Faktor nekrózy nádorov TNF-alfa - Synevo
Informovanýii Všeobecné a odporúčania na stanovenie TNF-α
TNF (tumor necrosis factor) je prozápalový cytokín, ktorého názov je odvodený od jeho schopnosti ničiť nádorové bunky a indukovať hemoragickú nekrózu u myší po transplantácii. .
TNF-a (kasektín) a TNF-p (lymfotoxín) boli pôvodne opísané ako cytotoxické faktory produkované makrofágmi, respektíve lymfocytmi; Následne sa zistilo, že TNF-a a TNF-p sú dva proteíny, ktoré vykazujú homológiu s 34% aminokyselinových sekvencií 3; 5. Oba mediátory pôsobia na cieľové bunky prostredníctvom rovnakých receptorov, a preto majú podobné, ale nie identické biologické účinky.
Gén TNF-a je lokalizovaný na chromozóme 6. Za denaturačných podmienok je TNF-a neglykozylovaný 17 kDa proteín. Biologicky aktívna forma TNF-a je trimér. Okrem tejto rozpustnej formy existuje aj forma viazaná na membránu (28 kDa), ktorá sa nachádza na povrchu buniek produkujúcich TNF-a a ktorá slúži ako zásoba rozpustnej formy generovanej proteolytickým štiepením 3. .
TNF-a nie je produkovaný iba makrofágmi a monocytmi, ale aj lymfocytmi, žírnymi bunkami, neutrofilmi, keratinocytmi, astrocytmi, mikrogliami, bunkami hladkého svalstva a niektorými líniami nádorových buniek 5. Veľké množstvo TNF sa uvoľňuje pri kontakte makrofágov, CD4 + T lymfocytov a buniek prirodzeného zabíjania (NK) s lipopolysacharidmi, bakteriálnymi produktmi a interleukínom 1 3 .
TNF-a účinkuje priamo cez dva odlišné povrchové receptory, nazývané TNFR I a TNFR II, ktoré majú rôzne molekulové hmotnosti 3; 4; 5. Tieto receptory možno identifikovať na všetkých bunkových typoch okrem erytrocytov. Časti týchto receptorov sú štiepené proteázami a dostávajú sa do extracelulárneho média tvoriaceho rozpustné receptory; pôsobia ako endogénne inhibítory TNF-a a tak regulujú hladinu extracelulárneho TNF-a4 .
Väzba TNF-a na receptor vedie k konformačným zmenám v štruktúre receptora, čo vedie ku kaskádovej aktivácii transkripcie ďalších proteínov podieľajúcich sa na bunkovej proliferácii, zápalovej reakcii a bunkovej apoptóze. TNF-α môže pôsobiť lokálne parakrinne (lokálne zvýšenie koncentrácie TNF môže spôsobiť hlavné príznaky zápalu: začervenanie, bolesť, teplo a opuchy) alebo môže pôsobiť vzdialene, ako endokrinné hormóny 5. Vďaka prítomnosti svojich receptorov vo väčšine tkanív má TNF-α širokú škálu biologických účinkov:
- cytolytické a cytostatické účinky na nádorové bunky;
- chemotaktický účinok na neutrofily 3;
- zvyšuje permeabilitu endotelových buniek v oblasti so zápalom; spôsobujú nielen akumuláciu imunitných buniek, ale majú tiež vplyv na proces zrážania;
- aktivuje rôzne metabolické procesy vo svalových bunkách a adipocytoch na zabezpečenie energie potrebnej na zápalovú reakciu 1;
- v makrofágoch stimuluje fagocytózu a produkciu prostaglandínu E2;
- zvyšuje sa inzulínová rezistencia v iných tkanivách;
- aktivuje osteoklasty, čím stimuluje resorpciu kostí;
- je rastový faktor pre fibroblasty a stimuluje syntézu kolagenázy;
- zosilňuje proliferáciu T lymfocytov po stimulácii interleukínom 2 3;
- spôsobuje anorexiu a horúčku, pôsobí ako endogénny pyrogén 1;
- je zodpovedný za syndróm kachexie spojený s malígnymi procesmi a väčšinou parazitárnych infestácií 5 .
Stanovenie TNF-a v sére je markerom systémovej zápalovej reakcie (SIRS) spojenej so sepsou, traumou a srdcovým zlyhaním. Niektoré štúdie naznačili súvislosť koncentrácie TNF-a v mozgovomiechovom moku so stupňom aktivity pri roztrúsenej skleróze; na druhej strane by stanovenie TNF-α mohlo byť užitočné pri odlíšení bakteriálnej meningitídy od iných príčin meningitídy 1 .
Štúdie na zvieratách preukázali, že TNF-a sa podieľa na patogenéze reumatoidnej artritídy a zápalových ochorení čriev vďaka svojmu prozápalovému účinku aktiváciou endotelových buniek a indukciou chemotaxie neutrofilov. Z tohto dôvodu liečba týchto stavov zahrnuje aj inhibítory TNF-a: buď anti-TNF-a monoklonálne protilátky (infliximab, adalimubab), alebo fúzne proteíny protilátka-receptor, TNFRII-IgG1 (etanercept) 5 .
Hladiny TNF-α možno použiť pri diagnostike porúch imunity a pri monitorovaní liečby, iba v korelácii s doplňujúcimi klinickými a paraklinickými údajmi 2 .
Výcvik pacientov - nalačno (nalačno) alebo po jedle 2 .
Odobratý exemplár - venózna krv 2 .
Zberová nádoba - vacutainer bez antikoagulancia, s/bez separačného gélu 2 .
Zozbierané množstvo - minimálne 0,5 ml ser 2 .
Príčiny odmietnutia dôkazov - vzorka s vysokou hemolyzáciou, žltačkou, lipemickým alebo bakteriálnym znečistením; vzorky, ktoré nedorazili do laboratória, zmrazené 2 .
Po zbere potrebné spracovanie - sérum sa oddelí centrifugáciou čo najskôr po úplnom vytvorení tvarohu a vzorka sa okamžite zmrazí na -20 ° C; vzorky odobraté mimo laboratórnych miest budú prepravené do nádoby určenej na zmrazené vzorky 2 .
Stabilita vzorky - sérum je stabilné 1 mesiac pri -20 ° C; nerozmrazujte/nezmrazujte 2 .
Metóda Imunochemická metóda s chemiluminiscenčnou detekciou (CLIA) 2 .
Referenčné hodnoty 1 - 2 .
Interpretácia výsledkov
Zvýšené hladiny TNF-α sa zaznamenávajú pri sepse, traume, autoimunitných a chronických zápalových ochoreniach (reumatoidná artritída, ankylozujúca spondylitída, Crohnova choroba, psoriáza), infekčných chorobách a odmietnutí štepu 2. .