Mikrobiologická skúška
Dokumenty
1. Mikrobiológia. Predmet štúdia. Mikrobiologické disciplíny a študijné objekty. Historické etapy vývoja mikrobiológie. Úloha vedcov A. Leeuwenhoek, L. Pasteur, R. Koch, I.Mecinicov vo vývoji mikrobiológie.
1. mi/o a ich vitálna aktivita (tvar, štruktúra, metabolizmus, rast a množenie) (identifikácia
2. moje vzťahy s prostredím a s hostiteľským organizmom
1) patogénne, oportunistické = prevencia infekčných chorôb
2) užitočné, neškodné = výroba AB, lieky dRNA (streptokináza, inzulín), potraviny (maslo, syr)
4) výroba biologicky odbúrateľného plastu .
5) rozklad odpadu, metánu
biologické zvláštnosti mi/o
dôsledky pre ľudskú činnosť
Štúdie lekárskej mikrobiológie:
b) patogénne kapacity mi/o
c) protiinfekčné schopnosti ľudského tela
d) metódy etiologickej diagnostiky infekčných chorôb
e) metódy antimikrobiálnej terapie/profylaxie
Historické etapy vývoja mikrobiológie:
I. empirica (pina v sekcii 15)
A. von Leewenhoek: 1673 prvé pozorovanie a opis mi/o
L. Pasteur: príprava vakcín proti antraxu, besnote, cholere; podporuje potrebu sterilizácie nástrojov, obväzovR. Koch: zavedenie pevných kultivačných médií; izolácia antraxu, tbc; vypracovanie teórie o etiologickej úlohe mi/o pri infekčných chorobách (Kochove postuláty)
I. Mecinicov: tvrdenie o úlohe črevnej flóry (antagonizmus); objav fagocytózy a antimikrobiálnej úlohy zápalu
2. Typy mikrobiologických laboratórií a ich úlohy. Režim a pravidlá práce v mikrobiologickom laboratóriu. Klasifikácia laboratórií podľa požiadavky protiinfekčnej bezpečnosti.
3. Pojem mikroorganizmy. Taxonomické kategórie, acelulárne a bunkové typy. Rozdiely medzi prokaryotickými a eukaryotickými mikroorganizmami.
Mi/o = mikroskopické organizmy (mikro-nanometre) + riasy, prvoky, vírusy, antivírusové látky (prióny), mikroskopické huby (huby, huby)
Mi/o klasifikácie: fenotypové (Carl von Linne prvý pokus)
fylogenetika (založená na fosílnych alebo HLA štúdiách)
Taxonomické skupiny: doména (kráľovstvo (vetva (trieda))) (poradie (rodina (rod)) Vnútrošpecifické taxóny v rámci druhu, ktoré vykazujú určité rozdiely:
biovar (biochemická/fyziologická aktivita)
patovar (stupeň patogenity)
lizovar (citlivosť na bakteriofágy)
antibiotikum (citlivosť na AB)
Úloha vnútrodruhových taxónov: epidemiologické markery!
Mi/o klasifikácia: acelulárne formy (vírusy, viroidy, prióny)
baktérie = prokaryoty, eubct
3) mykoplazmy (bez PC)
archaea = prokaryoty, PC bez peptidoglykánu, biotop v extrémnych podmienkach
eukarya = eukaryoty (huby, prvoky)
4. Mikrobiologické metódy diagnostiky a ich podstata. Mikroskopická metóda v diagnostike infekčných chorôb. Typy mikroskopov, praktické použitie, vlastnosti a úloha emulzného oleja.
Mikrobiologické metódy diagnostiky: priama diagnostika (detekcia patogénu alebo jeho produktov)
1. mikroskopické (orientačné) (prítomnosť bct, no, tvar, štruktúra 2. bakteriologické (izolácia čistých bct kultúr, identifikácia a testovanie na AB
3. biologická (experimentálna) (inokulácia patologického produktu u laboratórnych zvierat, spôsobujúca typické ochorenie
4. detekcia Ag mi/o v biologických tekutinách
5. identifikácia AN mi/o technikami molekulárnej biológie
nepriama diagnostika (imunologická)
1. sérodiagnostika (špecifická detekcia a titrácia Ac v sére pacienta
2. intradermoreakcia (zavedenie epidermálneho/intradermálneho mikrobiálneho alergénu; pozitívna reakcia = nástup erytému (špecifická precitlivenosť (opakované stretnutie s Ag))
5. Morfológia baktérií. Morfologické skupiny baktérií. Kresliť. Tinctoriálne znaky baktérií. Základné farbivá používané v mikrobiológii. Metódy farbenia. Praktické uplatnenie.
