NMP 22 (marker nádoru močového mechúra) - kvantitatívny test - Synevo
Všeobecné informácie
Rakovina močového mechúra je spomedzi všetkých druhov rakoviny na 4. mieste u mužov a na 8. mieste u žien. S výnimkou hematúrie nie sú u pacientov s nádormi močového mechúra žiadne ďalšie skoré príznaky. Na vylúčenie alebo diagnostiku rakoviny močového mechúra je povinné cystoskopické vyšetrenie. Až donedávna bola cytológia moču jedinou bežne používanou neinvazívnou metódou. Citlivosť a špecifickosť močovej cytológie však závisí od štádia nádoru a morfológie proliferujúcich buniek.
Na detekciu a monitorovanie pokročilého karcinómu močového mechúra je cytológia moču bezpečným nástrojom; rakovinu močového mechúra v počiatočnom štádiu je však možné zistiť iba v asi 30% prípadov 2. Uskutočnilo sa niekoľko pokusov o validáciu rôznych neinvazívnych testov špecifických pre rakovinu močového mechúra, jedným z nich je NMP22 1; 7. .
Proteíny jadrovej matice (NMP) tvoria vnútorný štruktúrny rámec bunkového jadra. Táto matrica slúži ako „kotva“ pre enzymatický aparát zapojený do procesov replikácie DNA, syntézy RNA a väzby hormónov. NMP proteíny tiež hrajú úlohu pri regulácii a koordinácii génovej expresie. Práca Fey a Penmana ukázala, že expresia NMP sa líši v závislosti od typu bunky pôvodu. Na základe tohto pozorovania sa ukázalo, že v sére neoplastických pacientov sú rozpustné proteíny NMP v oveľa vyšších koncentráciách ako u zdravých jedincov. Partin a kolegovia preukázali, že vzor expresie NMP je odlišný v normálnom tkanive prostaty v porovnaní s benígnou hyperpláziou prostaty a rakovinou prostaty. Predchádzajúca práca identifikovala špecifické proteíny NMP pre osteosarkóm, rakovinu hrubého čreva a rakovinu prsníka. Tieto pozorovania naznačujú, že stanovenia NMP môžu byť užitočné pri monitorovaní pacientov s rôznymi nádormi.
Rôzne proteíny NMP majú orgánovú špecifickosť. NMP22 alebo jadrový mitotický proteín (NuMA) sa nachádza v ľudských epiteliálnych bunkách, kde zaisťuje správnu separáciu genetického materiálu počas mitózy. Koncentrácia NMP22 v malígnych uroteliálnych bunkách je až 80-krát vyššia ako v normálnych tkanivách 10. Proteín NMP22 sa uvoľňuje v moči v dôsledku bunkovej apoptózy 9. Na rozdiel od močovej cytológie detekcia antigénu NMP22 nezávisí od obnovenia intaktných buniek 3 .
Existujú dva typy testov pre NMP22 vyvinuté Matritechom: kvantitatívne a kvalitatívne 9 .
Kvantitatívne stanovenie NMP22 sa uskutočňuje enzýmovo viazaným imunosorbentným testom s použitím protilátok, ktoré rozpoznávajú hlavné proteínové sekvencie nukleárneho mitotického proteínu (NuMA). Je potrebná stabilizovaná vzorka moču.
Užitočnosť stanovenia NMP22
- na diagnostické účely u pacientov so symptómami alebo rizikovými faktormi pre prechodný karcinóm močového mechúra (medzná hodnota je 7,5 U/ml) v kombinácii s (a nie namiesto toho) štandardné diagnostické postupy;
- na účely monitorovania pacientov s nádormi močového mechúra po chirurgickom zákroku s cieľom zistiť okultné alebo rýchlo sa opakujúce nádory (medzná hodnota je 10 U/ml) 10 .
Test bol schválený FDA v roku 1996 na použitie pri stanovení prognózy a monitorovania rekurentných nádorov močového mechúra (po operácii). V roku 2000 bol test schválený FDA na diagnostiku nádorov močového mechúra.
