačné lymfocyty CD45RA + CCR4- CD127lo naivné T-regulácie. Lymfocyty CD45RA-CCR4 + CD127lo T-regulačné pamäťové bunky Obrázok 4: Gatingová stratégia na meranie populácií T-regulačných lymfocytov 35

Metodika 2.8.4.3 Myeloidné a plazmocytoidné dendritické bunky Všetky udalosti Zvyšky buniek FSC> 20 živých buniek Apopt. Bunky 7-AAD Vitálne bunky Monocyty B bunky CD14 + CD19- CD14- CD19 + CD14- CD19- Non-Mono-Non-B- bunky CD304 + CD11c + CD1c + CD11c + CD141 + CD11c + pdc mdc1 mdc2 CD86 + CD86- CD86 + CD86- CD86 + CD86- Naivný akt pdc Mdc1 Naivný akt mdc1 Mdc2 Naivný akt mdc2 Obrázok 5: Vratová stratégia na identifikáciu dendritických buniek 36

Metodika Používa sa Dunn-Bonferroniho test, ktorý využíva porovnanie párových priemerných hodnôt na získanie informácií o významných rozdieloch medzi jednotlivými dátumami vyšetrenia skupín. Štatistika Friedmanovho testu sa uvádza ako Q, štatistika Dunn-Bonferroniho testu ako z. Veľkosť efektu post-hoc testovania je označená korelačným koeficientom r podľa Pearsona. Pravdepodobnosť chyby p 0,05 sa považovala za významnú, p 0,01 za vysoko významnú a trend sa predpokladal medzi p 0,051 a p 0,099. Na každom obrázku sú priemerné hodnoty skupín zobrazené so štandardnými chybami a * sa považuje za významné a ** je vysoko významné. 51

Výsledky 3 Výsledky 3.1 Základné údaje V čase písania dizertačnej práce sa štúdie zúčastnilo 85 testovaných osôb; Do vyhodnotenia výsledkov bolo možné zahrnúť 14 mužov a 41 žien s priemerným vekom 31 rokov. Pomocou krížových tabuliek a testu Chi² možno vylúčiť významné rozdiely v rozdelení pohlaví. Distribúcie indexu telesnej hmotnosti (BMI) a úrovne vzdelania sa skúmali pomocou testu homogenity odchýlok a jednosmernej ANOVA. Ani tu neboli výrazné rozdiely. Tabuľka 12: Základné údaje všetkých účastníkov štúdie a ich rozdelenie do rôznych skupín (informácie o priemernej hodnote (MW) a štandardnej odchýlke (SD)) Celková tréningová skupina (SND) Kontrolná skupina AD (KND) Kontrolná skupina zdravá (KO) Výsledok stat. Testovanie účastníkov vrátane tých, ktorí predčasne ukončili štúdium 85 45 20 20 Účastníci zahŕňali 55 16 19 20 Pohlavie (muži/ženy), spolu v% 14 (25,5)/41 (74,5) 3 (18,8)/13 (81, 2) 5 (26,3)/14 (73,7) 6 (30)/14 (70) χ² (1) = 0,559, presné p = 0,391 Vek BMI MW SD MW SD 30,83 33,63 29, 53 29,85 11,2 14,19 9,98 9,53 23,41 23,05 24,47 22,71 4,38 4,34 4,83 3,98 Levene p = 0,192 F (1,53) = 0,242, p = 0,624 Levén p = 0,684 F (1,53) = 0,827, p = 0,137 52

Výsledky 3.2 Výsledky štúdie 3.2.1 Primárny cieľový parameter SCORAD Primárnym cieľovým parametrom na vyhodnotenie úspešnosti školenia bol kurz SCORAD po dobu 3 mesiacov. Friedmanov test ukázal významné skupinové rozdiely v skupine SND (Q (2) = 15,5; s