Bct = mi/o, jednobunkové, prokaryotické, autonómne morfologické skupiny bct:
2. diplo (neisseria = kávové zrno, pneumokoky = kopijovité)
4. streptokok (lant) + enterokok, lakokok5. stafilo (gramezi)
6. zaťaženie (balíčky 8-16-32 coci)
1. baktérie zaoblené konce, netvoria spóry (napr. E. coli)
2. bacil s odrezanými koncami, vytvára spóry, ktoré nepresahujú priemer bunky (napr. B. anthracis); možnosť tvorby reťazca = streptobacily
3. clostridium zaoblené konce, tvoria spóry, ktoré presahujú priemer bunky (napr. C. perfringens)
1. vibrio (napr. V. cholarae) 2. campylo-/helikobakter = 2 apire. aspekt vtáka v lete (napr. C. jejuni)
3. spirillum = cel. tuhé špirály
4. spirochaeta = cel. pružné špirály, 5-25 závitov (napr. Treponema, Leptospira, Borrelia)
polymorfné (Actinomyces, Rickettsia, Chlamydia, Mycoplasma)
6. Fázy a technika prípravy náterov z bakteriálnych kultúr pestovaných na kvapalnom médiu. Technika prípravy náterov z biologických substrátov: nátery zo spúta a odtlačkov prstov. Metódy upevnenia.
Príprava sterov (mikroskopické vyšetrenie) Kroky pri príprave sterov:
1) zobrazenie mikrobiálneho materiálu
3) fixácia (oamoara bct), zvyšuje afinitu k farbivu
4) sfarbenie (zaisťuje kontrast medzi mi/o a pozadím
5) vyšetrenie (optický mikroskop s ponorom)
Tinctorial charakter = moja schopnosť fixovať farbivo
7. Fázy a technika prípravy náterov z bakteriálnych kultúr pestovaných na pevnom médiu. Technika prípravy náterov z biologických substrátov: krv, hnis. Fixačné metódy.8. Bakteriálna bunková štruktúra. Uveďte trvalé (povinné) a nestále (nepovinné) prvky štruktúry. Cytoplazmatická membrána a cytoplazma. Štruktúra, chemické zloženie a biologické funkcie. Metódy zvýrazňovania.
Permanentné prvky: PC, MCt, Ct, nukleoid, ribozómy, mezozómy (G + (E, cytochrómy) Nestále prvky: tobolka, spóra, bičíky, fimbrie, plazmidy, inklúzie buniek
nedostatok cholesterolu, obsahujú molekuly hopanoidu podobné sterolom
bohatší o prot. než eukaryoty (viac funkcií (v eukaryotoch vykonávaných orgánmi))
Katalyzácia PBP transpeptidov a syntéza PC
1. Polopriepustná, selektívna bariéra (jednoduchá difúzia, uľahčená
2. Permeát (aktívny transport
3. E (metabolická aktivita
5. Podieľajte sa na delení buniek
6. Syntéza PG a fosfolipidov
Mezozómy: zvýšenie S MCt (zvýšenie metabolickej aktivity, energie
Prítomnosť: ribozómy, nukleoidy, inklúzie, plazmidy
Úloha Ct: sídlo metabolických procesov
9. Bakteriálna bunková stena, funkcie. Štrukturálne zvláštnosti bunkovej steny grampozitívnych baktérií. Gramovo sfarbenie. Technika a mechanizmus farbenia. Dôležitá prax. Príklady grampozitívnych baktérií.
PC = tuhá škrupina obklopujúca protoplast; Pozostáva z PG.PG = mureín = makromolekulárny heteropolymér, ktorý sa skladá z 2 častí:
Glykánová časť (PZ) = paralelné lineárne reťazce: NAG + NAM
Peptidová časť = 4 * aa peptidy (D a L izoformy) súvisiace s NAM (proteázová ochrana
G-: tetrapeptidy spojené priamo (dvojrozmerné)
G +: tetrapeptidy spojené 5 * interpeptidovými mostíkmi Gly (trojrozmerné)
Štruktúry prítomné iba v prokaryotoch:
1. ac. diaminopimelická (tetrapeptid, G +)
Rozpustné mureínové fragmenty (PG) (interakcia s toll-likeR/CD14R na makrofágoch (sekrécia cytokínov (septický šok))!
1. Ochrana proti osmotickej lýze
3. Faktor patogenity (septický šok)
4. Substitučná ochrana. toxický (AgO, E z periplazmatického priestoru)
5. Cieľ útoku niektorých látok:
Lyzozýmové štiepenie väzieb glykánového reťazca (medzi NAG a NAM)
AB inhibícia procesu transpeptidácie
ihla. teichoici (stanovená NAG), ac. lipoteichoová (fixovaná pomocou MCt) = polyméry ribitolu, glycerol-fosfátu;
záporný elektrický náboj
aktivačný doplnok alternatívnym spôsobom
stimulácia sekrécie cytokínov
Streptococcus pyogenes = prot. M
Staphylococcus aureus = prot. A (zhlukovací faktor), prot. fibronektínové fixátory
10. Bakteriálna bunková stena, funkcie. Konštrukčné vlastnosti steny čo