Cieľom štúdií bolo zistiť citlivosť a špecifickosť testu v porovnaní s cytológiou moču. Aj keď má cytológia vysokú špecificitu pre rakovinu močového mechúra, jej hlavnou nevýhodou je nízka citlivosť na identifikáciu neinvazívnych nádorov 9 .
V 3 samostatných štúdiách zahŕňajúcich približne 400 pacientov Soloway, Miyanaga a Landman preukázali, že kvantitatívny test NMP22 má celkovú senzitivitu 70 - 81% na detekciu recidivujúcich uroteliálnych nádorov. Pre cytológiu bola hlásená citlivosť 10 - 40%. Dôležitým zistením bolo, že NMP22 má vysokú citlivosť na neinvazívne nádory. Miyanaga a kolegovia teda preukázali, že citlivosť testu na povrchové nádory je 70%.
V porovnaní s cytológiou má NMP22 nižšiu špecificitu. Carpinito, Soloway a Landman uviedli špecificitu 70 - 79% pre NMP22, zatiaľ čo cytológia moču dosiahla špecificitu 90 - 94%. V praxi to naznačuje, že NMP22 generuje oveľa viac falošne pozitívnych výsledkov ako cytológia 9; 12; 13 .
Pokiaľ ide o falošne pozitívne výsledky pre NMP22, Ponsky a Sharma ukázali, že použitie kritérií klinického vylúčenia zvyšuje špecifickosť testu až o 95% a implicitne znižuje počet falošne pozitívnych prípadov. Je tiež potrebné poznamenať, že cystoskopia má všeobecne akceptovanú citlivosť 80 - 85% a je možné, že niektoré z pozitívnych výsledkov pre NMP22 klasifikovaných ako falošne pozitívne sú v skutočnosti pozitívne prípady, ktoré sa pri cystoskopii nezistili.
Kritériá klinického vylúčenia sú tieto:
Soloway a Miyanaga tiež ukázali, že test NMP22 má veľmi dobrú negatívnu prediktívnu hodnotu (86 - 94,9%); to znamená, že získanie negatívneho výsledku naznačuje s veľmi vysokou pravdepodobnosťou absenciu uroteliálneho nádoru 9 .
Účinnosť testu na diferenciálnu diagnostiku hematúrie preukázali 3 štúdie, ktoré zahŕňali viac ako 700 pacientov. Akaza, Miyanaga a Carpinito preukázali, že test NMP22 má citlivosť 85,7-90,9% na diagnostiku uroteliálnych nádorov u pacientov s hematúriou, zatiaľ čo cytológia moču má senzitivitu 50-54,5%.
Pokiaľ ide o sledovanie nádorov močového mechúra, Stampfer a spolupracovníci preukázali, že NMP22 má senzitivitu 67%, lepšiu ako cytológia moču (40%). Citlivosť testu bola navyše stratifikovaná podľa štádia nádoru: 59% pre neinvazívne nádory a 90% pre agresívne 9 .
Výcvik pacientov - test sa neodporúča používať po totálnej cystektómii, ako aj počas prvých 5 dní po invazívnom zákroku (cystoskopia, katetrizácia); odber by sa mal vykonávať medzi 0 a 12 hodinou v prípade monitorovania pacientov po chirurgickom zákroku 10 .
Odobratý exemplár - spontánna vzorka moču 10 .
Zberová nádoba - súprava na zber NMP22 (nádoba so stabilizátorom) 10 .
Zozbierané množstvo - 10 ml moču; stabilizovaný exemplár je modrý/zelený 10 .
Príčiny odmietnutia dôkazov - nestabilizácia vzorky; použitie nevhodného stabilizátora 10 .
Po zbere potrebné spracovanie - moč musí byť stabilizovaný ihneď po odbere 10 .
Stabilita vzorky - 2 týždne pri 2 - 8 ° C. Vzorka nezmrazuje.
Metóda - EIA (imunoenzymatická) 10 .
Detekčný limit: 2,1 U/ml 10 .
Limity a rušenie